氣相色譜-質(zhì)譜法測定麻黃湯中黃柏醛含量的研究

氣相色譜-質(zhì)譜法測定麻黃湯中黃柏醛含量的研究

“藥有個性，方有融合效應(yīng)?！蔽覀冃枰每茖W(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來闡明處方的內(nèi)涵和含義。本課題以麻黃湯為工具方對其配伍進(jìn)行研究。該方由君藥麻黃、臣藥桂枝、佐藥杏仁、使藥炙甘草組成。本實(shí)驗(yàn)從麻黃湯不同組合對桂皮醛含量的影響,研究了麻黃湯配伍的規(guī)律,為深入研究該方提供參考。1酸鈉phHP6980—MS5973氣相色譜-質(zhì)譜儀(美國安捷倫),DB-17彈性石英毛細(xì)管(30m×0.5mm×0.25mm),定量移液器(德國Eppendorf,200μL,1000μL),410A型pH計(jì)(美國Orion)。麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf.的干燥草質(zhì)莖,桂枝為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝,杏仁為薔薇科植物山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.的干燥成熟種子,甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根莖。飲片購自廣東省藥材公司中藥飲片廠,經(jīng)本校中藥鑒定學(xué)教研室鑒定。桂皮醛(中國藥品生物制品檢定所,批號:710-200011),試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1麻黃湯供試品溶液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2.1.1色譜/質(zhì)譜條件:色譜柱:HP-5彈性石英毛細(xì)管(30mm×0.5mm×0.25mm),進(jìn)樣量:1μL,無分流進(jìn)樣,進(jìn)樣口溫度:220℃,載氣:He,載氣為恒流模式,柱流量:1.0mL/min。柱初溫:120℃,以8℃/min升至250℃,接口溫度:280℃,離子源:EI,電離能量:70eV,倍增電壓:1675V。2.1.2對照品溶液的制備:精密吸取桂皮醛對照品60μL,置5mL量瓶中,加醋酸乙酯至刻度,即得。2.1.3供試品溶液的制備:準(zhǔn)確稱取麻黃9g、桂枝6g、杏仁6g、甘草3g,加240mL水,浸泡30min,加熱回流30min,脫脂棉濾過,用90℃水洗滌藥渣3次,10mL/次,加水至250mL。取10mL全方煎液加20mL醋酸乙酯,振搖萃取30min,取醋酸乙酯層即得麻黃湯供試品溶液。準(zhǔn)確稱取麻黃9g、杏仁6g、甘草3g,按照全方供試品溶液制備的方法操作,得缺桂枝的陰性對照溶液。2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:取桂皮醛對照品溶液100μL置10mL量瓶中,加醋酸乙酯至刻度。取0.5,1.0,1.5,2.5,3.5mL分別置5mL量瓶中,加醋酸乙酯至刻度,按照上述色譜/質(zhì)譜條件分析。以桂皮醛濃度(C)為橫坐標(biāo),總離子豐度(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得桂皮醛回歸方程A=5.0×108C-3.41×105,r=0.9999。表明桂皮醛在0.012～0.12μL/mL與總離子豐度有良好的線性關(guān)系。2.1.5干擾性考察:取缺桂枝的陰性對照溶液測定,結(jié)果tR=(4.91±0.01)min處無色譜峰,表明其他3味藥對桂皮醛的定量無干擾。色譜圖見圖1。2.1.6精密度試驗(yàn):取桂皮醛對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,結(jié)果豐度的RSD=1.02%。2.1.7穩(wěn)定性試驗(yàn):取對照品溶液分別在0,4,8,12,16,24h測定,結(jié)果所得豐度的RSD為2.57%。表明桂皮醛溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.1.8重現(xiàn)性試驗(yàn):取麻黃湯供試品溶液10mL5份,進(jìn)樣測定,結(jié)果所得桂皮醛含量的均值為10.448μL/劑,RSD為2.26%。2.1.9回收率試驗(yàn):取缺桂枝陰性供試品溶液5mL12份,分為3組,分別加入桂皮醛對照品0.12,0.36,0.90μL,各加10mL醋酸乙酯,振搖萃取30min,取醋酸乙酯層,進(jìn)樣分析,結(jié)果平均回收率為101.30%,RSD為1.56%。2.2黃從環(huán)境質(zhì)量對地震數(shù)據(jù)處理的影響2.2.1正交設(shè)計(jì):選麻黃(因素A)、杏仁(因素B)、甘草(因素C)作為3個因素,選“有”和“無”為2個水平,因素水平見表1。2.2.2試驗(yàn)安排:采用L8(27)正交設(shè)計(jì)安排試驗(yàn),結(jié)果見表2。2.2.3統(tǒng)計(jì)分析:采用SPSS10.0分析軟件進(jìn)行處理,結(jié)果表明麻黃、杏仁對桂皮醛的含量降低的影響差異具有顯著性(P<0.05),甘草及兩兩交互作用的影響差異不具有顯著性(P>0.05)。結(jié)果見表3。2.3測定ph值單味藥麻黃9g、杏仁6g、甘草3g按2.1.3項(xiàng)下“加240mL水……至250mL”操作,30℃下測定pH值,結(jié)果見表4?？梢姼鹘M合pH值變化不明顯,尤其是顯著降低桂皮醛溶出量的麻黃、杏仁對桂枝水煎液pH值的影響不明顯。3組本實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1麻黃能顯著降低桂皮醛的溶出量,究其原因:從pH值變化的角度分析,30℃下麻黃與桂枝合煎與桂枝單煎相比pH值的改變不明顯,提示麻黃對桂皮醛溶出量的影響可能與pH值無關(guān)。從產(chǎn)生新化合物的角度分析,有報(bào)道麻黃湯中麻黃堿與桂皮醛反應(yīng)生成新化合物,該新化合物在熱水中不穩(wěn)定。但在本實(shí)驗(yàn)條件下未檢測出該成分,可能因?yàn)樾禄衔飺]發(fā)性差,不適于用GC-MS分析檢測;或在醋酸乙酯中不穩(wěn)定或溶解度甚微。原因有待進(jìn)一步研究。3.2杏仁顯著降低桂皮醛溶出量。在30℃下杏仁對桂枝湯液pH值影響不大,提示杏仁對桂皮醛溶出量的影響可能與pH值無關(guān)。原因有待進(jìn)一步研究。3.3本實(shí)驗(yàn)條件下,檢測出桂枝中的另3個成分,均達(dá)到較好的分離,經(jīng)MS鑒定分別是r-苯基丙烯醇(tR=5.21min)、香豆素(tR=7.50min)、p-甲氧基肉桂醛(tR=7.92min)。以豐度值對3種化合物定量,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果表明麻黃、杏仁、甘草及兩兩交互作用對三者含量