針灸治療單純性肥胖患者的腸道菌群分析

針灸治療單純性肥胖患者的腸道菌群分析

胖是由能量代謝平衡失衡、攝入過多和（或）能耗不足引起的，以及體內(nèi)脂肪的過度積聚引起的體重超過特定區(qū)域的營養(yǎng)和代謝障礙引起的。我國成人超重率為22.8%,肥胖率為7.1%,肥胖癥已經(jīng)嚴(yán)重影響人們的生活。近年報(bào)道發(fā)現(xiàn)肥胖與腸道菌群失調(diào)密切相關(guān),而針灸減肥以其副反應(yīng)小、安全等優(yōu)勢(shì)受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注。但針灸減肥是否能調(diào)控腸道菌群,尚缺乏研究。本文通過對(duì)單純性肥胖患者進(jìn)行針灸治療,選取臨床治愈及顯效患者,以及年齡、性別相匹配的健康志愿者,分析其腸道菌群的變化規(guī)律?，F(xiàn)將報(bào)告如下。1數(shù)據(jù)和方法1.1病例選擇選擇標(biāo)準(zhǔn)本研究的全部病例均來源于2009年5月～2010年10月成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院針灸門診收治的患者36例,其中男12例,女24例,年齡20～60歲,平均年齡39.89±12.88歲。參照1997年第五屆全國肥胖病研究學(xué)術(shù)會(huì)議制定的單純性肥胖癥診斷標(biāo)準(zhǔn),納入病例。入選者納入標(biāo)準(zhǔn):體重指數(shù)(BMI)≥25kg/m2;治療前3個(gè)月沒有服用減肥藥;排除標(biāo)準(zhǔn):合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病;長期使用激素類藥物、口服避孕藥者;肥胖呈急性過程,過敏體質(zhì)或暈針者。1.2穴位同證治療對(duì)單純性肥胖患者首先進(jìn)行辨證分型,基于中醫(yī)診斷結(jié)果選取中脘、水分、氣海、天樞、大橫、水道、腎俞、脾俞等穴位,并隨證加減。留針30分鐘,隔天針灸1次,10次為1療程。間隔5天后,開始下一個(gè)療程,共治療3個(gè)療程。在治療前及每個(gè)療程后收集患者大便標(biāo)本,進(jìn)行腸道菌群培養(yǎng),同時(shí)記錄體重。1.3體質(zhì)量下降療效療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):按照《中藥新藥治療肥胖病的臨床研究指導(dǎo)原則》中單純性肥胖病的療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。近期痊愈:體質(zhì)量下降已達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量或超質(zhì)量范圍內(nèi),有關(guān)癥狀消失,持續(xù)3個(gè)月以上。顯效:體質(zhì)量下降5kg以上或脂肪百分率下降5%以上,有關(guān)癥狀基本消失。有效:體質(zhì)量下降3kg以上或脂肪百分率下降l%以上,有關(guān)癥狀減輕。無效:體質(zhì)量下降未達(dá)3kg及脂肪百分率下降未達(dá)1%,有關(guān)癥狀未減輕。2實(shí)驗(yàn)方法菌群檢測(cè)與方法,參考丁維俊等的文獻(xiàn)完成操作。2.1樣本收集和保存在清晨收集患者和健康志愿者的糞便標(biāo)本約0.5g置于盛有4.5ml硫乙醇酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)液試管中,將標(biāo)本凍存于-150℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2前及治療后的大樣選擇針灸治療痊愈/顯效者的患者治療前及治療后的大便樣本。同時(shí)選取年齡、性別與生活狀態(tài)相匹配的健康志愿者,收集其大便標(biāo)本,完成實(shí)驗(yàn)研究。2.3厭氧培養(yǎng)箱dy-型醫(yī)用培養(yǎng)箱(HHB11420型,江蘇連云港市墟溝電器廠);厭氧培養(yǎng)箱(DY-Ⅱ型,浙江義烏冷凍機(jī)總廠);隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(pc370型,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)、電熱恒溫水浴箱(SSH-W21～600型,天津市泰斯特儀器有限公司)。2.4培養(yǎng)基的設(shè)置將樣本置于37℃的電熱恒溫水浴箱解凍,稱取0.1g置于盛有0.9ml稀釋液的試管中做對(duì)數(shù)稀釋,然后做系列對(duì)數(shù)稀釋到10-7。選取不同濃度的稀釋液進(jìn)行接種培養(yǎng)。需氧菌:需氧菌總數(shù)(營養(yǎng)血平板)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度;大腸桿菌(EMB培養(yǎng)基)選擇10-3、10-4、10-5稀釋度;腸球菌(EC培養(yǎng)基)選擇10-1、10-2、10-3稀釋度。厭氧菌:厭氧菌總數(shù)(GAM培養(yǎng)基)選擇10-5、10-6、10-7稀釋度;雙歧桿菌(改良BS瓊脂)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度;乳酸桿菌(LBs乳酸桿菌培養(yǎng)基)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度;類桿菌(卡那霉素-萬古霉素血瓊脂)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度。用移液器吸取不同稀釋度的細(xì)菌樣本液各20μl,滴于培養(yǎng)基表面,每個(gè)稀釋度作3個(gè)平行樣,將已接種好的培養(yǎng)皿分別放入37℃需氧和厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～72h。2.5單位cfu的對(duì)數(shù)值lg菌落計(jì)數(shù):計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落數(shù)×稀釋倍數(shù),即得到每g糞便標(biāo)本的菌落形成單位(CFU)的對(duì)數(shù)值(lg)表示。種類鑒定:根據(jù)細(xì)菌形態(tài)學(xué)、菌落、菌細(xì)胞和菌落形態(tài)、染色性及生化實(shí)驗(yàn)鑒定特征,需氧菌和真菌的鑒定參考《臨床微生物學(xué)和微生物檢驗(yàn)》,厭氧菌鑒定參考白杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)。2.6xs檢驗(yàn)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件。各數(shù)據(jù)用xˉ±sxˉ±s表示,組內(nèi)比較采用配對(duì)T檢驗(yàn),組間比較采用成組T檢驗(yàn),并給出相應(yīng)P值,以P<0.05作為有顯著性標(biāo)準(zhǔn)。3結(jié)果3.1“虛”以濕阻、脾腎兩虛、胃熱濕阻以及陰虛內(nèi)熱型本次收集的36例單純性肥胖癥患者,其主要證型有脾虛濕阻、脾腎兩虛、胃熱濕阻及陰虛內(nèi)熱型。經(jīng)過3個(gè)療程的治療,臨床痊愈1例,顯效13例,有效12例,無效10例,有效率72.22%。3.2針刺治療前后,雙歧桿菌和乳酸桿菌檢測(cè)結(jié)果比較見表1～3。表1顯示,針刺治療前與健康組比較肥胖患者腸道菌群:需氧菌總數(shù)、厭氧菌總數(shù)、大腸桿菌、類桿菌,均減少(P<0.01)。腸球菌增加(P<0.01);雙歧桿菌與乳酸桿菌的檢測(cè)結(jié)果顯示兩組間沒有顯著性差異(P>0.01)。如表2所示,針刺治療前后,肥胖患者腸道菌群:需氧菌總數(shù)、腸球菌、厭氧菌總數(shù),均顯著減少(P<0.01);類桿菌明顯增加(P<0.01)。值得注意的是,雙歧桿菌、乳酸桿菌未見趨勢(shì)線變化。表3顯示針刺治療后,肥胖患者腸道菌群與健康組比較顯示:需氧菌總數(shù)、厭氧菌總數(shù)、大腸桿菌均減少(P<0.01)。4國外情況分析單純性肥胖是熱量攝入超過消耗而導(dǎo)致脂肪組織過剩,肥胖癥不僅影響了形體美,而且與許多致命性疾病相關(guān),因此對(duì)于肥胖癥的治療已經(jīng)成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的研究課題。中醫(yī)認(rèn)為,肥胖病多為本虛標(biāo)實(shí)之候,本虛多為氣虛,標(biāo)實(shí)為痰濕內(nèi)停,本病與脾關(guān)系最為密切,但病久則累及于腎。針灸減肥的機(jī)制,主要是通過針刺腧穴,疏通經(jīng)絡(luò),加強(qiáng)脾腎的功能,扶正祛邪,從而達(dá)到減肥的目的。針灸減肥的機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)針灸可能通過對(duì)中樞“食欲調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)”的多方位調(diào)節(jié)、對(duì)機(jī)體消化吸收與代謝功能的調(diào)節(jié)、以及對(duì)機(jī)體消化吸收功能的調(diào)節(jié)而達(dá)到減肥的作用。在針灸減肥臨床上還沒有統(tǒng)一的辨證分型,有的報(bào)道沒有分型,有的分3個(gè)型,有的分10多個(gè)型,有的證下還有型。但多以1997年召開的第五屆肥胖病研究學(xué)術(shù)會(huì)議上通過的5型分型法,即脾虛濕阻型、胃熱濕阻型、肝郁氣滯型、脾腎兩虛型及陰虛內(nèi)熱型。而在本次收集的病例中發(fā)現(xiàn)肥胖患者的證型有:脾虛濕阻型、脾腎兩虛型、胃熱濕阻型及陰虛內(nèi)熱型,與報(bào)道一致。其中,脾虛濕阻型的單純性肥胖癥的患者最多,達(dá)到18例,這可能與肥胖癥發(fā)生的病機(jī)有關(guān)。李晶等認(rèn)為脾虛痰濕是肥胖病發(fā)生的實(shí)質(zhì),脾運(yùn)失健,所納入之谷不能轉(zhuǎn)化成營養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)送到周身,反釀成痰濕,痰濕日積月累則成肥胖。但因?yàn)槊總€(gè)證型的人數(shù)較少,故本次實(shí)驗(yàn)沒有以證型分組。近年來,腸道菌群與肥胖的關(guān)系是西醫(yī)研究的熱點(diǎn)。人類消化道有約1×1014個(gè)活細(xì)菌,其種類有100種以上。人類的消化道就如同自然界一樣也屬于一個(gè)生態(tài)系統(tǒng),在胃腸道不同的部位,棲息著不同種類、數(shù)量的細(xì)菌,它們相互間的比例有著很大的差別,而且容易受到各種因素的影響而發(fā)生變化。研究顯示肥胖會(huì)影響腸道微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)。戈登等發(fā)現(xiàn)腸道無菌鼠食量比普通鼠多29%,但脂肪卻少40%;將正常鼠和肥胖鼠的腸道菌群移植入無菌鼠后,盡管其食量有明顯下降,植入肥胖鼠腸道菌群者體重增加47%,植入正常鼠腸道菌群者也增加27%。本實(shí)驗(yàn)首次基于對(duì)單純性肥胖患者和健康人大便中腸道菌群在數(shù)量上的差異,探討針灸減肥過程中腸道菌群的變化規(guī)律。通過對(duì)這14例病例的大便標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)單純性肥胖患者和健康人比較,其腸球菌明顯高于健康組,而類桿菌低于健康組;在治療三個(gè)療程后腸球菌明顯減少,類桿菌明顯增多,且治療后腸球菌及類桿菌的數(shù)量與健康組無明顯差異。但這與劉祥等報(bào)道的乳酸桿菌對(duì)脂肪積累和肥胖起抑制作用有一定差異。這可能與活菌培養(yǎng)法檢測(cè)腸道菌群的工作量大,標(biāo)本放置時(shí)間較長,導(dǎo)致其他菌群不能完全保存,而腸球菌具有正常人腸道內(nèi)定植,環(huán)境表面存活時(shí)間較長,抵抗力及耐藥性較強(qiáng)的特點(diǎn)有關(guān)。袁杰利等發(fā)現(xiàn)屎腸球菌對(duì)高血脂大鼠的血脂具有調(diào)節(jié)作用,而本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腸球菌對(duì)肥胖有促進(jìn)作用,對(duì)其原因筆者將做進(jìn)一步的研究。但是此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)肥胖患者與健康人的腸道菌群確實(shí)存在差異,與相關(guān)報(bào)道的研究結(jié)果一致,但是對(duì)于腸球菌和類桿菌等指標(biāo),目前還缺少相關(guān)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示針灸減肥過程