細(xì)菌性陰道病患者陰道加德納菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢測方法的應(yīng)用

細(xì)菌性陰道病患者陰道加德納菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢測方法的應(yīng)用

陰道感染（gva）是女性非特異性陰道疾?。╞v）的常見病原體，也是性接觸和傳播疾病的病原體之一。GVA不僅引起陰道炎和尿道炎、還可引起早產(chǎn)、低體重兒、急性輸卵管炎、手術(shù)感染和子宮頸癌等。我們對臨床常用的3種檢測方法與本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的GVA選擇性培養(yǎng)基分離培養(yǎng)法進(jìn)行比較,取得了滿意的效果。為細(xì)菌性陰道病的診斷和治療提供簡便易行的檢測方法,報(bào)道如下。1材料和方法1.1組與組成一般資料2005年2~12月我院婦科診斷為泌尿生殖道感染患者156例,年齡19~62歲,診斷標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編《婦產(chǎn)科學(xué)》第5版。1.2細(xì)菌、試劑和儀器陰道加德納菌選擇培養(yǎng)基“加德納瓊脂平板”購自法國生物梅里埃公司,陰道加德納菌選擇性平板由本院微生物室研制(營養(yǎng)肉湯粉15~20g;哥倫比亞瓊脂35~44g;吐溫800.2~0.4ml;革蘭染色1液(結(jié)晶紫液)0.05~0.075ml;5-氟胞嘧啶0.02~0.03g;人全血50~80ml;人或羊血漿30~50ml;蒸餾水加至1000ml,pH為7.2~7.4),鑒定系統(tǒng)采用法國生物梅里埃公司“APICRYNE棒桿菌鑒定系列”或VITEK-2MH卡片;藥敏試紙、馬尿酸試驗(yàn)微量管購自杭州天和試劑公司;細(xì)菌性陰道病快速診斷試劑盒,購自珠海斗門浪鋒生物技術(shù)有限公司。自制50μg/片甲硝唑和替硝唑藥敏紙片。1.3方法1.3.1中小型提高適用對象:婦幼保健入院正常婦女A組:宮頸炎患者100例;B組:陰道炎患者56例;C組:婦科體檢正常婦女36例做為對照組。3組均用無菌棉拭子采取宮頸和陰道分泌物涂片革蘭染色找線索細(xì)胞、胺試驗(yàn)、BV試驗(yàn)、白帶常規(guī)檢查,并同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。1.3.2革蘭陽性菌種的制備分泌物分別接種于加德納菌選擇性平板置5%CO2孵育箱培養(yǎng)48h;挑取淡紫色凸起、半透明、光滑、露滴樣且周圍有β-溶血環(huán)小菌落純化,涂片染色為具有多形性革蘭陰性桿菌或革蘭陽性球菌;同時(shí)進(jìn)行馬尿酸試驗(yàn);結(jié)果判斷,鑒定條上吡嗪胺酶、葡萄糖、核糖、丙二酸鹽陽性,其他為陰性,并馬尿酸試驗(yàn)陽性鑒定為陰道加德納菌。1.3.3藥物過敏試驗(yàn)采用K-B紙片擴(kuò)散法,參照苛養(yǎng)菌體外藥敏試驗(yàn)方法作為試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。1.4統(tǒng)計(jì)處理計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)在SPSS11.5軟件上進(jìn)行配對資料χ2檢驗(yàn)(校正公式)及相關(guān)性分析。2結(jié)果2.1兩組檢測方法陽性率比較經(jīng)配對χ2檢驗(yàn),宮頸炎患者和陰道炎患者與對照組比較各項(xiàng)檢測方法陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸炎患者與陰道炎患者比較各項(xiàng)檢測方法陽性率只有BV試驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),宮頸炎患者GV培養(yǎng)法與涂片找線索細(xì)胞、BV試驗(yàn)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而與胺試驗(yàn)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);陰道炎患者GV培養(yǎng)法與涂片找線索細(xì)胞、胺試驗(yàn)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而與BV試驗(yàn)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。2.2自制培養(yǎng)基中病原菌分離率兩種瓊脂平板加德納菌分離率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而自制培養(yǎng)基中其他病原菌與進(jìn)口培養(yǎng)基相比分離率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。2.3抗癲癇試驗(yàn)分離的65株陰道加德納菌對臨床常用的8種抗菌藥物在M-H人血瓊脂平板上進(jìn)行抗菌藥物敏感試驗(yàn),結(jié)果見表3。2.4兩種部位的抗病性分離率宮頸分泌物與陰道分泌物GVA的分離率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,20例宮頸糜爛患者同時(shí)取陰道分泌物與宮頸分泌物培養(yǎng),結(jié)果見表4。2.5由于gva分離與分泌物ph的關(guān)系分泌物的pH值越大GVA分離率越高,呈高度正相關(guān)r=0.988。GVA的分離與分泌物的酸堿度(pH值)有較好的相關(guān)性分析,見表5。2.6比較gva分離與分泌物數(shù)量之間的關(guān)系分泌物中白細(xì)胞越多GVA分離率越少,呈高度負(fù)相關(guān)r=-0.956。陰道加德納菌的分離與分泌物的白細(xì)胞數(shù)多少的相關(guān)性分析,見表6。3討論3.1培養(yǎng)基的選擇加德納菌在普通培養(yǎng)基上不易生長,本課題研發(fā)了一種GVA的選擇性培養(yǎng)基配方和配制方法,特別是采用低濃度的結(jié)晶紫代替抗菌藥物作為革蘭陽性菌抑制劑,用于GVA培養(yǎng)基在目前國內(nèi)外培養(yǎng)基配方中未見報(bào)道;用較高濃度的5-氟胞嘧啶作為真菌抑制劑,則提高了對真菌的抑制效果并大大減少了成本;該培養(yǎng)基以營養(yǎng)肉湯作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入一定量的血漿,增加了營養(yǎng)成份,GVA在該培養(yǎng)基上生長良好。自制加德納菌選擇性平板具有GVA生長良好,有效抑制了革蘭陽性菌和真菌生長、雜菌少、培養(yǎng)基成本低、配制簡便等優(yōu)點(diǎn)。GVA生長需要提供5%CO2環(huán)境,置5%CO2孵育箱和置含5%CO2的Ⅱ型氣袋內(nèi)均能達(dá)到相同的培養(yǎng)效果。研究結(jié)果為非特異細(xì)菌性陰道病,特別是陰道加德納菌感染的泌尿道炎癥診斷提供實(shí)用、有推廣價(jià)值的檢測手段。3.2gva培養(yǎng)法與涂片革蘭染色找線索細(xì)胞、bv、分離培養(yǎng)的陽性率比較表2目前對BV的檢測方法頗多,最常用的有Asmel的傳統(tǒng)診斷法:(1)陰道pH>4.5。(2)稀薄均質(zhì)灰白色的陰道分泌物。(3)胺試驗(yàn)陽性。(4)涂片革蘭染色檢到線索細(xì)胞。診斷條件應(yīng)具備上述4條中的3條;其他還有分離培養(yǎng)、免疫熒光枝術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、氣-液相色譜分析及基因探針檢查等。本調(diào)查156例陰道病患者同時(shí)采用分泌物涂片革蘭染色找線索細(xì)胞、BV試驗(yàn)、胺試驗(yàn)、分離培養(yǎng),經(jīng)配對χ2檢驗(yàn),可見宮頸炎患者GVA培養(yǎng)法與涂片找線索細(xì)胞、BV試驗(yàn)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而與胺試驗(yàn)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),可能是由于標(biāo)本量不足使胺試驗(yàn)出現(xiàn)部分假陰性;陰道炎患者GVA培養(yǎng)法與涂片找線索細(xì)胞、胺試驗(yàn)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而與BV試驗(yàn)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);說明陰道病患者除GVA感染外還存在較多的其他病原菌,如普雷沃菌屬等也能產(chǎn)生唾液酸酶而引起B(yǎng)V試驗(yàn)的陽性。涂片革蘭染色找線索細(xì)胞雖然是目前檢查BV的金標(biāo)準(zhǔn),方法也簡便,但由于陰道分泌物中雜菌及脫落細(xì)胞較多,不易識別,再加上判斷結(jié)果中常帶有主觀因素,而影響檢查的準(zhǔn)確性,因此分泌物涂片革蘭染色找線索細(xì)胞、BV試驗(yàn)、胺試驗(yàn)只能作為一種過篩試驗(yàn);其他方法的共同不足是都不能分離到GVA病原菌,而本方法即能從BV患者標(biāo)本中分離培養(yǎng)得到GVA病原菌并進(jìn)行藥敏試驗(yàn),既提高了特異性的診斷依據(jù),又可同時(shí)給出治療參考,對臨床反復(fù)發(fā)作的GVA感染患者的確診和治療更具指導(dǎo)意義。3.3gva合并用藥試驗(yàn)對分離所得65株GVA對8種抗菌藥物進(jìn)行敏感試驗(yàn),可見GVA對頭孢類、青霉素類抗菌藥物比較敏感,而對喹諾酮類、氨基糖苷類藥物敏感率較低。由此可推薦對GVA引起的陰道炎如未做藥敏試驗(yàn)的病例,臨床可首選頭孢類或青霉素類與甲硝唑或替硝唑抗菌藥物聯(lián)合治療,可明顯提高治療效果。筆者認(rèn)為甲硝唑或替硝唑類抗菌藥物能很好地殺滅厭氧菌,主要通過改變生殖道的pH值來抑制GVA的生長,而直接對GVA的殺滅作用并不明顯。3.4環(huán)境條件適用gva的生長目前對GVA的分離培養(yǎng)大多采用無菌棉拭子取陰道分泌物。研究顯示,取宮頸分泌物培養(yǎng)結(jié)果優(yōu)于陰道分泌物,且有雜菌少、pH值高、菌落生長良好和便于分離等優(yōu)點(diǎn)?？赡芙鼘m頸處的環(huán)境條件更適合GVA的生長。試驗(yàn)還顯示,GVA的分離率與分泌物的pH值高低呈高度正相關(guān)。進(jìn)一步證明了陰道乳酸桿菌的優(yōu)勢地位被大量GVA或混合性厭氧菌所代替,菌群失調(diào)及所致的陰道內(nèi)pH值的變化是引起B(yǎng)V的主要原因。GVA的分離率與分泌物中白細(xì)胞數(shù)的多少呈高度負(fù)相關(guān)。GVA能產(chǎn)生唾液酸酶,而可以分解針對GVA溶血素的IgA,使GVA的溶血素得以破壞白細(xì)胞,致使BV成為一種病理上無明顯炎癥的疾病。因此,當(dāng)可疑為BV時(shí)僅將陰道分泌物做常規(guī)的、特異性低的檢查,顯然不足以為臨床確診提供更具說服力的證據(jù)。3.5gva與bv的比較本調(diào)查報(bào)道156例BV患者GVA的總檢出率為39.7%,其中100例宮頸炎患者的GVA檢出率為41%;56例陰道炎患者的GVA檢出率為37.5%;而36例健康婦女GVA檢出率僅為8.3%,BV患者與健康婦女二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0