皮膚性病科麻風桿菌及麻風檢查技術(shù)操作規(guī)范

皮膚性病科麻風桿菌及麻風檢查技術(shù)操作規(guī)范一、皮膚切刮涂片檢查二、組胺試驗 三、出汗試驗 四、立毛肌試驗 一、皮膚切刮涂片檢查【適應(yīng)證】麻風病【禁忌證】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.皮膚取材法(1)取材部位皮膚經(jīng)碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，左手捏緊皮膚，使之缺血，右手持消毒的11號手術(shù)刀切長約5mm，深2?3mm切口。(2)以刀尖來回3-4次刮取切口邊緣和底部組織液，在刀尖上見到少量組織液時，立即涂抹在干凈載玻片上成直徑5?7mm圓形涂膜。(3)面部切口創(chuàng)面僅用消毒棉球止血5min，肢體部位可加膠布固定或用創(chuàng)可貼止血。(4)皮膚取材部位一般取4?6處，常規(guī)部位為左右眶上、左右耳垂加兩處皮損，皮損應(yīng)取病情最活動處。取材完畢后，涂片在火焰上烘干固定，送實驗室染色鏡檢。染色方法染色時可用加溫法或不加溫法，加溫法用時較短。(1)加溫法①將已固定的載玻片放在染色架上，滴加苯酚復紅染液覆蓋整個涂膜，用酒精燈在載玻片背面加溫15min，以染液勿沸騰為度，載玻片上染液干涸時要隨時添加染液。②傾去苯酚復紅染液，用自來水從載玻片的一端輕輕沖洗(勿直接沖洗涂膜），再加1%鹽酸乙醇作用15?30s，輕輕晃動載玻片使之脫色。如涂膜較厚，脫色時間可稍延長，待涂膜呈淡紅色為度。③在玻片上加0.3%亞甲藍（美藍）染液30?60s，用自來水從載玻片的一端輕輕沖洗。待載玻片干后鏡檢。亞甲藍復染的時間應(yīng)視涂膜的厚薄而定。涂膜厚時染色時間應(yīng)短，防止背景過深，鏡檢時視野透光不良，難以檢出紅染的抗酸桿菌而影響鏡檢結(jié)果。應(yīng)使涂膜的背景為淺藍色為宜。（2）不加溫法①在室溫條件下，在第一步染色中，滴加苯酚復紅染液30min，無須加溫，余染色步驟與加溫法同。②不加溫法染色，染色條件和結(jié)果都比較穩(wěn)定，值得提倡。理想的染片，應(yīng)該是背景淺藍色，在一個油鏡視野內(nèi)有數(shù)個炎癥細胞，提示組織液取材符合真皮深度，抗酸桿菌呈現(xiàn)鮮紅色。細菌密度標準計算Ridley推薦的一種10倍分級法，可大體反映皮損內(nèi)細菌密度，在現(xiàn)場防治和科研中被廣泛應(yīng)用。陰性:檢査100個以上油鏡視野未査到菌。1十:平均100個視野査到1?10條菌。2十：平均10個視野査到1?10條菌。3十：平均每個視野査到1?10條菌。4十：平均每個視野査到10?100條菌。5十：平均每個視野査到100?1000條菌。6十：平均每個視野査到1000條以上菌。4.細菌密度指數(shù)（BI）的計算BI=各涂膜細菌密度（+）數(shù)的總和/涂膜數(shù)【注意事項】1.取材部位要選取活動性皮損，如結(jié)節(jié)、斑塊、紅斑、彌漫性浸潤等。2.取材的深度一定要夠，一般為2?3mm，要捏緊皮損，防止出血，刀尖要確認刮到組織液后再涂片。因取材深度不夠而取組織液太少，不能形成符合規(guī)定的涂膜是產(chǎn)生査菌假陰性的主要原因。3.組織液取材勿含血液，否則會影響鏡檢結(jié)果，也是出現(xiàn)査菌假陰性的主要原因。4.抗酸染液一定要新鮮配制，一般勿超過1年。麻風診斷中已經(jīng)有因染液過期出現(xiàn)查菌假陰性而漏診的情況。5.染色要按規(guī)定操作方法進行，要根據(jù)涂膜的厚薄調(diào)整染色的時間。涂膜太厚，亞甲藍染色時間太長是涂片藍色背景太深而出現(xiàn)假陰性結(jié)果的常見原因。6.完整菌指菌體完整、染色均勻的正常形、超過1/2的短桿形及延仲形細菌。非完整菌為菌體斷裂、染色不均勻的顆粒形、小于1/2的斷裂形、雙球形、念珠形等。7.細菌形態(tài)對判斷麻風早期療效和復發(fā)很有用，在疑似復發(fā)的患者的涂片中見到較多的完整菌，則基本可確定麻風復發(fā)。經(jīng)過有效治療的患者，麻風菌均呈現(xiàn)顆粒狀，無完整菌存在。二、組胺試驗【適應(yīng)證】麻風病?！窘勺C】對所試藥物高度過敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.用碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，在正常和麻風皮損處分別皮內(nèi)注射1：1000的磷酸組胺溶液各0.1ml。2.約30s后，于正常皮膚注射處周圍出現(xiàn)第一個紅斑，直徑約10mm；再過30s，在上述紅斑周圍出現(xiàn)第二個紅斑，直徑30?40mm，邊緣彌漫；最后在紅斑中央出現(xiàn)風團a此為完整的三聯(lián)反應(yīng)。表明受試皮膚的神經(jīng)功能正常。3.三聯(lián)反應(yīng)的原理是最初出現(xiàn)的紅斑是皮膚毛細血管受組胺刺激而擴張所致，最后出現(xiàn)的風團是繼毛細血管擴張后，血漿滲出引起的局部水腫。重要的是第二個紅斑，是小動脈擴張所致。由于小動脈擴張的前提是支配其血管的末梢神經(jīng)要正常，并能通過軸突反射而傳導沖動才能完成，因此特別有意義。在神經(jīng)切斷，或用普魯卡因封閉神經(jīng)后，就不會有第二個紅斑。麻風患者由于皮損處末梢神經(jīng)受到破壞，所支配的小動脈不能擴張，也不出現(xiàn)第二個紅斑，稱三聯(lián)反應(yīng)不完整?！咀⒁馐马棥?.在炎性紅斑處不宜做此試驗，以免判斷失誤。2.組胺三聯(lián)反應(yīng)的不完整，不是麻風病所特有的，許多周圍神經(jīng)病變都町出現(xiàn)。3.皮損處的改變要與正常皮膚處對照觀察。三、出汗試驗【適應(yīng)證】麻風病?！窘勺C】對所試藥物高度過敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.淀粉法(1)在正常皮膚和皮損處用碘酒和75%乙醇消毒后，再各涂碘酒，待干后，分別皮內(nèi)注射1:1000的毛果蕓香堿溶液各0.1ml，擦干針尖處滲液，立即撒上薄層干燥淀粉。(2)3?5min后，正常皮膚部位淀粉處出現(xiàn)藍色小點或小片，表示出汗正常。(3)如果皮損處汗腺破壞或泌汗神經(jīng)破壞，泌汗功能障礙，則碘無法與淀粉發(fā)生作用，不出現(xiàn)藍點或藍色小片。2.試紙法(1)皮內(nèi)注射毛果蕓香堿后，用棉球擦去針眼處滲液，2mm后，將溴酚藍紙按在針眼處，輕輕加壓，15s后將紙取下，如有出汗則在溴酚藍紙上顯示針尖或稍大的藍色小點。(2)此法的試驗結(jié)果比較精確(3)溴酚藍紙的制備。取溴酚藍0.1g溶于95%乙醇溶液10ml內(nèi)配成1%溴酚藍溶液；用滴管將1%溴酚藍溶液滴在濾紙上，待自然干燥后成黃色的濾紙，剪成1cmX1cm大小備用?！咀⒁馐马棥恳嗽趯?cè)相應(yīng)或鄰近的正常皮膚處作對照，皮損處的變化要與正常皮膚處仔細觀察對比。四、立毛肌試驗【適應(yīng)證】麻風病?！窘勺C】對所試藥物高度過敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.在正常和皮損處先以碘酒和75%乙醇消毒后，分別于皮內(nèi)注射1:10萬的苦味酸煙堿溶液0.1ml。2.正常皮膚的末梢神經(jīng)未受