根系分泌物提取

方法二：馬尾松根系分泌物的鑒定及化感作用段劍根系分泌物的提取分離采用兩種不同的試劑進(jìn)行浸提，通過GC-MS進(jìn)行物質(zhì)鑒定，得出適宜馬尾松根系分泌物的提取方法。方法一：分別取馬尾松、楓香根際土壤于有蓋玻璃瓶中，按1：3的比例加入85%的乙醇，至于20℃磁力攪拌器，2600rpm浸提24h。再置于20℃高速離心儀中，3500rpm旋轉(zhuǎn)15min。離心后上清液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀脫去浸提劑，用乙酸乙酯（1：1）萃取2次，乙酸乙酯相為中性組分；再用1mol/L的HCl將水相的pH值調(diào)至3.0后，再用等量的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相為酸性組分；再用1mol/L的NaOH將水相pH值調(diào)至8.0，再用等量的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相為堿性組分。合并酸、中、堿性乙酸乙酯相，即為馬尾松、楓香根系分泌物提取液。方法二：分別取馬尾松、楓香根際土壤置于有蓋玻璃瓶中，按1：3的比例加入20%乙酸乙酯，置于20℃磁力攪拌器中，2600rpm浸提24h。再置于20℃高速離心儀中，3500rpm旋轉(zhuǎn)15min。離心后的上清液，即為馬尾松、楓香根系分泌物提取液。2、根系分泌的鑒定將上述兩種浸提方式得到的馬尾松、楓香根系分泌物提取液，35℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1ml，無水硫酸鈉脫水后，供GC-MS測試分析。檢測儀器為GC-MSAgilent-6890N/59731（美國安捷侖公司），色譜條件：色譜柱（Agilent122-3832）：30m×0.25mm×0.25um，DB-35ms；進(jìn)樣口溫度250℃；程序升溫：柱溫70℃（2min），以10℃﹒min-1升溫至280℃，20min；載氣：He；流速：1.0ml﹒min-1。質(zhì)譜條件：EI源（電子轟擊源）；轟擊電壓：70eV；離子源溫度：230℃；掃描范圍m/z：35-500amu；掃描速度0.2s掃全程；檢測器電壓500V；電流350uA；四級桿溫度：150℃；溶劑延遲時間3.0min；進(jìn)樣量：1.0uL；不分流進(jìn)樣。GC-MS數(shù)據(jù)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜譜庫NIST02獲得，采用面積歸一化法計(jì)算各類物質(zhì)的相對含量。方法三：烤煙根系分泌物的研究高欣欣1、具體方法為：取定量過濾后的收集液用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯相為中性組分；將剩余水相用1MHCl調(diào)節(jié)pH至2后，再用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯相為酸性組分；將剩余水相再用1MNaOH調(diào)節(jié)pH為8，用乙：酯萃取，得到乙酸乙酯相為堿性組分，將酸性、堿性和中性乙酸乙酯萃取液分別減壓濃縮至1ml（45℃），過0.45μm濾膜。2、根系分泌物的硅烷化處理利用常文理于1990年提出的方法，將乙酸乙酯萃取后的上述濃縮樣品中分別加入0.25mL硅烷化試劑（BSTFA:TMC=5:1），加蓋密封后于80℃水浴中衍生2h，待測。原因是什么？？？？3、GC-MS分析條件經(jīng)硅烷化處理后的各組分根系分泌物采用Agilent7890A-5975C進(jìn)行儀器分析測定。毛細(xì)管柱采用HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm），進(jìn)樣口溫度為250℃，升溫程序?yàn)?0℃（2min），以6℃/min程序升溫至250℃（保持15min）。載氣為He，流量1ml/min，進(jìn)樣量為1μl，離子源溫度230℃，轟擊電壓70eV。應(yīng)用NIST98質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，分析質(zhì)譜圖，確定物質(zhì)組成。方法四：刺槐根系分泌物的研究石鑫第一種提取辦法是參考了尹玉蓮等人對橡膠樹以及王晗光等人對巨桉根系分泌物測定時的超聲浸提法。此辦法操作較為簡單,只需要將過篩后的土壤放入具塞錐形瓶中,加入正己垸到完全淹沒土樣,再超聲浸提20-30min,過0.45um微孔濾膜,將過濾的溶液在35℃條件下旋轉(zhuǎn)濃縮至2mL,即得到根系分泌物的待測液(尹玉蓮等,2008;王晗光等,2009)。第二種是三性萃取法,該方法參考了張汝民等對梭梭的根系分泌物提取的經(jīng)驗(yàn)。首先取根系土lOOg于容量瓶中,加入蒸餾水50ml,置于20℃搖床中,lOOrpm消化24h。再將容量瓶放于20℃高速離心儀中,3500rpm旋轉(zhuǎn)15min。將離心后上清液用乙酸乙酷萃取2次,得中性成分;再將上清液用Imol/L的HC1調(diào)PH至4,萃取,得酸性組分;用Imol/L的NaOH將上清液的PH值調(diào)至9,萃取得堿性組分。合并乙酸乙酯相,在35°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至0.5ml,即得到根系分泌物待測液(張汝民等,2007)。方法三是邵東華、寧心哲、樊石磊等對油松、虎榛子根系分泌物實(shí)驗(yàn)時萃取硅烷化法的改進(jìn)。首先稱取lOg土樣放入燒杯,用50mllmol/L的NaOH溶液淋洗植株根系,收集洗液,倒入盛有l(wèi)Og土的燒杯中;放到20℃搖床上,180rmin消化lOh;過濾2-3次,取20mL濾液,調(diào)節(jié)pH值到2.5-3,滴入飽和NaCl,用乙醚萃取3次,合并醚相,轉(zhuǎn)入心型瓶中,旋轉(zhuǎn)濃縮至干;滴入甲醇,溶解瓶壁上物質(zhì),并移入直徑為1.8-2.0mm毛細(xì)管,抽干;加入8ul硅院化試劑,lOO'C衍生Ih后便為待測液(邵東華等,2011)使用的第四種方法是陳華君、金幼菊等人在對楊樹等根系分泌物測定時的萃取甲酯化提取方法。首先取200g跟際土,加入適量70%的乙醇,超聲10min,此步驟重復(fù)3次。抽濾、減壓濃縮、離心。將上清液40ml用2mol/L的HC1調(diào)pH至2-3,用O.lmol/L乙酸飽和的乙酸乙酯萃取3次,將有機(jī)相合并,在4(rC條件下解壓濃縮至干,CH2N2甲酯化后,即為酸性物待測液。再取上淸液40m用0.1mol/L磷緩液緩液調(diào)pH≥8,用O.lmol/L憐緩飽和的正丁醇萃取3次,將有機(jī)相合并,在55°C條件下解壓濃縮至干，用硅烷化試劑進(jìn)行TMS衍生化,即為堿性物待測液(陳華君等,1997)方法三：梭梭幼苗根系分泌物提取方法的研究＊張汝民1.4根系分泌物的收集和提取根系分泌物的水浸提取:取生長良好的梭梭幼苗,將其無損傷從石英砂中取出,用500ml蒸餾水浸石英砂24h,浸提液離心,上清液用乙酸乙酯萃取其酸性、堿性和中性成分。方法為:將離心上清液用乙酸乙酯萃取3次(每次用乙酸乙酯10ml),得到乙酸乙酯相為中性組分;將水相用1MHCl調(diào)節(jié)pH至3后,再用乙酸乙酯萃取3次(每次用乙酸乙酯10ml),得到乙酸乙酯相為酸性組分;將水相再用1MNaOH調(diào)節(jié)pH為8,用乙酸乙酯萃取3次(每次用乙酸乙酯10ml),得到乙酸乙酯相為堿性組分,將酸性、堿性和中性(原液)乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至1ml(45℃),用于進(jìn)行GC/MS分析。根系分泌物的循環(huán)灌溉收集:將生長良好的梭梭幼苗培養(yǎng)盆下面安裝一個塑料管與根系分泌物收集器相連接,通過收集器中XAD-16樹脂吸附根系分泌物后的溶液又循環(huán)到培養(yǎng)盆中,如此連續(xù)循環(huán)5d后,將收集器中XAD-16樹脂吸附的根系分泌物用甲醇洗脫,收集洗脫液為梭梭根系分泌物提取液。然后,45℃減壓濃縮至1ml,再用1ml乙酸乙酯萃取,用于進(jìn)行GC-MS分析測試。將野外采集沙棘根系及根系表面0-3mm土壤然風(fēng)干,土壤過100g。稱取lOg土放入燒杯;用50mnrnol/L的NaOH溶液淋洗沙棘根系,收集洗液,倒入盛有l(wèi)Og土的燒杯