細胞核系統(tǒng)的控制中心說課稿及細胞計數(shù)方法-細胞計數(shù)板法

《細胞核——系統(tǒng)的控制中心》說課稿各位老師，大家好！今天我要說課的內(nèi)容是細胞核——系統(tǒng)的控制中心。下面我將從以下幾個方面來對本課進行說明。首先我對本課題教材進行分析：一、說教材：本節(jié)是人教版高中生物必修一第三章第三節(jié)的內(nèi)容，學生是在前兩節(jié)學習了有關(guān)細胞膜和細胞器知識的基礎(chǔ)上，進一步了解細胞的結(jié)構(gòu)和功能，通過學習本課，學生對細胞的結(jié)構(gòu)和功能的認識更加全面完整，對“結(jié)構(gòu)和功能相統(tǒng)一”的觀念有了進一步認識。其中的幾個經(jīng)典的實驗，也讓學生體驗了生物學研究的一般方法和過程。同時也為以后學習細胞分裂、必修二遺傳和變異的相關(guān)知識奠定基礎(chǔ)。計劃用1課時完成。根據(jù)本教材的結(jié)構(gòu)和內(nèi)容分析，我從知識、能力、情感三方面確定了如下教學目標：知識方面（1）闡明細胞核的結(jié)構(gòu)和功能以及結(jié)構(gòu)和功能相適應(yīng)的關(guān)系（2）嘗試制作真核細胞的三維結(jié)構(gòu)模型。能力方面（1）分析各實驗的資料，體驗科學工作的方法和過程，培養(yǎng)學生設(shè)計實驗、分析實驗結(jié)果的能力。情感態(tài)度與價值觀方面（1）通過細胞核結(jié)構(gòu)和功能的學習，形成結(jié)構(gòu)和功能相適應(yīng)的觀點。（2）認同細胞核是細胞生命系統(tǒng)的控制中心本著高一新課程標準，在吃透教材基礎(chǔ)上，我確定了本節(jié)內(nèi)容的教學重點難點如下：教學重點（1）細胞核的結(jié)構(gòu)和功能（2）制作細胞核的三維結(jié)構(gòu)模型教學難點理解細胞核細胞生命細胞的控制中心其次對學生進行分析：二、說學生：本節(jié)的授課對象是高一的學生經(jīng)過初中階段的學習，學生對細胞的整體結(jié)構(gòu)如細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核有了初步認識，通過前面幾節(jié)內(nèi)容的學習，學生對細胞膜和細胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能有了進一步認識，在腦子中能呈現(xiàn)出細胞亞顯微結(jié)構(gòu)的三維圖，加深“結(jié)構(gòu)和功能相統(tǒng)一”的觀念。為本節(jié)學習作了鋪墊。根據(jù)上述對教材和學生情況的分析，為了使學生能夠達到上述教學目標，突破重難點，我再從教法和學法上談一下：三、說教法和學法：教法：采用講授法、引導發(fā)現(xiàn)法、探究研討法進行教學。學法：自主學習、探究學習、合作學習說完了教法和學法，接下來我將具體說一下本次說課的第四部分―――教學設(shè)計，這一部分我將分為三個環(huán)節(jié)：四、說教學過程：第一個環(huán)節(jié)：憶舊思新，導入新課首先引導學生回顧細胞質(zhì)內(nèi)各個細胞器的分工協(xié)作、產(chǎn)生分泌蛋白的過程；同時思考：為什么這些細胞器可以這樣有條不紊的密切協(xié)作？這中間有沒有專門起協(xié)調(diào)和控制作用的部門？從而導入本節(jié)內(nèi)容。第二個環(huán)節(jié)：自主學習、問題導學，講授新課通過學生閱讀課本、小組討論及師生共同分析“資料分析”中的4個實驗，總結(jié)出細胞核的功能，即細胞核是遺傳信息庫，控制細胞代謝和遺傳的功能。在此基礎(chǔ)上，向?qū)W生舉出克隆羊多莉的實例，加強理解。設(shè)疑過渡：那么細胞核為什么能成為細胞代謝和遺傳的控制中心？要弄清這個問題，我們必須從細胞核的結(jié)構(gòu)中尋找答案，從而引出細胞核的結(jié)構(gòu)。在這部分，引導學生思考以下幾個問題：（1）細胞核能控制細胞的遺傳，說明其應(yīng)該有什么物質(zhì)？（2）含有DNA的結(jié)構(gòu)如線粒體、葉綠體，它們的外面都有什么相同的結(jié)構(gòu)？（3）細胞核能控制細胞，肯定要與外界聯(lián)系，如何能辦到？（4）學習RNA的分布時，RNA主要分布在細胞質(zhì)，少量還分布在哪里呢？（5）核糖體的形成與哪個結(jié)構(gòu)有關(guān)？對于這部分比較抽象的概念，如DNA、染色體、染色質(zhì)等概念，提出問題：染色質(zhì)是否等同于DNA呢？染色質(zhì)與染色體異同點及關(guān)系？引導學生討論交流，同時用表格總結(jié)歸納其中的關(guān)系。這部分可以使用一些圖片和動畫來加強直觀教學。細胞代謝旺盛時，核孔的數(shù)目以及核仁的體積會發(fā)生怎樣的變化？為什么？通過這一問題的思考和回答，加深對結(jié)構(gòu)和功能相統(tǒng)一這一觀點的理解。第三環(huán)節(jié)：總結(jié)提高，練習反饋，動手制作，鞏固知識將知識系統(tǒng)化，明確重點、難點，置疑解惑。練習時突出最本質(zhì)、最主要的知識，依據(jù)因材施教、教學信息及時反饋的原則，在出示練習題時，分為鞏固題和運用題。鞏固題考察學生對原材料的再認再現(xiàn)，運用題考察學生對知識的理解和運用能力。為了加強理解，安排學生以小組為單位制作真核細胞的三維結(jié)構(gòu)模型，并在下節(jié)課安排時間交流、互評作品，從而更進一步地理解這部分的內(nèi)容細胞計數(shù)方法------細胞計數(shù)板法實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。具體操作：1.將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板。2.將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。3.計算板四大格細胞總數(shù)，壓線細胞只計左側(cè)和上方的。然后按公式計算：細胞數(shù)/mL=四大格細胞總數(shù)/4×10個/ml(注：當細胞很多時，可在四個格中選一定數(shù)目較平均的小格，由于每大格中有16個小格，然后計左側(cè)和上方的細胞數(shù)，求出每小格的細胞數(shù)，取平均值m，m×16即每個格的平均值。所以，細胞密度=m×16×10個/ml)說明：公式中除以4，因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。公式中乘以10因為計數(shù)板中每一個大格的體積為：1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）=0.1mm而1ml=1000ul=1000mm（注意：鏡下偶見有兩個以上細胞組成的細胞團，應(yīng)按單個細胞計算，若細胞團10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液。）================================================細胞計數(shù)板的使用一、血球計數(shù)板-基本構(gòu)造血球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個槽構(gòu)成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各刻有一小方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分九個大格，中央的一大格作為計數(shù)用，稱為計數(shù)區(qū)。計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。計數(shù)區(qū)邊長為1mm，則計數(shù)區(qū)的面積為1mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個計數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。使用細胞計數(shù)板計數(shù)時，先要測定每個小方格中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數(shù)量。二、細胞計數(shù)板-使用方法1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋100倍），以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。2．取潔凈的細胞計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。3．將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上（不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計數(shù)區(qū)深度的升高），然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。4．靜置片刻，使細胞沉降到計數(shù)板上，不再隨液體漂移。將細胞計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應(yīng)減弱光照的強度。5．計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個大方格組成，按對角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數(shù)。如果是25個大方格組成的計數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個大方格外，還需數(shù)中央1個大方格的菌數(shù)（即80個小格）。為了保證計數(shù)的準確性，避免重復計數(shù)和漏記，在計數(shù)時，對沉降在格線上的細胞的統(tǒng)計應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格，本格的下線和右線上的細胞按規(guī)定計入相應(yīng)的格中。見下圖：即本格中計數(shù)細胞為3個。6．對于出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數(shù)2-3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否則應(yīng)重新操作），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含細胞數(shù)量。7．測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將細胞計數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干，放入盒內(nèi)保存。三、細胞計數(shù)板-計數(shù)公式1、16格×25格的細胞計數(shù)板計算公式：細胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)細胞個數(shù)/100×400×10000×稀釋倍數(shù)1、25格×16格的細胞計數(shù)板計算公式：細胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)細胞個數(shù)/80×400×10000×稀釋倍數(shù)四、血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差,力求準確?血細胞計數(shù)的誤差分別來源于技術(shù)誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利，器材處理、使用不當，稀釋不準確，細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術(shù)誤差；而由于儀器（計數(shù)板、蓋片、吸管等）不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差，由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數(shù)誤差屬于分布誤差或計數(shù)域誤差（filederror）。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差。技術(shù)誤差和儀器誤差可通過規(guī)范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正，但細胞分布誤差卻難于徹底消除。因此，搞好紅細胞計數(shù)的質(zhì)量控制一般需采用以下措施。1．避免技術(shù)誤差，糾正儀器誤差（1）所用器材均應(yīng)清潔干燥，計數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求或經(jīng)過校正。①計數(shù)板的鑒定：要求計數(shù)室的臺面光滑、透明，劃線清晰，計數(shù)室劃線面積準確。必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數(shù)室的邊長與底面積，用微米千分尺測量計數(shù)室的深度。美國國家標準局（NBS）規(guī)定每個大方格邊長的誤差應(yīng)小于1%，即1±0.01mm，深度誤差應(yīng)小于2%，即0.1±0.002mm。若超過上述標準，應(yīng)棄之不用。②血蓋片應(yīng)具有一定的重量，平整、光滑、無裂痕，厚薄均勻一致，可使用卡尺多點測量（至少在9個點），不均勻度在0.002mm之內(nèi)。必要時采用平面平行儀進行測量與評價，要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋。最簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的時間不脫落，落下時呈弧線形旋轉(zhuǎn)，表示蓋片平整、厚薄均勻。同時，合格的蓋片放置在計數(shù)室表面后，與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后，在掠射光線下觀察，如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求。③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血，除注意定點購買使用信譽較好廠家的產(chǎn)品外，還應(yīng)對每一批量的采血管進行抽樣檢查，可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正，誤差不應(yīng)超過±1%。（2）紅細胞稀釋液應(yīng)等滲、新鮮、無雜質(zhì)微粒。（3）嚴格操作，從消毒、采血、稀釋、充池到計數(shù)都應(yīng)規(guī)范，尤其應(yīng)注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻，又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞。必須一次性充滿計數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。（4）報告法定計量單位。2．縮小計數(shù)域誤差或分布誤差由于血細胞在充入計數(shù)室后呈隨機分布或稱Poisson分布（），而我們所能計數(shù)的細胞分布范圍是有限的，由此造成的計數(shù)誤差稱為計數(shù)域誤差或分布誤差?？s小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數(shù)范圍和計數(shù)數(shù)目，一般先進行誤差估計，然后決定所需計數(shù)的數(shù)目和計數(shù)范圍，只要能將誤差控制在允許范圍內(nèi)即可。Berkson指出，當使用同一支吸管、同一面計數(shù)室，計數(shù)0.2mm2面積的細胞數(shù)，有望將CV控制在可接受的7%以內(nèi)。對于紅細胞計數(shù)而言，由于紅細胞數(shù)量較多，在計數(shù)室中顯得比較“擁擠”，根據(jù)Poisson公式推斷，。欲將誤差控制在變異百分數(shù)5%以內(nèi)，至少需要在計數(shù)室中計數(shù)400個紅細胞，因此要求計數(shù)五個中方格的紅細胞。事實上Berkson還通過實驗證明，紅細胞的計數(shù)域誤差為s=0.92，較理論誤差（Poisson分布誤差）要小。3．排除異常標本的干擾白細胞數(shù)量在正常范圍時，相對于紅細胞數(shù)量來講，其影響可忽略，但如白細胞過高（>100×109/L），則應(yīng)對計數(shù)結(jié)果進行校正。方法是：①實際RBC=計得RBC-WBC。如當紅細胞換算后為3.5×1012/L、白細胞換算后為100×109/L時，病人實際紅細胞數(shù)應(yīng)為3.4×1012/L。②在高倍鏡下計數(shù)時，避開有核細胞。有核細胞體積比正常紅細胞大，中央無凹陷，無草黃色折光，可隱約見到細胞核。此外，當病人急性嚴重貧血時網(wǎng)織紅細胞可提前大量釋放，也給紅細胞計數(shù)帶來一定的干擾，而且影響網(wǎng)織紅細胞絕對值計算結(jié)果。其校正方法有待探討。UsingaCountingChamberFormicrobiology,cellculture,andmanyapplicationsthatrequireuseofsuspensionsofcellsitisnecessarytodeterminecellconcentration.Onecanoftendeterminecelldensityofasuspensionspectrophotometrically,howeverthatformofdeterminationdoesnotallowanassessmentofcellviability,norcanonedistinguishcelltypes.Adeviceusedfordeterminingthenumberofcellsperunitvolumeofasuspensioniscalledacountingchamber.Themostwidelyusedtypeofchamberiscalledahemocytometer,sinceitwasoriginallydesignedforperformingbloodcellcounts.

Topreparethecountingchamberthemirror-likepolishedsurfaceiscarefullycleanedwithlenspaper.Thecoverslipisalsocleaned.Coverslipsforcountingchambersarespeciallymadeandarethickerthanthoseforconventionalmicroscopy,sincetheymustbeheavyenoughtoovercomethesurfacetensionofadropofliquid.Thecoverslipisplacedoverthecountingsurfacepriortoputtingonthecellsuspension.ThesuspensionisintroducedintooneoftheV-shapedwellswithapasteurorothertypeofpipet.Theareaunderthecoverslipfillsbycapillaryaction.Enoughliquidshouldbeintroducedsothatthemirroredsurfaceisjustcovered.Thechargedcountingchamberisthenplacedonthemicroscopestageandthecountinggridisbroughtintofocusatlowpower.Itisessentialtobeextremelycarefulwithhigherpowerobjectives,sincethecountingchamberismuchthickerthanaconventionalslide.Thechamberoranobjectivelensmaybedamagediftheuserisnotnotcareful.OneentiregridonstandardhemacytometerswithNeubauerrulingscanbeseenat40x(4xobjective).Themaindivisionsseparatethegridinto9largesquares(likeatic-tac-toegrid).Eachsquarehasasurfaceareaofonesquaremm,andthedepthofthechamberis0.1mm.Thustheentirecountinggridliesunderavolumeof0.9mm-cubedSuspensionsshouldbediluteenoughsothatthecellsorotherparticlesdonotoverlapeachotheronthegrid,andshouldbeuniformlydistributed.Toperformthecount,determinethemagnificationneededtorecognizethedesiredcelltype.Nowsystematicallycountthecellsinselectedsquaressothatthetotalcountis100cellsorso(numberofcellsneededforastatisticallysignificantcount).Forlargecellsthismaymeancountingthefourlargecornersquaresandthemiddleone.Foradensesuspensionofsmallcellsyoumaywishtocountthecellsinthefour1/25sq.mmcornersplusthemiddlesquareinthecentralsquare.Alwaysdecideonaspecificcountingpattertoavoidbias.Forcellsthatoverlaparuling,countacellas"in"ifitoverlapsthetoporrightruling,and"out"ifitoverlapsthebottomorleftruling.

HereisawaytodetermineaparticlecountusingaNeubauerhemocytometer.Supposethatyouconductacountasdescribedabove,andcount187particlesinthefivesmallsquaresdescribed.Eachsquarehasanareaof1/25mm-squared(thatis,0.04mm-squared)anddepthof0.1mm.Thetotalvolumeineachsquareis(0.04)x(0.1)=0.004mm-cubed.Youhavefivesquareswithcombinedvolumeof5x(0.004)=0.02mm-cubed.Thusyoucounted187particlesinavolumeof0.02mm-cubed,givingyou187/(0.02)=9350particlespermm-cubed.Thereare1000cubicmillimetersinonecubiccentimeter(sameasamilliliter),soyourparticlecountis9,350,000pe