復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋性能、免疫機(jī)能和盲腸微生物區(qū)系的影響

復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋性能、免疫機(jī)能和盲腸微生物區(qū)系的影響

在動(dòng)物營養(yǎng)中添加抗生素可以促進(jìn)動(dòng)物生長，預(yù)防動(dòng)物疾病，提高動(dòng)物產(chǎn)品的產(chǎn)量。然而，長期使用抗生素、藥物殘余和環(huán)境污染變得越來越受到重視。微生態(tài)制劑是一種未經(jīng)處理的無菌添加劑，具有清熱解毒、耐受性和殘余留在大鼠身上的特點(diǎn)，是理想的抗生素替代品。微生態(tài)制劑是一種可調(diào)整動(dòng)物機(jī)體微生態(tài)平衡的活菌制劑,通過補(bǔ)充腸道的正常菌群,使得原籍菌數(shù)量占得優(yōu)勢(shì),并通過競(jìng)爭(zhēng)性排斥抑制需氧性病菌的生長繁殖,發(fā)酵產(chǎn)生大量的乳酸、乙酸,降低腸道里的pH,使得致病菌難以在腸道內(nèi)生存,而且有益菌在腸道內(nèi)代謝可以產(chǎn)生各種氨基酸、維生素等能被機(jī)體吸收和利用。此外,微生態(tài)制劑還可以刺激腸道黏膜中淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,繼而產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫,增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。國內(nèi)外有關(guān)微生態(tài)制劑的應(yīng)用,在家禽、豬、反芻動(dòng)物以及水產(chǎn)動(dòng)物中較多。元娜等報(bào)道,飼糧中添加適量含有活性微生物、孢性活性生物體的微生態(tài)制劑可顯著提高蛋種雞的產(chǎn)蛋率、受精率和受精蛋孵化率,顯著降低料蛋比、破蛋率,并顯著提高飼糧的表觀營養(yǎng)物質(zhì)吸收率。程婷婷等報(bào)道,肉雞飲水中添加主要包括嗜酸桿菌、植物乳酸桿菌、干酪乳酸桿菌等優(yōu)質(zhì)定植菌株的微生態(tài)制劑,能夠顯著提高肉雞出欄重,顯著降低料重比。鄧露芳通過試驗(yàn)證明,納豆芽孢桿菌具有顯著提高奶牛產(chǎn)奶量的作用,并存在提高飼料轉(zhuǎn)化效率、提高牛奶中乳蛋白和乳糖產(chǎn)量、改善牛奶品質(zhì)的趨勢(shì)。但是目前對(duì)微生態(tài)制劑的研究多是將1種或2種菌種添加到飼糧中研究其對(duì)動(dòng)物的影響,而對(duì)多種菌種復(fù)合后在動(dòng)物上的研究較少,多種乳酸桿菌復(fù)合后在蛋雞上的應(yīng)用研究更少。為此,本試驗(yàn)將多種乳酸桿菌制劑混合,旨在通過研究飼糧中添加不同劑量復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋性能、腸道菌群數(shù)量、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和免疫機(jī)能的影響,為其在蛋種雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1復(fù)合乳酸桿菌制劑的制備試驗(yàn)微生態(tài)制劑選用乳酸桿菌菌種,所用乳酸桿菌菌種由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)“乳品生物技術(shù)與工程”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。將乳酸桿菌含量均為2×1011CFU/g的干酪乳桿菌(LactobacilluscaseiZhang)、植物乳桿菌(LactobacillusplantarumP-8)、發(fā)酵乳桿菌(LactobacillusfermentumF-6)3個(gè)菌種按照1∶1∶1混合,然后稀釋100倍制成復(fù)合乳酸桿菌制劑。1.2動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì),選擇170日齡海蘭褐蛋種雞288只,隨機(jī)分為4組,每組6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)12只雞。1.3復(fù)合乳酸桿菌制劑的飼養(yǎng)方法參照NRC(1994)產(chǎn)蛋種雞營養(yǎng)需要配制基礎(chǔ)飼糧,其組成及營養(yǎng)水平見表1。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.05%、0.10%和0.20%復(fù)合乳酸桿菌制劑的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)蛋種雞采取3層階梯式雞籠飼養(yǎng),采用人工光照與自然光照相結(jié)合的方法,每天光照10h,機(jī)械通風(fēng)加自然通風(fēng),自由采食,自由飲水,按免疫程序正常接種免疫,定期消毒。每日08:30、16:002次喂料,每周統(tǒng)計(jì)耗料量。每日08:00、13:302次撿蛋,撿蛋后分別進(jìn)行記數(shù)、標(biāo)記、稱重、存放,同時(shí)計(jì)算每日的產(chǎn)蛋率、破損率。監(jiān)測(cè)雞群健康狀況,記錄死淘雞數(shù)及死淘原因。1.4指標(biāo)和方法的測(cè)量1.4.1產(chǎn)蛋功能指標(biāo)每天按重復(fù)計(jì)算蛋種雞的產(chǎn)蛋數(shù)及產(chǎn)蛋重,飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)每日的平均蛋重、產(chǎn)蛋率、料蛋比。1.4.2飼糧中混蛋白的含量測(cè)定采用內(nèi)源指示劑法測(cè)定粗蛋白質(zhì)、鈣和磷表觀消化率。指示劑用鹽酸不溶灰分(GB/T23742—2009)。粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱氏定氮法(GB/T6432—1994),鈣含量測(cè)定采用高錳酸鉀滴定法(GB/T6436—2002),磷含量測(cè)定采用鉬黃比色法(GB/T6437—2002)。式中:a為飼糧中的某營養(yǎng)物質(zhì)含量;b為糞中的某營養(yǎng)物質(zhì)含量;c為飼糧中的酸不溶灰分含量;d為糞中的酸不溶灰分含量。1.4.3菌株計(jì)數(shù)carting文獻(xiàn)表1試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每重復(fù)選取1只體重接近平均體重的雞,頸靜脈放血法處死。打開腹腔,結(jié)扎盲腸2端并剪下。采用傾注平板法對(duì)盲腸中大腸桿菌(Escherichiacoli)、乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)計(jì)數(shù)。大腸桿菌利用麥康凱培養(yǎng)基計(jì)數(shù),乳酸菌利用乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)計(jì)數(shù),雙歧桿菌利用TPY瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù),產(chǎn)氣莢膜梭菌利用胰-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸(TSC)瓊脂基礎(chǔ)計(jì)數(shù)。計(jì)算公式如下:1.4.4制備致病性局部預(yù)防效價(jià)抗體水平檢測(cè):試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每重復(fù)選取1只雞,頸靜脈或翅下采血,3000r/min離心5min并分離血清,參照《家禽傳染病試驗(yàn)指導(dǎo)》的方法測(cè)定禽流感和雞新城疫血凝抑制效價(jià)。免疫器官重量和指數(shù)的測(cè)定:在腸道指標(biāo)測(cè)定的同時(shí),解剖后分離胸腺、脾臟、法氏囊,用濾紙吸去水分后,用天平稱重。1.5差異顯著性分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行初步處理后用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),用單因子方差(one-wayANOVA)分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn),多重比較采用最小顯著差數(shù)法(LSD),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,P<0.05和P<0.01分別為差異顯著和極顯著水平。2結(jié)果與分析2.1組患者不同時(shí)點(diǎn)分布比較由表2可知,各試驗(yàn)組蛋種雞平均日采食量與對(duì)照組未呈現(xiàn)顯著性差異(P>0.05)。試驗(yàn)組蛋種雞料蛋比均在一定程度上低于對(duì)照組,分別降低了2.68%、1.79%和3.57%,但是與對(duì)照組也差異不顯著(P>0.05)。飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著影響蛋種雞的產(chǎn)蛋率(P<0.05),其中0.05%乳酸桿菌添加組蛋種雞產(chǎn)蛋率顯著高于對(duì)照組(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組蛋種雞產(chǎn)蛋率與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),各試驗(yàn)組之間差異均不顯著(P>0.05)。復(fù)合乳酸桿菌制劑的添加對(duì)蛋種雞平均蛋重沒有顯著影響(P>0.05)。日均產(chǎn)蛋重各組之間也未見顯著差異(P>0.05),但試驗(yàn)組均在一定程度上高于對(duì)照組,分別提高了1.21、0.86和1.71g/(只·d)。2.2粗蛋白質(zhì)表觀消化率由表3可知,飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著影響蛋種雞對(duì)粗蛋白質(zhì)的表觀消化率(P<0.05),各試驗(yàn)組粗蛋白質(zhì)的表觀消化率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),但3個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05),表觀消化率最高的為0.05%乳酸桿菌添加組。試驗(yàn)組蛋種雞對(duì)鈣和磷的表觀消化率與對(duì)照組均差異不顯著(P>0.05)。2.3復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)雞體內(nèi)指數(shù)的影響由表4可知,與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組蛋種雞的新城疫抗體效價(jià)均有所提高,分別提高了6.12%、8.08%、1.96%,但是均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。0.05%乳酸桿菌添加組蛋種雞的禽流感抗體效價(jià)顯著高于對(duì)照組(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組、0.20%乳酸桿菌添加組與對(duì)照組和0.05%乳酸桿菌添加組均差異不顯著(P>0.05),試驗(yàn)組比對(duì)照組分別提高了13.23%、9.14%和11.46%。飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著影響蛋種雞的胸腺指數(shù)(P<0.05),其中0.05%乳酸桿菌添加組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組的胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)照組與試驗(yàn)組蛋種雞的脾臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05),但均有所提高,分別比對(duì)照組提高了8.96%、4.48%和6.72%。法氏囊指數(shù)方面,對(duì)照組顯著低于0.10%乳酸桿菌添加組(P<0.05),但與0.05%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組差異不顯著(P>0.05),試驗(yàn)組內(nèi),0.05%乳酸桿菌添加組與0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組差異不顯著(P>0.05),0.10%乳酸桿菌添加組顯著高于0.20%乳酸桿菌添加組(P<0.05)。2.5復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)盲腸產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量的影響從表5可以看出,飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著或極顯著影響蛋種雞盲腸大腸桿菌(P<0.01)、乳酸菌(P<0.01)和雙歧桿菌的數(shù)量(P<0.05)。與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組蛋種雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量減少,0.05%乳酸桿菌添加組與對(duì)照組差異顯著(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01),各試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)。飼糧添加0.05%、0.10%和0.20%復(fù)合乳酸桿菌制劑均可使盲腸產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量顯著降低(P<0.05),0.05%乳酸桿菌添加組顯著低于0.20%乳酸桿菌添加組,但均與0.10%乳酸桿菌添加組差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比,0.05%乳酸桿菌添加組蛋種雞盲腸乳酸菌的數(shù)量顯著提高(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組均極顯著提高(P<0.01),各試驗(yàn)組間差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)組蛋種雞盲腸雙歧桿菌的數(shù)量與對(duì)照組相比呈現(xiàn)顯著性的提高(P<0.05),試驗(yàn)組間無顯著差異(P>0.05)。3討論3.1添加植物乳桿菌減乳劑本試驗(yàn)結(jié)果表明,飼糧中添加復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)蛋種雞平均日采食量無顯著影響;料蛋比有所降低,但與對(duì)照組差異不顯著;產(chǎn)蛋率有不同程度提高,其中0.05%乳酸桿菌添加組達(dá)到顯著水平;日均產(chǎn)蛋重有所提高,但也與對(duì)照組差異不顯著。乳酸菌制劑作為飼料添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的促進(jìn)作用被廣泛認(rèn)同,張志焱等在蛋雞基礎(chǔ)飼糧中添加植物乳桿菌凍干菌粉后發(fā)現(xiàn),其可顯著降低料蛋比,但對(duì)蛋重影響不顯著。李玉清等將含乳酸桿菌的微生態(tài)制劑添加到羅曼褐蛋雞的飼糧中,結(jié)果表明,乳酸桿菌能夠顯著提高種蛋合格率;林冬梅等報(bào)道,飼糧添加乳酸菌制劑能夠顯著提高蛋種雞的受精率,并有降低死胚率的趨勢(shì),在產(chǎn)蛋后期表現(xiàn)尤為顯著。本試驗(yàn)中,乳酸桿菌對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋性能的促進(jìn),可能是由于隨著復(fù)合乳酸桿菌的攝入,其改善了機(jī)體的微生態(tài)區(qū)系,抑制了有害菌群的滋生,維持了較為健康的細(xì)菌區(qū)系,進(jìn)而使得機(jī)體產(chǎn)蛋性能有所提高。本試驗(yàn)中蛋雞的產(chǎn)蛋性能并沒有隨著乳酸桿菌添加量的提高而不斷地增高,這可能因?yàn)檫m宜的乳酸桿菌數(shù)量能夠使腸道的菌群維持在正常狀態(tài),但一旦乳酸桿菌的量增加到一定的程度,也會(huì)抑制其他種類腸道固有菌類的定植和存活,這并不利于腸道維持最佳的平衡和健康狀態(tài),進(jìn)而會(huì)降低產(chǎn)蛋性能。從本試驗(yàn)結(jié)果來看,添加復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)蛋種雞的產(chǎn)蛋率影響顯著,以0.05%添加水平最好,而其他產(chǎn)蛋性能指標(biāo)各組間均差異不顯著,說明蛋種雞飼糧中添加0.05%的復(fù)合乳酸桿菌制劑作用效果較好。3.2乳酸桿菌制劑對(duì)粗蛋白質(zhì)的表觀消化率乳酸菌能分解蛋白質(zhì)、糖類,并能合成維生素,對(duì)脂肪也有微弱的分解能力,能提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率,促進(jìn)吸收。同時(shí),乳酸菌在腸道內(nèi)可以產(chǎn)生多種消化酶,而腸道可以通過對(duì)酶活性和酶含量的調(diào)節(jié)來調(diào)控營養(yǎng)物質(zhì)的代謝速率和轉(zhuǎn)化率,這對(duì)促進(jìn)腸道內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、提高飼料的轉(zhuǎn)化效率有直接的促進(jìn)作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明,飼用乳酸桿菌制劑后,蛋種雞對(duì)粗蛋白質(zhì)的表觀消化率顯著提高,且以0.05%添加水平最好,但對(duì)鈣和磷的表觀消化率無顯著影響。林冬梅等在產(chǎn)蛋雞基礎(chǔ)飼糧中添加0.05%土霉素、0.10%和0.20%的乳酸桿菌,結(jié)果表明添加乳酸桿菌組的蛋白質(zhì)表觀消化率與對(duì)照組差異顯著,而且0.02%乳酸桿菌組的蛋白質(zhì)表觀消化率最高,鈣與磷的表觀消化率與對(duì)照組無顯著差異,這與本試驗(yàn)得出的結(jié)果基本一致。李笑櫻等研究表明,0.01%糞腸球菌+0.02%芽孢桿菌復(fù)合的微生態(tài)制劑可以顯著提高精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸等氨基酸的表觀消化率。郭元晟等在肉雞飼糧中分別添加2×105、2×106和1×107CFU/mL發(fā)酵乳酸桿菌,結(jié)果表明,添加該種乳酸菌顯著提高了肉雞回腸蛋白質(zhì)和能量的表觀消化率。3.3乳酸菌制劑對(duì)雞細(xì)胞免疫水平的影響乳酸桿菌一方面能明顯激活巨噬細(xì)胞的吞噬作用,另一方面由于它能在腸道內(nèi)定植,相當(dāng)于天然自動(dòng)免疫,所以能增強(qiáng)機(jī)體的非特異性和特異性免疫反應(yīng),提高機(jī)體的抗病能力。當(dāng)異物侵入機(jī)體時(shí),乳酸菌可以提高外周血液中T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng),激活免疫細(xì)胞,提高全身的細(xì)胞免疫水平。阿木爾吉日嘎拉等將乳酸桿菌L.caseiZhang制成乳酸菌液和發(fā)酵乳灌服雛雞,檢測(cè)新城疫血凝抑制效價(jià)后發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組抗體水平可提高1.00~1.77(log2),試驗(yàn)結(jié)果與本試驗(yàn)吻合。易力等研究顯示,乳酸菌制劑對(duì)雞胸腺、脾臟、法氏囊發(fā)育有良好的促進(jìn)作用,并可一定程度上提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,而且在試驗(yàn)期內(nèi)雞血液中新城疫抗體效價(jià)持續(xù)高于對(duì)照組。本試驗(yàn)中,添加0.05%復(fù)合乳酸桿菌制劑顯著提高了蛋種雞禽流感抗體效價(jià),0.10%復(fù)合乳酸桿菌制劑顯著提高了胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù),但不同水平復(fù)合乳酸桿菌制劑均對(duì)脾臟指數(shù)沒有顯著影響。這表明添加復(fù)合乳酸桿菌制劑對(duì)蛋種雞的免疫機(jī)能產(chǎn)生了一定影響。3.4乳酸菌對(duì)腸道菌群的影響本試驗(yàn)中,乳酸桿菌的添加顯著提高了蛋種雞盲腸內(nèi)有益菌乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量,顯著降低了大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜桿菌的數(shù)量,優(yōu)化了腸道微生物區(qū)系。胥清富等將含有乳酸桿菌的復(fù)合活菌劑添加到海賽克斯褐蛋雞基礎(chǔ)飼糧中,結(jié)果表明雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著減少,芽孢桿菌的數(shù)量顯著增加,而且厭氧乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量均增多,達(dá)到極顯著水平。馮華等將未包埋的乳酸菌和包埋乳酸菌分別添加到蛋雞飼糧中,與不添加乳酸菌的對(duì)照組比較,添加乳