復(fù)合乳酸桿菌制劑對蛋種雞產(chǎn)蛋性能、免疫機能和盲腸微生物區(qū)系的影響

復(fù)合乳酸桿菌制劑對蛋種雞產(chǎn)蛋性能、免疫機能和盲腸微生物區(qū)系的影響

在動物營養(yǎng)中添加抗生素可以促進動物生長，預(yù)防動物疾病，提高動物產(chǎn)品的產(chǎn)量。然而，長期使用抗生素、藥物殘余和環(huán)境污染變得越來越受到重視。微生態(tài)制劑是一種未經(jīng)處理的無菌添加劑，具有清熱解毒、耐受性和殘余留在大鼠身上的特點，是理想的抗生素替代品。微生態(tài)制劑是一種可調(diào)整動物機體微生態(tài)平衡的活菌制劑,通過補充腸道的正常菌群,使得原籍菌數(shù)量占得優(yōu)勢,并通過競爭性排斥抑制需氧性病菌的生長繁殖,發(fā)酵產(chǎn)生大量的乳酸、乙酸,降低腸道里的pH,使得致病菌難以在腸道內(nèi)生存,而且有益菌在腸道內(nèi)代謝可以產(chǎn)生各種氨基酸、維生素等能被機體吸收和利用。此外,微生態(tài)制劑還可以刺激腸道黏膜中淋巴細胞的轉(zhuǎn)化,繼而產(chǎn)生細胞免疫和體液免疫,增強機體的免疫力。國內(nèi)外有關(guān)微生態(tài)制劑的應(yīng)用,在家禽、豬、反芻動物以及水產(chǎn)動物中較多。元娜等報道,飼糧中添加適量含有活性微生物、孢性活性生物體的微生態(tài)制劑可顯著提高蛋種雞的產(chǎn)蛋率、受精率和受精蛋孵化率,顯著降低料蛋比、破蛋率,并顯著提高飼糧的表觀營養(yǎng)物質(zhì)吸收率。程婷婷等報道,肉雞飲水中添加主要包括嗜酸桿菌、植物乳酸桿菌、干酪乳酸桿菌等優(yōu)質(zhì)定植菌株的微生態(tài)制劑,能夠顯著提高肉雞出欄重,顯著降低料重比。鄧露芳通過試驗證明,納豆芽孢桿菌具有顯著提高奶牛產(chǎn)奶量的作用,并存在提高飼料轉(zhuǎn)化效率、提高牛奶中乳蛋白和乳糖產(chǎn)量、改善牛奶品質(zhì)的趨勢。但是目前對微生態(tài)制劑的研究多是將1種或2種菌種添加到飼糧中研究其對動物的影響,而對多種菌種復(fù)合后在動物上的研究較少,多種乳酸桿菌復(fù)合后在蛋雞上的應(yīng)用研究更少。為此,本試驗將多種乳酸桿菌制劑混合,旨在通過研究飼糧中添加不同劑量復(fù)合乳酸桿菌制劑對蛋種雞產(chǎn)蛋性能、腸道菌群數(shù)量、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和免疫機能的影響,為其在蛋種雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1復(fù)合乳酸桿菌制劑的制備試驗微生態(tài)制劑選用乳酸桿菌菌種,所用乳酸桿菌菌種由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)“乳品生物技術(shù)與工程”教育部重點實驗室提供。將乳酸桿菌含量均為2×1011CFU/g的干酪乳桿菌(LactobacilluscaseiZhang)、植物乳桿菌(LactobacillusplantarumP-8)、發(fā)酵乳桿菌(LactobacillusfermentumF-6)3個菌種按照1∶1∶1混合,然后稀釋100倍制成復(fù)合乳酸桿菌制劑。1.2動物和實驗設(shè)計試驗采用單因子完全隨機試驗設(shè)計,選擇170日齡海蘭褐蛋種雞288只,隨機分為4組,每組6個重復(fù),每個重復(fù)12只雞。1.3復(fù)合乳酸桿菌制劑的飼養(yǎng)方法參照NRC(1994)產(chǎn)蛋種雞營養(yǎng)需要配制基礎(chǔ)飼糧,其組成及營養(yǎng)水平見表1。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.05%、0.10%和0.20%復(fù)合乳酸桿菌制劑的試驗飼糧。試驗蛋種雞采取3層階梯式雞籠飼養(yǎng),采用人工光照與自然光照相結(jié)合的方法,每天光照10h,機械通風(fēng)加自然通風(fēng),自由采食,自由飲水,按免疫程序正常接種免疫,定期消毒。每日08:30、16:002次喂料,每周統(tǒng)計耗料量。每日08:00、13:302次撿蛋,撿蛋后分別進行記數(shù)、標記、稱重、存放,同時計算每日的產(chǎn)蛋率、破損率。監(jiān)測雞群健康狀況,記錄死淘雞數(shù)及死淘原因。1.4指標和方法的測量1.4.1產(chǎn)蛋功能指標每天按重復(fù)計算蛋種雞的產(chǎn)蛋數(shù)及產(chǎn)蛋重,飼養(yǎng)試驗結(jié)束后統(tǒng)計每日的平均蛋重、產(chǎn)蛋率、料蛋比。1.4.2飼糧中混蛋白的含量測定采用內(nèi)源指示劑法測定粗蛋白質(zhì)、鈣和磷表觀消化率。指示劑用鹽酸不溶灰分(GB/T23742—2009)。粗蛋白質(zhì)含量測定采用凱氏定氮法(GB/T6432—1994),鈣含量測定采用高錳酸鉀滴定法(GB/T6436—2002),磷含量測定采用鉬黃比色法(GB/T6437—2002)。式中:a為飼糧中的某營養(yǎng)物質(zhì)含量;b為糞中的某營養(yǎng)物質(zhì)含量;c為飼糧中的酸不溶灰分含量;d為糞中的酸不溶灰分含量。1.4.3菌株計數(shù)carting文獻表1試驗結(jié)束時,每重復(fù)選取1只體重接近平均體重的雞,頸靜脈放血法處死。打開腹腔,結(jié)扎盲腸2端并剪下。采用傾注平板法對盲腸中大腸桿菌(Escherichiacoli)、乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)計數(shù)。大腸桿菌利用麥康凱培養(yǎng)基計數(shù),乳酸菌利用乳酸細菌培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)計數(shù),雙歧桿菌利用TPY瓊脂培養(yǎng)基計數(shù),產(chǎn)氣莢膜梭菌利用胰-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸(TSC)瓊脂基礎(chǔ)計數(shù)。計算公式如下:1.4.4制備致病性局部預(yù)防效價抗體水平檢測:試驗結(jié)束時每重復(fù)選取1只雞,頸靜脈或翅下采血,3000r/min離心5min并分離血清,參照《家禽傳染病試驗指導(dǎo)》的方法測定禽流感和雞新城疫血凝抑制效價。免疫器官重量和指數(shù)的測定:在腸道指標測定的同時,解剖后分離胸腺、脾臟、法氏囊,用濾紙吸去水分后,用天平稱重。1.5差異顯著性分析試驗數(shù)據(jù)采用Excel進行初步處理后用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計,用單因子方差(one-wayANOVA)分析進行差異顯著性檢驗,多重比較采用最小顯著差數(shù)法(LSD),結(jié)果以平均值±標準差表示,P<0.05和P<0.01分別為差異顯著和極顯著水平。2結(jié)果與分析2.1組患者不同時點分布比較由表2可知,各試驗組蛋種雞平均日采食量與對照組未呈現(xiàn)顯著性差異(P>0.05)。試驗組蛋種雞料蛋比均在一定程度上低于對照組,分別降低了2.68%、1.79%和3.57%,但是與對照組也差異不顯著(P>0.05)。飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著影響蛋種雞的產(chǎn)蛋率(P<0.05),其中0.05%乳酸桿菌添加組蛋種雞產(chǎn)蛋率顯著高于對照組(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組蛋種雞產(chǎn)蛋率與對照組差異不顯著(P>0.05),各試驗組之間差異均不顯著(P>0.05)。復(fù)合乳酸桿菌制劑的添加對蛋種雞平均蛋重沒有顯著影響(P>0.05)。日均產(chǎn)蛋重各組之間也未見顯著差異(P>0.05),但試驗組均在一定程度上高于對照組,分別提高了1.21、0.86和1.71g/(只·d)。2.2粗蛋白質(zhì)表觀消化率由表3可知,飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著影響蛋種雞對粗蛋白質(zhì)的表觀消化率(P<0.05),各試驗組粗蛋白質(zhì)的表觀消化率均顯著高于對照組(P<0.05),但3個試驗組之間差異不顯著(P>0.05),表觀消化率最高的為0.05%乳酸桿菌添加組。試驗組蛋種雞對鈣和磷的表觀消化率與對照組均差異不顯著(P>0.05)。2.3復(fù)合乳酸桿菌制劑對雞體內(nèi)指數(shù)的影響由表4可知,與對照組相比,試驗組蛋種雞的新城疫抗體效價均有所提高,分別提高了6.12%、8.08%、1.96%,但是均與對照組差異不顯著(P>0.05)。0.05%乳酸桿菌添加組蛋種雞的禽流感抗體效價顯著高于對照組(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組、0.20%乳酸桿菌添加組與對照組和0.05%乳酸桿菌添加組均差異不顯著(P>0.05),試驗組比對照組分別提高了13.23%、9.14%和11.46%。飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著影響蛋種雞的胸腺指數(shù)(P<0.05),其中0.05%乳酸桿菌添加組與對照組差異不顯著(P>0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組的胸腺指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。對照組與試驗組蛋種雞的脾臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05),但均有所提高,分別比對照組提高了8.96%、4.48%和6.72%。法氏囊指數(shù)方面,對照組顯著低于0.10%乳酸桿菌添加組(P<0.05),但與0.05%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組差異不顯著(P>0.05),試驗組內(nèi),0.05%乳酸桿菌添加組與0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組差異不顯著(P>0.05),0.10%乳酸桿菌添加組顯著高于0.20%乳酸桿菌添加組(P<0.05)。2.5復(fù)合乳酸桿菌制劑對盲腸產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量的影響從表5可以看出,飼糧添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可顯著或極顯著影響蛋種雞盲腸大腸桿菌(P<0.01)、乳酸菌(P<0.01)和雙歧桿菌的數(shù)量(P<0.05)。與對照組相比,試驗組蛋種雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量減少,0.05%乳酸桿菌添加組與對照組差異顯著(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組與對照組差異極顯著(P<0.01),各試驗組之間差異不顯著(P>0.05)。飼糧添加0.05%、0.10%和0.20%復(fù)合乳酸桿菌制劑均可使盲腸產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量顯著降低(P<0.05),0.05%乳酸桿菌添加組顯著低于0.20%乳酸桿菌添加組,但均與0.10%乳酸桿菌添加組差異不顯著(P>0.05)。與對照組相比,0.05%乳酸桿菌添加組蛋種雞盲腸乳酸菌的數(shù)量顯著提高(P<0.05),0.10%乳酸桿菌添加組和0.20%乳酸桿菌添加組均極顯著提高(P<0.01),各試驗組間差異不顯著(P>0.05)。試驗組蛋種雞盲腸雙歧桿菌的數(shù)量與對照組相比呈現(xiàn)顯著性的提高(P<0.05),試驗組間無顯著差異(P>0.05)。3討論3.1添加植物乳桿菌減乳劑本試驗結(jié)果表明,飼糧中添加復(fù)合乳酸桿菌制劑對蛋種雞平均日采食量無顯著影響;料蛋比有所降低,但與對照組差異不顯著;產(chǎn)蛋率有不同程度提高,其中0.05%乳酸桿菌添加組達到顯著水平;日均產(chǎn)蛋重有所提高,但也與對照組差異不顯著。乳酸菌制劑作為飼料添加劑對蛋雞生產(chǎn)性能的促進作用被廣泛認同,張志焱等在蛋雞基礎(chǔ)飼糧中添加植物乳桿菌凍干菌粉后發(fā)現(xiàn),其可顯著降低料蛋比,但對蛋重影響不顯著。李玉清等將含乳酸桿菌的微生態(tài)制劑添加到羅曼褐蛋雞的飼糧中,結(jié)果表明,乳酸桿菌能夠顯著提高種蛋合格率;林冬梅等報道,飼糧添加乳酸菌制劑能夠顯著提高蛋種雞的受精率,并有降低死胚率的趨勢,在產(chǎn)蛋后期表現(xiàn)尤為顯著。本試驗中,乳酸桿菌對蛋種雞產(chǎn)蛋性能的促進,可能是由于隨著復(fù)合乳酸桿菌的攝入,其改善了機體的微生態(tài)區(qū)系,抑制了有害菌群的滋生,維持了較為健康的細菌區(qū)系,進而使得機體產(chǎn)蛋性能有所提高。本試驗中蛋雞的產(chǎn)蛋性能并沒有隨著乳酸桿菌添加量的提高而不斷地增高,這可能因為適宜的乳酸桿菌數(shù)量能夠使腸道的菌群維持在正常狀態(tài),但一旦乳酸桿菌的量增加到一定的程度,也會抑制其他種類腸道固有菌類的定植和存活,這并不利于腸道維持最佳的平衡和健康狀態(tài),進而會降低產(chǎn)蛋性能。從本試驗結(jié)果來看,添加復(fù)合乳酸桿菌制劑對蛋種雞的產(chǎn)蛋率影響顯著,以0.05%添加水平最好,而其他產(chǎn)蛋性能指標各組間均差異不顯著,說明蛋種雞飼糧中添加0.05%的復(fù)合乳酸桿菌制劑作用效果較好。3.2乳酸桿菌制劑對粗蛋白質(zhì)的表觀消化率乳酸菌能分解蛋白質(zhì)、糖類,并能合成維生素,對脂肪也有微弱的分解能力,能提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率,促進吸收。同時,乳酸菌在腸道內(nèi)可以產(chǎn)生多種消化酶,而腸道可以通過對酶活性和酶含量的調(diào)節(jié)來調(diào)控營養(yǎng)物質(zhì)的代謝速率和轉(zhuǎn)化率,這對促進腸道內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、提高飼料的轉(zhuǎn)化效率有直接的促進作用。本試驗結(jié)果表明,飼用乳酸桿菌制劑后,蛋種雞對粗蛋白質(zhì)的表觀消化率顯著提高,且以0.05%添加水平最好,但對鈣和磷的表觀消化率無顯著影響。林冬梅等在產(chǎn)蛋雞基礎(chǔ)飼糧中添加0.05%土霉素、0.10%和0.20%的乳酸桿菌,結(jié)果表明添加乳酸桿菌組的蛋白質(zhì)表觀消化率與對照組差異顯著,而且0.02%乳酸桿菌組的蛋白質(zhì)表觀消化率最高,鈣與磷的表觀消化率與對照組無顯著差異,這與本試驗得出的結(jié)果基本一致。李笑櫻等研究表明,0.01%糞腸球菌+0.02%芽孢桿菌復(fù)合的微生態(tài)制劑可以顯著提高精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸等氨基酸的表觀消化率。郭元晟等在肉雞飼糧中分別添加2×105、2×106和1×107CFU/mL發(fā)酵乳酸桿菌,結(jié)果表明,添加該種乳酸菌顯著提高了肉雞回腸蛋白質(zhì)和能量的表觀消化率。3.3乳酸菌制劑對雞細胞免疫水平的影響乳酸桿菌一方面能明顯激活巨噬細胞的吞噬作用,另一方面由于它能在腸道內(nèi)定植,相當(dāng)于天然自動免疫,所以能增強機體的非特異性和特異性免疫反應(yīng),提高機體的抗病能力。當(dāng)異物侵入機體時,乳酸菌可以提高外周血液中T淋巴細胞的增殖反應(yīng),激活免疫細胞,提高全身的細胞免疫水平。阿木爾吉日嘎拉等將乳酸桿菌L.caseiZhang制成乳酸菌液和發(fā)酵乳灌服雛雞,檢測新城疫血凝抑制效價后發(fā)現(xiàn),與對照組相比,試驗組抗體水平可提高1.00~1.77(log2),試驗結(jié)果與本試驗吻合。易力等研究顯示,乳酸菌制劑對雞胸腺、脾臟、法氏囊發(fā)育有良好的促進作用,并可一定程度上提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率,而且在試驗期內(nèi)雞血液中新城疫抗體效價持續(xù)高于對照組。本試驗中,添加0.05%復(fù)合乳酸桿菌制劑顯著提高了蛋種雞禽流感抗體效價,0.10%復(fù)合乳酸桿菌制劑顯著提高了胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù),但不同水平復(fù)合乳酸桿菌制劑均對脾臟指數(shù)沒有顯著影響。這表明添加復(fù)合乳酸桿菌制劑對蛋種雞的免疫機能產(chǎn)生了一定影響。3.4乳酸菌對腸道菌群的影響本試驗中,乳酸桿菌的添加顯著提高了蛋種雞盲腸內(nèi)有益菌乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量,顯著降低了大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜桿菌的數(shù)量,優(yōu)化了腸道微生物區(qū)系。胥清富等將含有乳酸桿菌的復(fù)合活菌劑添加到海賽克斯褐蛋雞基礎(chǔ)飼糧中,結(jié)果表明雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著減少,芽孢桿菌的數(shù)量顯著增加,而且厭氧乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量均增多,達到極顯著水平。馮華等將未包埋的乳酸菌和包埋乳酸菌分別添加到蛋雞飼糧中,與不添加乳酸菌的對照組比較,添加乳