2023屆新高考生物沖刺復習微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

2023屆新高考生物沖刺精品復習

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

課標要求

1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)。

2.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的基礎(chǔ)。

3.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品和無菌區(qū)域不被微生物污染的

技術(shù)。

4.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的的培養(yǎng)某種微生物。

5.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進行微生物分離和純化的常用

方法。

6.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法。

考點一微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

考點二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

重溫高考真題演練

考點一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

L培養(yǎng)基的配制

⑴概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其牛長繁殖

的營養(yǎng)基質(zhì)。

⑵用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。

(3)類型：按物理狀態(tài)分類

培養(yǎng)基種類特點用途

液體培養(yǎng)基不含凝固劑,呈液體狀態(tài)工業(yè)生產(chǎn)

含凝固劑(如瓊脂),呈固微生物的分離、鑒定，活菌

固體培養(yǎng)基

拴狀態(tài)計數(shù)，菌種保藏

(4)成分

成分含義作用來源

構(gòu)成生物體的細胞的物質(zhì)無機碳源：co

提供碳元素2

碳源和一些代謝產(chǎn)物，有些也NaHCOs等；有機碳源：

的物質(zhì)

是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)糖類、牛肉膏等

無機氮源：N>NH3、

提供氮元素2

氮源合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)鍍鹽、硝酸鹽等；有機

的物質(zhì)

氮源：蛋白豚等

為微生物提供除碳、無機化合物：

氮之外的各種重要為微生物提供無機營養(yǎng)，KH2Po仆

無機鹽

兀素，包括大量兀

調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等K2HPO4>

素和微量元素NaCl等

生物體含量最高的良好的溶劑，參與化學培養(yǎng)基、代

水

無機化合物反應(yīng)等謝產(chǎn)物

除了上述主要營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)

以及氧氣的需求。例如，在培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加維生.

素；在培養(yǎng)霉菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性;在培養(yǎng)細菌時，一般

需要將培養(yǎng)基調(diào)至生性或弱堿性;在培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供三氧_

的條件。

2.無菌技術(shù)

(1)目的：獲得純凈的培養(yǎng)物。

(2)關(guān)鍵：防止雜菌污染。

(3)區(qū)別：消毒與滅菌的比較

比較項目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍

煮沸消毒法日常用品

較為溫和僅殺死物巴氏消毒法不耐高溫的液體

的物理、一體表面或操作空間、操作者的衣

消毒化學藥物消毒法

化學或生內(nèi)部一部物和手等

物等方法分微生物接種室、接種箱或超凈

紫外線消毒法

工作臺

濕熱滅菌法培養(yǎng)基、容器等

殺死物體內(nèi)

強烈的理化外所有的微玻璃器皿、

滅菌干熱滅菌法

方法生物，包括金屬用具等

芽泡和范子

灼燒滅菌法接種工具等

選擇無菌技術(shù)的原則：一要考慮無菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要

好；二要考慮操作對象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能

采用消毒，而不能用滅菌。

(4)其他操作

①做好消毒和滅菌工作后，要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與晅圍_

的物品接觸。

②為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接下來的許多操作都應(yīng)在超凈工

作臺上并在酒精紅火焰附近進行。

源于選擇性必修3Pi?！跋嚓P(guān)信息”：生物消毒法是指利用生

物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。

3.微生物的純培養(yǎng)

(1)概念辨析

「一」接種于培養(yǎng)基內(nèi),在合適條件下形成

〔受弛一戶的含特定種類微生物的群體

〃純培養(yǎng)物卜由單一個體繁殖所獲得的微生物群體

分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表

’菌落］面或內(nèi)部繁殖形成的肉眼可見的、有

一I-一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體

’純培養(yǎng)「獲得純培養(yǎng)物的過程

V_________________________J

⑵酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟

配制培養(yǎng)基：稱取去皮的馬鈴薯200g、切塊一

加水1000mL、加熱煮沸一紗布過濾一

加20g葡萄糖~加15?20g瓊脂，用蒸鐳

I水定容至1000mL

「a.培養(yǎng)基滅菌：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）法

滅菌J..............................

lb.培養(yǎng)皿滅菌：干熱滅菌法

a.條件：待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在

酒精燈火焰附近倒平板

b.操作步驟:

Inmiv

c.I、U、HI中的滅菌方法是灼燒滅菌

d.N中的操作需要等待平板冷卻凝固

、后才能進行

接種和［方法：平板劃線法

分離1原理：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)

I劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋

分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后

培養(yǎng)，可以分離得到單菌落

r方法：將接種后的平板和一個未接種的平

板倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱中中培養(yǎng)

培養(yǎng)酵＜

母菌,

條件：28七左右

I時間：24~48h

請思考以下問題：

①平板冷凝后，要將平板倒置的原因是什么？

提示因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培

養(yǎng)基表面的水分過快地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成

污染。

②在接種前隨機取若干個滅菌后的未接種的平板，先行培養(yǎng)了一段時間,

這樣做的目的是.檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格

⑶平板劃線法操作步驟

①將接種環(huán)放在火焰②在火焰旁冷卻接種環(huán).

上灼燒，直到接種環(huán)同時，拔出裝有障母菌

的金屬絲燒紅培養(yǎng)液的試管的棉塞

⑤將試管口通⑥在火焰附近將皿蓋打開

過火焰，并塞一條縫隙，用接種環(huán)在培

上棉塞養(yǎng)基表面迅速劃三至五條

平行線，蓋上皿蓋

⑦均燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一_

次劃線的末端開始作第二次劃線。$^

復以上操作，作第三、四、五次劃線。足魂

注意不要將最后一次的劃線與第一次

的劃線相連。

據(jù)圖思考以下問題：

a.第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，這樣做的目

的是什么？

提示能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由

單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。

b.操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行火焰灼燒滅菌,

劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒的目的填寫下表：

項目第一次操作每次劃線之前劃線結(jié)束

殺死上次劃線后接種

環(huán)上殘留的菌種，使

殺死接種環(huán)上殘存的

殺死接種環(huán)上原下次劃線的菌種直接

目的菌種，避免微生物污

有的微生物來源于上次劃線的末

染環(huán)境和感染操作者

遛，使每次劃線菌種

數(shù)目減少

C.平板劃線時最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？

提示最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個細胞，如果與第一次劃線

相連，則增加了酵母菌數(shù)目，得不到純化的效果。

考向突破強化關(guān)鍵能力

考向一培養(yǎng)基與無菌技術(shù)

1.無菌技術(shù)包括以下幾個方面的敘述，其中正確的是

e紫外線照射前，適量噴灑石炭酸等消毒液，可以加強消毒效果

B.牛奶的消毒常用紫外線消毒法

C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.在微生物接種的實驗中，用95%酒精對實驗者的雙手和超凈工作臺進

行消毒

2.請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題：

⑴下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。

顯色劑

成分蛋白陳乳糖蔗糖K2HPO4瓊脂

含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸儲水定容到1000mL

該培養(yǎng)基屬于固體（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的氮源

是蛋向陳。

⑵在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿

進行滅菌（填“消毒”或“滅菌”）；操作者的雙手需要進行清洗和消毒。

⑶將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管扎成一捆，

包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌,溫度為121℃,

時間為15?30min。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時,

將試管取出。

(4)從一支試管向另一支試管接種時應(yīng)注意，接種環(huán)要在酒精燈_火焰的.

一充分燃燒層工填“火焰的不充分燃燒層”或“火焰的充分燃燒層”)滅

菌，并且待接種環(huán)冷卻后蘸取菌種。

考向二微生物的純培養(yǎng)

3.如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1—2—3—4—5,下列說

法正確的是

A.操作前要將接種環(huán)用酒精消毒

由戊」線操作須在酒精燈火焰附近進行

C.只有在5區(qū)才可以得到所需菌落

D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都不需要對接種環(huán)滅菌

解析

在每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌，接種環(huán)

的滅菌方法應(yīng)是在酒精燈火焰上灼燒，不能用酒

精消毒；在5個區(qū)域中，只要有單個活細菌，通過

培養(yǎng)即可獲得所需菌落；每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死

接種環(huán)上原有的微生物（第一次劃線前）和上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘

留的菌種，使每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，劃線結(jié)束

后灼燒接種環(huán)以防止污染環(huán)境和感染操作者。

4.（2022.山西高三適應(yīng)考試）自然界里有多種微生物，將其進行合理的篩

選、培養(yǎng)和應(yīng)用，能給醫(yī)藥和化工等生產(chǎn)領(lǐng)域帶來巨大經(jīng)濟效益?；卮?/p>

下列問題：

⑴對培養(yǎng)基進行滅菌時，多采取高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）法,而對接種

環(huán)或涂布器滅菌時則用灼燒滅菌法,若要將微生物采用平板劃線法進行

分離操作，在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進行了5次劃線，則需要對接種環(huán)灼燒

6次。平板劃線在做第二次及其以后的劃線操作時，要從上次劃線的

末端開始劃線,最后一次劃的線不能與第一次劃的線把連。

⑵將接種后的固體培養(yǎng)基和一個未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中倒置

培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。其中，培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是

為了作為對照組，檢驗培養(yǎng)基是否被雜菌污染.

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考點二

微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

梳理歸納I夯實必備知識

1.區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基

種類特點用途舉例

允許特審種類的微牛物牛.從眾多微生

選擇加入青霉素分離得

長，同時抑制或阻止其他物中分離所

培養(yǎng)基到酵母菌和霉菌

種類微生物生長需的微生物

根據(jù)微生物的代謝特點在

鑒別培養(yǎng)基中加入某種指示劑鑒別不同種用伊紅一亞甲藍培

培養(yǎng)基或化學藥品，進而產(chǎn)生特類的微生物養(yǎng)基鑒別大腸桿菌

定的顏色或其他變化

常見選擇培養(yǎng)基舉例：①缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的

微生物。②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細菌，篩選出真菌。③無有機碳源

的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。

2彳微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定

⑴稀釋涂布平板法步驟

①系列稀釋操作：該操作常用在將細胞接種到培養(yǎng)基之前，通過液體稀

釋的方法分散細胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細胞數(shù)

量減少，細胞得以分散。

操作步驟:

無菌水

②涂布平板操作步驟

涂布器

取0.1mL菌液滴加到涂布器浸在盛有

培養(yǎng)基表面酒精的燒杯中

將涂布器在火焰上用涂布器將菌液均勻地涂

灼燒，待酒精燃盡、布在培養(yǎng)基表面。涂布時

涂布器冷卻后，再可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻

進行涂布

⑵微生物的數(shù)量測定方法

①顯微鏡直接計數(shù)法

利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板,

原理）一在顯微鏡下計數(shù)一定容積的樣品中微生

物的數(shù)量

（方法用計數(shù)板計數(shù)

缺點）一不能區(qū)分死菌與活菌而使計數(shù)結(jié)果偏大

②間接計數(shù)法活菌計數(shù)法（即稀釋涂布平板法）

原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源

于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣

品中大約含有多少活菌。

計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C：V）xM

C代表某一稀釋’V代表涂布平板'

用代表稀

度下平板上生長時所用的稀釋液

釋倍數(shù)

的平均菌落數(shù)的體積（mL）

根據(jù)圖示問答以下問題：

I.為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板進行計數(shù)。

II.為什么用此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目低？

提示因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。

III.某同學在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234個

（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL）,那么稀釋倍數(shù)為106的試管中細

菌的濃度是一2.34*103個/mL,稀釋倍數(shù)為10的錐形瓶中細菌的濃度為

2.34408個/mL,所以每克樣品中的細菌數(shù)是2.34”。9個。

3.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)的實驗操作

(1)實驗原理

①土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因

為它們能合成脈酶；

分離②配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠

原理

I在該培養(yǎng)基中生長的細菌就是能分解尿素

丘勺細菌_________________

(2)實驗流程

①土壤取樣:從酸堿度接近中性的潮濕土壤中，鏟去表

層土，取距地表3?8cm的土壤層

②樣品的稀釋:通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行

培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30?300的

平板適于計數(shù)

ra.接種：用稀釋涂布平板法接種;

③微生b.培養(yǎng)條件：30?37"培養(yǎng)一點;

物的培(c.觀察：根據(jù)菌落的特征區(qū)分微生物；

養(yǎng)與觀d.計數(shù):每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取

察菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果

④計算：計算單位體積中的菌體數(shù)

(3)實驗結(jié)果分析與評價對照的培養(yǎng)皿

,中無菌落生長一未被雜菌污染

有無雜

菌污染,對照的培養(yǎng)皿

［的判斷)

、中有菌落生長一被雜菌污染

「培養(yǎng)基］

.選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)選擇培養(yǎng)

是否具

＜目遠少于牛肉膏蛋白陳一基具篩選

篩選作

、培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目作用

,樣品稀,得到3個或3個以上菌落_操作

釋評價數(shù)目在30?300的平板一成功

V_____/

‘重復組、r比較各一若選取同一種土樣，統(tǒng)

重復組一計結(jié)果應(yīng)接近

的結(jié)果I

\_______/

選擇性必修3P19“探究?實踐”：本活動初步篩選了能分解尿

素的細菌，請進一步借助于生物化學的方法來鑒定所分離的菌種:

分解尿素的細菌合成的服酶可以將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基

的堿性增強，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變

紅“何田菌能夠分解尿菽。

考向一微生物的選擇培養(yǎng)

5.（2021.江蘇1月適應(yīng)性考試，14）稀釋涂布平板法是分離菌種常用的方法,

下列相關(guān)敘述不恰當?shù)氖?/p>

A.固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50c左右時倒平板

學到好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長

C.稀釋涂布平板分離到的單菌落需進一步劃線純化

D.稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計數(shù)

解析

培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻至50°C左右時才能用來倒平板，避免溫度過

同，A正確；

倒好的平板需要放置一段時間，用以觀察培養(yǎng)基是否被雜菌污染，B

錯誤；

稀釋涂布平板法分離的單菌落需要用平板劃線法進行純化培養(yǎng)，C正確；

稀釋涂布平板法可以計數(shù)，也可觀察菌落特征進行菌種分離，D正確。

___________________________________________________________J

6.營養(yǎng)缺陷型菌株是野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種

成長因子的能力，只能在補充了相應(yīng)的生長因子的基本培養(yǎng)基中才能正常

生長的變異菌株。某研究小組對酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養(yǎng)

皿的培養(yǎng)基上，一段時間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種（不改變菌落位置）到

乙、丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進一步培養(yǎng)得到如下圖所示結(jié)果。

?酵母菌菌落。無菌落生長

■酵母菌菌落。無菌落生長

下列分析正確的是

A.接種到甲培養(yǎng)皿采用的是平板劃線法

B.甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基

g年培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少

D.甲、乙、丙三個培養(yǎng)皿都可能存在營養(yǎng)缺陷型菌落

解析

甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布，接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A項錯誤;

甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，包括野生型酵母菌菌株和某種營養(yǎng)缺陷型

酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿沒有生長的菌株是某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株,

故乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙生長了同樣的菌株，則甲

和丙是加入了同種生長因子的培養(yǎng)基，B項錯誤；

甲乙丙

■酵母菌菌落。無菌落生長

解析

由于基因突變具有不定向性，接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他

營養(yǎng)缺陷型菌株，且有些菌落不一定由一個酵母菌形成，所以，甲培

養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C項正確；

乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基,形成的菌落只可能是野生型菌落,

D項錯誤。

影印接種、

甲乙丙

?酵母菌菌落仁，無菌落生長

兩種純化方法的比較

項目平板劃線法稀釋涂布平板法

分離國

結(jié)果

關(guān)鍵接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連①一系列的梯度稀釋；②涂

操作續(xù)劃線布平板操作

接種

接種環(huán)涂布器

用具

兩種純化方法的比較

可以觀察菌落特征，對混

優(yōu)點可以計數(shù)，可以觀察菌落特征

合菌進行分離

缺點不能計數(shù)操作復雜，需要涂布多個平板

都要用到固體培養(yǎng)基；都需進行無菌操作；都會在培養(yǎng)

共同點

基表面形成單個的菌落；都可用于觀察菌落特征

考向二微生物的分離和計數(shù)

7.（2020.全國I,37）某種物質(zhì)S（一種含有C、H、N的有機物）難以降解，

會對環(huán)境造成污染，只有某些細菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程

從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種

培養(yǎng)基，甲的組分為無機鹽、水和S,乙的組分為無機鹽、水、S和Y。

稀釋涂挑單菌多次

高效降

解S的

菌株

無菌水甲乙甲

回答下列問題：

⑴實驗時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）的

方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均屬于詵擇

培養(yǎng)基。

稀釋涂挑單菌多次

警高效降

人二解S的

菌株

解肺

乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入的是可使液體培養(yǎng)基凝固

的瓊脂。甲、乙兩種培養(yǎng)基都是為了分離出可降解S的細菌，因此是

選擇培養(yǎng)基。

⑵實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2"。7個/mL,若要在每個平板上

涂布100pL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，

則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋1。4倍。

多次

臂高效降

三解S的

菌株

解析

設(shè)稀釋倍數(shù)為41mL=1000比，套用計算式：A*言咚

0.1mL

2M07（個/mL）,計算出A=10、

⑶在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌

株對s的降解量反而下降，其原因可能是S的濃度超過某二值.時會抑制直

榛的生長一（答出1點即可）。

高效降

解s的

菌株

解析

在篩選降解S物質(zhì)的細菌的過程中，如果培養(yǎng)基中的s濃度過高，會

導致細菌培養(yǎng)基的滲透壓增大，細菌失水而代謝活性降低，對S的降

解量反而下降（或者S改變了培養(yǎng)基的pH,導致細菌代謝活性降低）。

(4)若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，請寫出主要實驗步驟：取淤

泥加入無菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù)。

稀釋涂挑單菌多次

贊高效降

旦解S的

菌株

無菌水甲乙甲

解析

測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)的主要步驟是①淤泥取樣，即取少

量的淤泥加入無菌水中；②用稀釋涂布平板法涂布到乙培養(yǎng)基上；③

微生物培養(yǎng)與觀察計數(shù)。

⑸上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細

菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即一水二碳遮二氮源和無機鹽。

稀釋涂挑單菌多次

警高效降

一f解S的

無菌水甲乙甲菌株

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1.（2021?山東,14）解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪

酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色。將不能直接吸

收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌

落周圍呈現(xiàn)深藍色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯誤的是

A.甲菌屬于解脂菌

中實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源

C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比

D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力

O??(1

----------------------------------------------------------------------------------------------x

根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色”，說明甲可以分泌脂肪

酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯?/p>

藍色，因此甲菌屬于解脂菌，A項正確；

乙菌菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍色，說明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利

用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不

是以脂肪為唯一碳源，B項錯誤；

\)

O②③④

解析

可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比，更加直觀，C

項正確；

可以利用該平板來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標可以是

菌落周圍深藍色圈的大小，D項正確。

O②③④

2.（2021.山東，20）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導致生

活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵鏤結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭

水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運動能力，用穿刺接種的方

法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵鏤的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，如圖所

示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說法錯誤的是

A.乙菌的運動能力比甲菌強

好不影響菌的運動需選用液體培養(yǎng)基

C.該實驗不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量

D.穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染

D?(Dg

從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌,

說明了乙菌的運動能力比甲菌強，A正確；

為不影響菌的運動需選用半固體培養(yǎng)基，B錯誤；

該實驗可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較細菌產(chǎn)

生硫化氫的能力，但不能測定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確;

微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。

D?③g

3.（2020.江蘇，19）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細

菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是［區(qū)

A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整夕

電圖中I、II區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應(yīng)從ni區(qū)挑取單菌落至J

c.該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的\--y

、一/n區(qū)

D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色

12O4

解析

溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時區(qū)

輕輕晃動，以保持均一性，A項錯誤；涔

由題圖可見，隨著劃線次數(shù)增多，細菌密度減小，:

ni區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從ni區(qū)挑取單菌落，B項正確;區(qū)

菌落是由單個微生物細胞或多個同種細胞繁殖到一定程度后形成的，

能得到單菌落即可以達到菌種純化的目的，c項錯誤；

剛果紅與纖維素形成紅色復合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色

消失，出現(xiàn)透明圈，D項錯誤。

?）（2）?（4

4.（2020?江蘇，31）產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵

母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：

⑴常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是金（填編號）。

編號①②③

物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器

滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧

D@@O

⑵稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)才弟度_

稀釋_后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0」mL菌懸液涂布在固體

培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則

該樣本中每克土壤約含酵母菌4.6，105（或460000）個。

123

解所

利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要將制備的菌懸液進行梯

度稀釋，以獲得細胞密度不同的菌懸液，一般來說，菌落數(shù)在30?

300個的平板最適于計數(shù)。0.1mL菌懸液中含有46個酵母菌落，貝”mL

菌懸液中含有460個酵母菌落；1.0g土壤樣品首先稀釋100倍，然后

稀釋10倍，共稀釋了1000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌

460，1000=4.6*1。5（個）。

①②叵

⑶為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照

進行誘變育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以噩位為唯一碳源的固體

培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑較大

的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。

123

解析

采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查

誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳

源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進行初步篩選，直徑大的說

明產(chǎn)酶能力強，利用的脂肪（碳源）多，直徑小的說明產(chǎn)酶能力弱，

利用的脂肪（碳源）少。

（T）（2）（3

(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為

評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，

應(yīng)選擇菌株』進行后續(xù)相關(guān)研究，理由是_該菌株增殖速度快，一單細胞

蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果好。

菌株A-脂菌株B-細

(肪剩余胞密度

O

QO2.5-+---+-■100

O

)2。-80

W

菌株-細

拚A

-60

是胞密度

每1.0