自擬活血益肺化瘀中藥煎劑聯(lián)合血府逐瘀散對(duì)肺動(dòng)脈高壓模型大鼠肺血管重構(gòu)的影響

自擬活血益肺化瘀中藥煎劑聯(lián)合血府逐瘀散對(duì)肺動(dòng)脈高壓模型大鼠肺血管重構(gòu)的影響

動(dòng)脈高壓（ph）是一種肺血管重建疾病，其特點(diǎn)是肺血管阻力和肺動(dòng)脈壓力的相關(guān)性增加。PH在單一藥物治療上取得了一定療效,而聯(lián)合應(yīng)用不同藥物取得最佳治療效果是治療PH的新觀點(diǎn),其可發(fā)揮不同藥物間的協(xié)同效應(yīng),降低單個(gè)藥物的不良反應(yīng)。由于肺動(dòng)脈重構(gòu)的分子機(jī)制復(fù)雜,涉及的信號(hào)通路彼此相互作用形成網(wǎng)絡(luò),多種藥物聯(lián)合應(yīng)用可望從不同的治療靶點(diǎn)起作用,理論上可取得治療更好療效,這一觀點(diǎn)迄今已得到一些研究的支持。在單藥治療效果不佳或療效不能維持的病例中聯(lián)合治療已顯示是一種實(shí)用的策略。但也有研究表明,先天性心臟病術(shù)后聯(lián)用一氧化氮(NO)和前列腺素沒有協(xié)同效應(yīng),這可能與二者的競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制有關(guān)。因此,筆者認(rèn)為聯(lián)合用藥的兩種藥物之間如果藥理作用近似,可能具有競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系,從而影響藥效的充分發(fā)揮;但兩種藥物之間藥理作用機(jī)制完全不同,可從不同的作用位點(diǎn)和不同的細(xì)胞信號(hào)通路發(fā)揮協(xié)同作用,從而提高肺動(dòng)脈高壓的治療效果,降低單藥用量過大導(dǎo)致的不良反應(yīng)。為此,筆者以自擬活血益肺化瘀中藥煎劑聯(lián)用血府逐瘀散,觀察其對(duì)PH模型大鼠肺血管重構(gòu)的影響,以為PH臨床聯(lián)合用藥提供一定參考。1材料表面1.1療系統(tǒng)有限公司PM-8000型多參數(shù)監(jiān)護(hù)儀(沈陽東軟醫(yī)療系統(tǒng)有限公司);MIAS300型圖像采集分析系統(tǒng)(日本Nikon公司);CX31型光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)。1.2血府逐瘀散方活血益肺化瘀中藥煎劑(筆者自擬方并自制);血府逐瘀散(經(jīng)典方,筆者自制);野百合堿(MCT,北京伊普瑞斯科技有限公司,批號(hào):201203232145)。1.3動(dòng)物2方法2.1大鼠項(xiàng)土壤ph模型的建立將MCT溶解于適量0.5mol/LHCl,用0.5mol/LNaOH調(diào)pH值至7.4,于大鼠項(xiàng)背部scMCT(60mg/kg)以復(fù)制PH模型。2.2中藥”與自擬活血府逐瘀散mps的中藥研磨成藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)分為5組,即空白對(duì)照、模型、自擬活血益肺化瘀中藥煎劑(MS,2mg/kg)、血府逐瘀散(MP,2mg/kg)與自擬活血益肺化瘀中藥煎劑+血府逐瘀散(MPS,2mg/kg+2mg/kg)組。ig給藥,每天1次,連續(xù)28d。2.3左心室與右心室采集質(zhì)量比值mmhg各組大鼠均在末次給藥后用多參數(shù)監(jiān)護(hù)儀檢測(cè)平均肺動(dòng)脈壓力[mPAP(1mmHg=0.133kPa)],然后斷頸處死大鼠,取出心臟,去掉心房及大血管,游離右心室(RV)和左心室加室間隔(LV+S),去掉血液和水分后分別稱定質(zhì)量,并計(jì)算RV/(LV+S)質(zhì)量比值反映右心室肥大程度。2.4防水劑、ldHE染色法操作,切片脫蠟至70%酒精。將地衣紅染液濾過,切片投入濾液中,室溫下過夜。用70%酒精充分洗滌,必要時(shí)用1%鹽酸酒精分化至彈力纖維清晰為止,流水沖洗。用亥瑞氏蘇木素液作對(duì)比染色30s~1min,水洗。經(jīng)95%酒精、無水酒精脫水,二甲苯透明,香膠封固。2.5肺組織特征的檢測(cè)2.5.1中膜肌化的檢測(cè)每只大鼠隨機(jī)觀察20個(gè)高倍視野(400×),統(tǒng)計(jì)直徑在50~150μm的腺泡內(nèi)小動(dòng)脈(30~60根)。根據(jù)平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(SM-α-actin)染色陽性程度分別計(jì)數(shù)完全肌化(中膜有完整的肌層)、部分肌化(中膜肌層不完整)和無肌化的小動(dòng)脈(沒有明顯的肌層)。無肌性小動(dòng)脈肌化程度=(完全肌化+部分肌化的血管數(shù))/觀察血管總數(shù)×100%。2.5.2血管壁內(nèi)外孔徑的測(cè)定光鏡下觀察HE染色切片,每份標(biāo)本隨機(jī)計(jì)算20根管徑在50~150μm肺小動(dòng)脈管壁厚度(血管內(nèi)膜與外膜之間的距離)和外徑。采用圖像采集分析系統(tǒng),用光標(biāo)勾畫出血管壁內(nèi)外輪廓線,分別計(jì)算出內(nèi)外管徑均值,其差值為管壁厚度。WT%=(2×管壁厚度)/外徑×100%。2.6數(shù)據(jù)處理與分析應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)以表示,采用單因素方差分析,采用q檢驗(yàn)進(jìn)行各組數(shù)據(jù)兩兩比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1ms、mp、ms+mp對(duì)大鼠mpap、rv/lv+s的影響與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠mPAP、RV/(LV+S)顯著升高(P<0.01);與模型組比較,MS、MP、MS+MP組大鼠mPAP、RV/(LV+S)顯著降低(P<0.05);與MS、MP組比較,MPS組大鼠mPAP、RV/(LV+S)顯著降低(P<0.05)。各組大鼠mPAP、RV/(LV+S)的比較見表1。3.2大鼠wt%和肺無肌性小動(dòng)脈肌化程度比較與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠WT%和肺無肌性小動(dòng)脈肌化程度顯著升高(P<0.01);與模型組比較,MS、MP、MS+MP組大鼠WT%和肺無肌性小動(dòng)脈肌化程度顯著降低(P<0.05);與MS、MP組比較,MPS組大鼠WT%和肺無肌性小動(dòng)脈肌化程度顯著降低(P<0.05)。各組大鼠WT%和肺無肌性小動(dòng)脈肌化程度的比較見表1。4不同藥物聯(lián)用對(duì)肺血管重構(gòu)的影響血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)位于血管壁中膜,SM-α-actin是收縮型VSMC的標(biāo)志性蛋白質(zhì);合成型VSMC呈去分化態(tài),對(duì)外界各種有絲分裂原起反應(yīng)而活躍增生,SM-α-actin表達(dá)降低。VSMC由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化是VSMC增生從而引起PAH肺血管重構(gòu)的先決條件。本研究中,與模型組比較,MPS組大鼠mPAP、RV/(LV+S)、WT%和肺無肌性小動(dòng)脈肌化程度顯著降低(P<0.05),提示自擬活血益肺化瘀中藥煎劑聯(lián)用血府逐瘀散可抑制PH引起的VSMC表型轉(zhuǎn)換,且兩種藥物聯(lián)用對(duì)PH引起VSMC表型轉(zhuǎn)換的抑制作用加強(qiáng),從而逆轉(zhuǎn)肺血管重構(gòu)進(jìn)程的同時(shí)還可降低mPAP與抑制右心室肥大程度。綜上所述,自