四逆湯對(duì)供心保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

四逆湯對(duì)供心保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

根據(jù)這項(xiàng)研究，四逆湯（sd）可以增加心肌的能量?jī)?chǔ)備，改善缺氧期間的軸功能和能量代謝，并維持心肌的能量物質(zhì)。目前SD與供心保存的關(guān)系尚少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在灌洗液、保存液及再灌液中加入SD,以探討SD對(duì)供心冷缺血和再灌注期間ATP的影響,為今后臨床應(yīng)用,提高臨床供心保存質(zhì)量提供理論依據(jù)。1動(dòng)物和小組1.1動(dòng)物和小組健康新西蘭大白兔16只,雌雄不拘,體重(2.62±0.25)kg。隨機(jī)分成兩組,1組為對(duì)照組,2組為實(shí)驗(yàn)組,每組各8只。1.2加65%乙醇、乙醇、干酵母粉、無(wú)乙醇、干味劑的制備四逆湯按附子∶干姜∶甘草以5∶2∶2配伍(廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定),符合藥典(1900年版一部)的藥用規(guī)定。將附子、甘草用水浸泡30min,加入干姜用水煎3次,每次45min,合并濾液,水浴上濃縮成糖漿狀,加95%乙醇使含乙醇量達(dá)50%,攪拌,靜置24h,過(guò)濾,回收乙醇,再濃縮成糖漿狀,加95%乙醇至含乙醇量達(dá)80%,靜置24h,過(guò)濾,回收乙醇,水浴上濃縮至無(wú)乙醇味,保留。用新鮮注射用水將所得之糖漿狀物溶解為注射液(濃度:1mL=1g生藥),密閉,于100℃煮沸40min消毒,保存?zhèn)溆谩?.3主動(dòng)脈與心肌間通量的檢測(cè)用氯胺酮(5～7mg/kg)靜脈麻醉,氣管切開(kāi)插管接呼吸機(jī)輔助呼吸,股動(dòng)脈和頸外靜脈分別穿刺插管測(cè)動(dòng)脈壓(BP)和中心靜脈壓(CVP)。正中劈胸骨切口,測(cè)心包腔溫度。全身肝素化(3mg/kg)后分別于主動(dòng)脈和上、下腔靜脈根部過(guò)帶,主動(dòng)脈根部插灌注針。用活檢針取左室心肌測(cè)ATP。阻斷上、下腔靜脈和主動(dòng)脈,停止呼吸,同時(shí)剪開(kāi)左、右房。1組用4℃UW液(美國(guó)Wisconsin大學(xué)提供,下同),2組用UW+SD液(濃度為10mL/L,下同)行冠狀動(dòng)脈灌洗(溫度:4℃,量:10mL/kg,壓力:8kPa)。然后立即常規(guī)取下心臟。1組于0～4℃UW液,2組于0～4℃UW+SD液中在4℃冰箱內(nèi)保存6h。取左室心肌測(cè)ATP。然后于恒溫37℃的Langendorff模型中用KHB液恒壓灌注30min供心(壓力:8kPa)。其中2組KHB液中加入SD(濃度:10mL/L),再取左室心肌測(cè)ATP。1.4色譜分析測(cè)定采用反相高效液相色譜法測(cè)定。采用反相SherisorbC18色譜柱,紫外線檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,流動(dòng)相為0.05M磷酸胺緩沖液(pH=6.0),流量為0.8mL/min。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均用SPSS10.0forWindows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用xˉ±sxˉ±s表示。各指標(biāo)用兩組間兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn),P<0.05差異有顯著性。2結(jié)果2.1表1顯示了在服用心理學(xué)之前的一般情況，兩組之間的差異沒(méi)有明顯2.2表2顯示了每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的心肌消耗含量測(cè)定的結(jié)果3sd對(duì)供心冷保存和再灌注損傷的影響心臟移植是晚期或進(jìn)展期心臟病人有效的治療方法。由于供心的缺乏,許多病人在等待供心過(guò)程中死亡。改善供心保存質(zhì)量,延長(zhǎng)供心保存時(shí)限是目前供心保存的研究熱點(diǎn),也是增加供心來(lái)源的主要途徑。延長(zhǎng)供心保存時(shí)限有賴于供心缺血期良好的心肌保護(hù)。許多學(xué)者認(rèn)為:心肌保護(hù)與ATP密切相關(guān),心肌ATP含量是衡量細(xì)胞完整性及恢復(fù)可能性的最好指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)以心肌ATP含量作為檢測(cè)指標(biāo),觀察供心冷保存和再灌注過(guò)程中,SD對(duì)心肌ATP含量的影響,從而了解SD對(duì)供心保存和再灌注損傷的保護(hù)作用。結(jié)果顯示:SD能明顯提高供心冷保存和再灌注過(guò)程中的ATP含量,表明其對(duì)供心保存和再灌注損傷具有良好的保護(hù)作用。3.1特殊條件:子被了制度突變供心功能恢復(fù)與供心能量代謝、ATP儲(chǔ)備、合成和消耗密切相關(guān)。ATP減少,需能活動(dòng)受損,Na+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),細(xì)胞腫脹,細(xì)胞器(線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等)也發(fā)生腫脹;而ATP的缺乏又使離子轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生障礙,從而加重了機(jī)能代謝的障礙,使供心功能難以恢復(fù),甚至由于溶酶體膜的通透性增加,溶酶釋放,致細(xì)胞破壞、死亡。冷保存期間,雖然ATP消耗減少,但由于養(yǎng)分和氧的供應(yīng)障礙,有氧代謝停止,線粒體產(chǎn)能障礙,線粒體只能通過(guò)無(wú)氧代謝產(chǎn)生能量。必然導(dǎo)致ATP儲(chǔ)備下降。許多學(xué)者認(rèn)為:當(dāng)ATP含量下降到缺血前的50%時(shí),心肌將產(chǎn)生不可逆的病理變化,使再灌后收縮功能難以恢復(fù)。因此ATP已成為評(píng)價(jià)供心質(zhì)量的最佳指標(biāo)之一。3.2sd對(duì)atp的影響吳偉康等實(shí)驗(yàn)證明:SD能增加ATP儲(chǔ)備,增強(qiáng)缺血心肌在無(wú)氧狀態(tài)下的能量形成,改善缺血時(shí)線粒體功能。SD在心肌缺血時(shí),能保護(hù)心肌線粒體,改善線粒體呼吸功能,無(wú)氧代謝增強(qiáng),產(chǎn)生較多ATP維持細(xì)胞功能。作者以前實(shí)驗(yàn)證實(shí),SD有抗供心冷缺血再灌注損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:再灌注前和再灌注后,實(shí)驗(yàn)組ATP含量均明顯高于對(duì)照組。說(shuō)明SD能增強(qiáng)缺血心肌在無(wú)氧條件下的能量合成,使細(xì)胞內(nèi)維持較高的ATP水平,不僅有利于維持細(xì)胞膜內(nèi)外的離子梯度,減輕鈣超載,減少細(xì)胞水腫