eb病毒在兒童惡性淋巴瘤中的致病機(jī)制

eb病毒在兒童惡性淋巴瘤中的致病機(jī)制

1ebv早期感染細(xì)胞的發(fā)病機(jī)制骨病毒（abv）是1973年驗(yàn)證的人類b病毒。隨后的研究發(fā)現(xiàn),在世界各地正常人群中感染非常普遍,約90%以上的成人血清EBV抗體陽性。大多數(shù)人最初在兒童時(shí)感染EBV并可終生攜帶,EB病毒與人類許多疾病有關(guān)見表1。EBV主要經(jīng)唾液傳播,但有報(bào)道亦可經(jīng)輸血傳播和性活動(dòng)傳播。EBV通過不同方式進(jìn)入相應(yīng)細(xì)胞:通過膜糖蛋白gp350/220與CD21結(jié)合而進(jìn)入B淋巴細(xì)胞,其感染上皮細(xì)胞的方式可能有多種,包括CD21依賴性和CD21非依賴性以及多聚IgA(pIgA)介導(dǎo)方式。此外,EBV包膜糖蛋白復(fù)合體gH-gL也參與EBV對(duì)上皮細(xì)胞的感染。對(duì)于EBV感染T淋巴細(xì)胞有分析認(rèn)為在T細(xì)胞發(fā)育早期表達(dá)CD21分子,也有人認(rèn)為EB病毒通過其他受體感染T細(xì)胞,根據(jù)EBV可通過IgA與IgA受體結(jié)合進(jìn)入上皮,推測EBV可能通過IgG或IgM與T細(xì)胞IgG、IgM受體結(jié)合進(jìn)入T淋巴細(xì)胞,CTL通過吞噬感染EBV的細(xì)胞而使病毒進(jìn)入T細(xì)胞也是一種方式。EBV感染細(xì)胞有兩種形式:即潛伏性感染和增殖性感染。在潛伏性感染中,病毒基因以環(huán)狀游離體和/或整合型形式存在。在一定條件下,如免疫功能低下或某些物理、化學(xué)因素的作用下(紫外線、丁酸、巴豆油、尿嘧啶等),EBV可從潛伏狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋碃顟B(tài)。病毒由潛伏性感染轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋承愿腥臼且粋€(gè)漸進(jìn)的過程,在進(jìn)入增殖周期前,表達(dá)即刻早期基因(BZLF1、BRLF1)、早期基因(BMLF1、BHRF1、BMRF1、BARF1等)以及晚期基因(gp350、gp85和gp110)3種。在潛伏狀態(tài)下,病毒基因表達(dá)主要有:核抗原家族(EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C和EBNALP)、潛伏期膜蛋白家族(LMP1、LMP2A和LMP2B)、EBV編碼的RNA(EBER1和EBER2)。由于疾病的不同,病毒潛伏的狀態(tài)也不同。根據(jù)潛伏狀態(tài)基因表達(dá)可以將其分為3型,見表1。EBV感染人體后,能較長時(shí)間以潛伏狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中而不導(dǎo)致疾病,宿主免疫系統(tǒng)通過固有免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫對(duì)病毒進(jìn)行免疫監(jiān)視,釋放一系列細(xì)胞因子、產(chǎn)生特異性抗體以及CTL的殺傷作用而發(fā)揮抗病毒作用。另一方面,病毒通過自身特定抗原的表達(dá),干擾機(jī)體的正常免疫機(jī)制,而長時(shí)間潛伏于細(xì)胞內(nèi),并在一定條件下,通過病毒基因及編碼產(chǎn)物影響細(xì)胞基因的表達(dá)而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。2相關(guān)疾?。贺悹柤膊「鶕?jù)感染的細(xì)胞類型不同,EBV相關(guān)疾病可分為免疫細(xì)胞性疾病和上皮細(xì)胞性疾病。2.1免疫細(xì)胞疾病2.1.1ebv的擴(kuò)增和免疫相關(guān)基因的形成傳染性單核細(xì)胞增多癥是由EBV感染引起的B淋巴細(xì)胞攜帶EBV基因,并表達(dá)相應(yīng)抗原,刺激殺傷性T細(xì)胞增殖,進(jìn)而引起全身淋巴結(jié)腫大及內(nèi)臟器官病變的一種自限性疾病。EBV在IM時(shí)多為增殖狀態(tài),但也有部分處于潛伏狀態(tài),且以Ⅲ型為主。此病之所以自限性,是由于EBV感染的B淋巴細(xì)胞在不斷增殖的同時(shí),通過釋放完整的病毒顆粒,引起了一系列免疫反應(yīng),包括NK細(xì)胞、TNF-α、IFN-γ、活化的HLA-DR+CD8+T細(xì)胞以及抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)等。EBV可以誘導(dǎo)IL-1、IL-8、MIP-1和LTB4的分泌并通過某種未知途徑激活單核細(xì)胞后,后者可以產(chǎn)生IL-12、IL-15和GM-CSF,其中MIP-1可以募集B細(xì)胞和T細(xì)胞到炎癥部位,因此有利于EBV特異性免疫的產(chǎn)生,LTB4是中性粒細(xì)胞的趨化因子,IL-12和IL-15可以激活NK細(xì)胞,GM-CSF可使中性粒細(xì)胞產(chǎn)生IL-1和過氧化物,產(chǎn)生抗感染效應(yīng),其連同IL-2還能夠誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫。同時(shí)CD4+T細(xì)胞分泌的IL-2能夠上調(diào)NK表面CD95L表達(dá),因此可以通過CD95-CD95L誘導(dǎo)EBV感染的CD95+B細(xì)胞的凋亡。NK細(xì)胞通過表面的CD244和EBV感染的B細(xì)胞表面的CD48結(jié)合而發(fā)揮溶細(xì)胞作用。研究發(fā)現(xiàn),只有潛伏Ⅲ型表達(dá)EBNA2,而EBNA2的作用之一是可以促使啟動(dòng)子Cp表達(dá),從而一系列的潛伏基因被激活,包括EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C(三者具較強(qiáng)的免疫原性,易被CTL識(shí)別殺傷)、LMP1和LMP2。研究表明,機(jī)體免疫功能正常情況下,EBV進(jìn)行增殖性感染時(shí)表達(dá)的相關(guān)基因(BZLF1、BRLF1、BMLF1、BHRF1、BMRF1和BARF1)及蛋白(gp350、gp85和gp110)使病毒感染細(xì)胞成為CTL攻擊的主要目標(biāo)而被殺傷,這可能是此病具有自限性的主要原因。此外還發(fā)現(xiàn)CD4+CTL和γδT細(xì)胞的增加。CD4+CTL殺傷作用機(jī)制主要有CD95-CD95L、顆粒酶/穿孔素、TRAIL、TNF-α及顆粒溶素(Granulysin)途徑。有研究發(fā)現(xiàn),EBV特異性的CD4+T細(xì)胞可以通過CD40依賴途經(jīng)激活EBV潛伏感染的外周血靜息B細(xì)胞,并誘導(dǎo)BZLF1表達(dá),活化CTL。經(jīng)過4~6周,免疫反應(yīng)可使EBV+細(xì)胞顯著減少,IM自愈。2.1.2ebv在腫瘤細(xì)胞毒性分析和病理組織學(xué)檢測①B細(xì)胞淋巴瘤。EBV相關(guān)的B細(xì)胞淋巴瘤大部分是Burkitt型,即下面提到的Burkitt淋巴瘤(BL),一部分是彌漫性大細(xì)胞型,一部分是免疫功能低下型,也包括日本人好發(fā)的膿胸后淋巴瘤。BL分為地方性、散發(fā)性和AIDS相關(guān)性3種。調(diào)查發(fā)現(xiàn),95%以上地方性發(fā)病與EBV有關(guān),并往往伴有瘧疾感染,15%~88%散發(fā)性病例與EBV有關(guān),大約30%~40%AIDS相關(guān)性BL與EBV有關(guān)。EBV如何在BL中發(fā)揮作用目前還不清楚。但有研究發(fā)現(xiàn),在此瘤中?？梢娙旧w易位,有t(8,14)、t(2,8)、t(8,22)等,分別產(chǎn)生融合基因c-myc/IgH、c-myc/Igκ和c-myc/Igλ,從而導(dǎo)致c-myc原癌基因的激活,引起Myc癌蛋白的增高,形成B細(xì)胞的單克隆性增生,產(chǎn)生B細(xì)胞淋巴瘤。研究表明,該過程可能與EBV表達(dá)的相關(guān)抗原有關(guān):核抗原EBNA1激活重組酶RAG-1和RAG-2的表達(dá),表明EBV的感染增加了基因易位發(fā)生的可能性。有證據(jù)表明,Tcl-1(T-cellleukemia1)癌基因的表達(dá)是所有BL的共同特征,而EBV則與Tcl-1的表達(dá)有關(guān)。體外研究發(fā)現(xiàn)EBV感染可使癌基因pim-1和pim-2表達(dá)上調(diào),而pim-1和pim-2可增強(qiáng)EBNA2的活性,兩者均可增加瘤變傾向。值得一提的是,在BL的發(fā)展過程中,EBV感染潛伏型也從開始的Ⅲ型轉(zhuǎn)變?yōu)棰裥?期間雖也表達(dá)EBNA2,但由于瘧疾導(dǎo)致的T細(xì)胞受抑制而逃避免疫殺傷,進(jìn)一步發(fā)展成腫瘤。偶有報(bào)道其他癌基因的改變?nèi)鏲-fps/c-fes和p53,其中大約30%的BL中發(fā)現(xiàn)有p53的突變,使其喪失誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能。最近有報(bào)道表明EBER可能在維持BL瘤細(xì)胞惡性表型上起到了關(guān)鍵的作用。EBER在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中保持了自身的克隆性和對(duì)裸鼠的致瘤性,并能阻止細(xì)胞凋亡,促進(jìn)B細(xì)胞的增殖,還可使IL-10表達(dá)增加,而IL-10可通過下調(diào)細(xì)胞毒性T細(xì)胞對(duì)EBV+B細(xì)胞的反應(yīng)而加快細(xì)胞增殖。有研究發(fā)現(xiàn)EBV感染的Burkitt淋巴瘤細(xì)胞下調(diào)了對(duì)于CTL發(fā)揮殺傷作用很重要的幾種蛋白:用于抗原提呈的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)、細(xì)胞表面黏附分子和MHCⅠ類分子,從而使EBV感染的瘤細(xì)胞逃避CTL的殺傷。此外,其他因素亦與B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),如CyclinD1的過表達(dá)、一些細(xì)胞因子的作用、細(xì)胞的狀態(tài)等。②霍奇金淋巴瘤(HL)。大約40%~50%的HLEBV+病人血清中檢測到高滴度的抗VCA和EA抗體。對(duì)于HL的細(xì)胞起源眾說不一。目前主要有3種:B細(xì)胞來源;T細(xì)胞來源;樹突狀細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞來源。Sein等對(duì)HL細(xì)胞分子生物學(xué)水平的研究表明:多數(shù)病例中R-S細(xì)胞表現(xiàn)為生發(fā)中心晚期B細(xì)胞過度增生,且這種B細(xì)胞丟失其表達(dá)Ig的功能,少數(shù)HL病例中R-S細(xì)胞由于表面表達(dá)T細(xì)胞抗原和/或細(xì)胞毒分子而認(rèn)為起源于T淋巴細(xì)胞。在正常條件下,不能表達(dá)Ig的B細(xì)胞經(jīng)凋亡而被清除,而在許多起源于B細(xì)胞的HL中,細(xì)胞由于突變而丟失其表達(dá)Ig的功能不發(fā)生凋亡,認(rèn)為EBV可能在此起作用。Ohshima等發(fā)現(xiàn)在霍奇金淋巴瘤中病毒基因僅以游離體形式存在,未發(fā)現(xiàn)整合型病毒基因存在。研究發(fā)現(xiàn)R-S細(xì)胞表面表達(dá)的LMP1與B95-8來源的LMP1在基因結(jié)構(gòu)上不同,前者除了一些點(diǎn)突變外,在C端有132bp的插入序列,這些序列編碼44個(gè)氨基酸。在功能上與B95-8來源的LMP1相比較可以使嚙齒類成纖維細(xì)胞Rat1發(fā)生轉(zhuǎn)化。研究認(rèn)為,EBV感染人體后產(chǎn)生的LMP1具有癌基因的特性,參與復(fù)雜的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),對(duì)HL的形成起著很重要的作用。LMP1是EBV引起細(xì)胞增殖的最為重要的物質(zhì),它一方面通過誘導(dǎo)Bcl-2、Bfl-1、A-20等抗凋亡基因阻止細(xì)胞進(jìn)入程序性死亡;另一方面通過上調(diào)c-myc、IL-6、IL-10等促進(jìn)細(xì)胞的生長增殖,最終發(fā)生腫瘤。LMP1可上調(diào)多種基因,包括CD23、CD39、CD40,MHCⅡ類分子及細(xì)胞黏附分子LFA1、LFA3、ICAM1。有報(bào)道認(rèn)為CD99下調(diào)是H-RS細(xì)胞產(chǎn)生的基本要求,而LMP1的高表達(dá)可導(dǎo)致CD99的下調(diào)。最近,在HL中發(fā)現(xiàn)新的凋亡抑制因子Bcl-X(L),94%的HL中Bcl-X(L)為陽性,且大多數(shù)RS細(xì)胞為高強(qiáng)度表達(dá)。在HL中,LMP1和LMP2表達(dá)均上調(diào),但卻不被CTL殺死,可能是:CTL對(duì)H-RS細(xì)胞的選擇作用,即H-RS細(xì)胞出現(xiàn)新的變異株而逃避特異性CTL反應(yīng);EBV阻止宿主局部CTL細(xì)胞源性反應(yīng),主要通過LMP1上調(diào)IL-10表達(dá),抑制局部免疫反應(yīng)而逃避免疫監(jiān)視;T細(xì)胞淋巴瘤和NK細(xì)胞淋巴瘤。一直以來認(rèn)為EBV與B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生有關(guān)。1988年,Jones在T細(xì)胞淋巴瘤(TCL)中發(fā)現(xiàn)了EBV基因組。之后很多研究均表明部分T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生也與EBV感染有關(guān)。T細(xì)胞淋巴瘤在亞洲地區(qū)的發(fā)病率較高。包括淋巴結(jié)TCL和淋巴結(jié)外TCL兩種類型。兩者均為EBER1陽性T細(xì)胞增生,EBVDNA為單克隆性并有TCR重排。EBV相關(guān)淋巴結(jié)外T細(xì)胞淋巴瘤有高度部位限制性口、鼻部的T細(xì)胞淋巴瘤較為常見,肺和胃腸淋巴瘤很少有皮膚T細(xì)胞淋巴瘤。T細(xì)胞是EBV的受納細(xì)胞,EBV的DNA在T細(xì)胞中保持線性分子的結(jié)構(gòu),不發(fā)生環(huán)化,EBV在T細(xì)胞內(nèi)增殖性感染。對(duì)于NK細(xì)胞淋巴瘤,鼻部NK細(xì)胞淋巴瘤作為一個(gè)單獨(dú)病種,幾乎均與EBV有關(guān),并且在亞洲特別是我國較普遍。研究發(fā)現(xiàn),在EBV+的T細(xì)胞和NK細(xì)胞表面均同時(shí)表達(dá)CD40和CD40L,CD40-CD40L之間的相互作用對(duì)維持被EBV感染T和NK細(xì)胞的存活有重要意義。此外,Liu等研究發(fā)現(xiàn)LMP1在鼻T/NK細(xì)胞淋巴瘤中通過上調(diào)整合素亞單位αM而增加其血管侵襲性。2.2上皮細(xì)胞疾病2.2.1ebv在精血藥酶基因檢測方面的應(yīng)用1970年,ZurHa-usen從鼻咽癌患者中發(fā)現(xiàn)EBV-DNA。研究認(rèn)為鼻咽癌的發(fā)生與環(huán)境、遺傳、病毒三者作用有關(guān),并且有明顯的地域性和種族性差異。WHO根據(jù)組織類型將鼻咽癌分為:鱗狀上皮型;未角化上皮型;未分化上皮型3種,其中未分化上皮型鼻咽癌與EBV有密切關(guān)系。通常情況下,EBV進(jìn)入增殖狀態(tài)表達(dá)即刻早期基因、早期基因等易被CTL識(shí)別殺傷,而增殖感染集中發(fā)生在上皮和口咽部局部浸潤的B細(xì)胞中,潛伏感染狀態(tài)下的NPC、BL等惡性腫瘤亦可有部分細(xì)胞進(jìn)入增殖狀態(tài)而表達(dá)此類基因。然而,只有高分化的上皮細(xì)胞才支持病毒的增殖復(fù)制,這樣,在未分化上皮型鼻咽癌患者中,EBV處于潛伏狀態(tài)而不易被CTL清除?，F(xiàn)在認(rèn)為,人群中MHC分子的多態(tài)性也是導(dǎo)致特定人群易感染EBV而致癌的因素之一,MHC分子不能處理和提呈突變的LMP1多肽給CTL而逃避免疫監(jiān)視。在NPC中,EBV表達(dá)BamHI-Arightwardtranscripts(BARTs)、EBER、EBNA1、LMP1和LMP2。研究認(rèn)為EBNA1可能在EBV潛伏狀態(tài)的維持和DNA復(fù)制中發(fā)揮作用。此外,在體內(nèi),EBNA1能阻止蛋白酶對(duì)其自身的降解和MHCI類分子限制性抗原提呈,從而防止EBV感染的細(xì)胞被CTL殺傷。LMP1在EBV致NPC機(jī)制中亦發(fā)揮重要作用。Nitta等研究發(fā)現(xiàn)從鼻咽癌患者中獲得的CAO-LMP1氨基酸構(gòu)成與B95-8來源的LMP1不同,特別是CAO-LMP1跨膜結(jié)構(gòu)域中的Ile85Leu和Phe106Tyr及其他12個(gè)氨基酸組成,可使病毒感染細(xì)胞不發(fā)生死亡且可促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)化,增強(qiáng)致瘤作用。此外,還發(fā)現(xiàn)在我國大陸LMP1的內(nèi)切酶XhoI位點(diǎn)丟失的變異型檢出率達(dá)97%~100%,并認(rèn)為此變異型為中國人鼻咽癌所特有。LMP1在NPC中主要作用表現(xiàn)在:①誘導(dǎo)A20的表達(dá),從而抑制鼻咽癌細(xì)胞分化。②一般情況下,p53發(fā)生自身突變而喪失其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮作用。在NPC中發(fā)現(xiàn),通過LMP1上調(diào)A20來阻斷p53導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡,LMP1亦可激活TRAF通路直接阻斷腫瘤壞死因子TNFα介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。最近研究發(fā)現(xiàn),LMP1可通過Survivin信號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮抗凋亡作用,從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。③LMP1可通過NF-κB使EGFR高表達(dá),使上皮生長失調(diào),誘發(fā)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化。④LMP1還能影響細(xì)胞信號(hào)通路,使被EBV感染的細(xì)胞逃避宿主的免疫監(jiān)視。研究表明LMP1能快速激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB,并能激活Ras/MAPK激酶依賴通道和JNK/AP-1通道,使人胚胎細(xì)胞HEK293無限制生長。最新研究發(fā)現(xiàn),潛伏感染Ⅲ型的細(xì)胞中,LMP1的表達(dá)能誘導(dǎo)STAT-1、STAT-2和STAT-3的表達(dá),其中STAT-1與EBV轉(zhuǎn)化有關(guān),STATs蛋白在某些特定腫瘤的產(chǎn)生與維持中發(fā)揮關(guān)鍵作用。⑤LMP1可下調(diào)E-鈣粘素和β-鏈接素的表達(dá),增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲性。⑥LMP1能促進(jìn)鼻咽癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Horikawa發(fā)現(xiàn)LMP1能誘導(dǎo)C-Met原癌基因的表達(dá),后者能促進(jìn)鼻咽癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。另有資料表明,LMP2A能通過PI3K/Akt途徑介導(dǎo)細(xì)胞的抗凋亡。最近研究發(fā)現(xiàn),LMP2A還可以通過上調(diào)整合素α6(ITGalpha6)而促進(jìn)鼻咽癌的轉(zhuǎn)移。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為,BARF1作為一種早期基因僅表達(dá)于EBV增殖性感染狀態(tài),而Seto等研究發(fā)現(xiàn),在鼻咽癌及EBV