抗生素敏感試驗操作規(guī)程

抗生素敏感試驗操作規(guī)程一、 抗生素敏感試驗原理：抗生素敏感試驗是測定抗生素或其它抗微生物制劑在體外抑制細(xì)菌生長的能力，通常用擴散法或稀釋法。1、 擴散法敏感試驗：有抗生素的紙片或藥片貼在已接種試驗菌的平板上，抗生素濃度梯度通過紙片上的抗生素的彌散作用而形成，距紙片一定范圍內(nèi)試驗細(xì)菌的生長受到抑制，這種抑制生長與細(xì)菌敏感及其他諸因素相關(guān)。2、 稀釋法敏感試驗：為了定量測定抗生素的活性，抗生素與肉湯或瓊脂培養(yǎng)基混合進行稀釋，然后種入試驗細(xì)菌，孵育過夜，以最低濃度抑制細(xì)菌生長的，稱為最低抑菌濃度（MIC），然后將最低抑菌濃度與機體血清或體液中可獲得濃度相比較，來確定恰當(dāng)?shù)呐R床治療濃度。（1）最低抑菌濃度（minimalinhibitoryconcentration。MIC）:抗菌藥物能夠抑制細(xì)菌生長所需要的最低濃度。單位：pg/ml或U/ml,mg/L。（2）最低殺菌濃度（minimalbacteriacidalconcentration，MBC）:抗菌藥物殺滅細(xì)菌所需要的最低濃度。單位：pg/ml或U/ml，mg/Lo（3） MIC90:能抑制90%試驗菌株的最低藥物濃度，即為該藥對被測菌的MIC90o（4） MIC50：能抑制50%試驗菌株的最低藥物濃度，即為該藥對被測菌的MIC50o二、 抗生素敏感試驗的作用：1、 指導(dǎo)臨床醫(yī)生對各患者選擇最佳抗生素。2、 在一定區(qū)域內(nèi)積累對公共衛(wèi)生有關(guān)的重要耐藥的微生物流行病學(xué)資料。三、 抗生素敏感試驗的臨床意義：1、 敏感：表示被測細(xì)菌引起的感染，除禁忌癥外，可用該抗生素常用劑量而達(dá)到治療的目的。2、 中介：表示被測菌株可通過提高劑量受到抑制，或在藥物被生理性濃集的部位受到抑制，由于微小的技術(shù)因素失控可以對結(jié)果解釋錯誤，所以這一范圍只是抑菌環(huán)直徑介于敏感和耐藥之間的“緩沖域”抑菌環(huán)落入中介范圍，其意義不明確，如果沒有其他可以替代的藥物，應(yīng)重復(fù)或再以稀釋法測定MICo3、耐藥：被測菌不能被該抗生素的常用劑量在組織內(nèi)或血液中的濃度達(dá)到抑制作用，而且不管其劑量大小或細(xì)菌所在部位。四、 常規(guī)藥敏試驗的藥物選擇1、 常規(guī)藥敏試驗一般只選擇每一類抗生素中一種代表性藥物，然后用代表性藥物所獲得的結(jié)果來推斷整類藥物的價值。(但并非絕對，有時也出現(xiàn)相反的結(jié)果)2、 頭抱族抗生素可分四代，其第一代、第二代、第三代和第四代各有不同的抗菌譜，故每一亞類選其代表做常規(guī)測定。3、 臨床微生物實驗室，根據(jù)臨床需要、細(xì)菌特性、臨床藥物學(xué)等多方面選擇藥物，進行藥敏試驗。五、 藥敏試驗方法(Kirby-Bauer法)：1、試驗材料：培養(yǎng)基：Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton瓊脂，該培養(yǎng)基具有對大多數(shù)細(xì)菌生長良好、不拮抗藥物活性以及商品批間差小等優(yōu)點。配制方法見培養(yǎng)基配制。藥物紙片：直徑為6.00?6.35mm，每片吸水量約20〃1。質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC25923，大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853。測定M—H瓊脂是否適合做磺胺類試驗須用糞鏈球菌ATCC29212或33186，上述菌株可向衛(wèi)生部或省臨床檢驗中心購買。質(zhì)控菌株保存方法：將新得到的凍干菌株接種含血的M—H平板復(fù)活，然后每株細(xì)菌接種10支高層瓊脂，放冰箱保存，每月取1支，傳種細(xì)菌供常規(guī)使用，待用至最后1支再傳代在M—H平板上接種一批高層瓊脂備用。菌液比濁管：為保證藥敏試驗的準(zhǔn)確度和精密度，必須對接種菌液的濃度做相應(yīng)控制，采用比濁法來控制菌懸液濃度，接種濃度1.5X108ml，濁度相當(dāng)于麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)管第一號的1/2，比濁管配制方法如下：0.048mol/LBaCl20.5ml和0.18mol/LH2SO499.5ml，將兩液混合，置螺口試管中或普通試管玻璃紙加塞后，再用石蠟封住，放室溫保存。用前混勻。有效期6個月。(相當(dāng)于1/2號比濁管)2、操作方法：制備接種菌液：挑臨床標(biāo)本中分純的菌落4?5個于M—H液體培養(yǎng)基中，置35°C水浴箱孵育4小時，校正濁度?；蛴媒臃N環(huán)挑取菌落懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，以有黑字的白紙為背景，調(diào)整濁度與比濁管相同。接種平板：用無菌的棉試子蘸取菌液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓去掉多余的菌液，用棉拭子涂布整個培養(yǎng)基表面，反復(fù)三次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿平板邊緣繞兩圈。貼紙片：須待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片，用鑷子取紙片一張，貼在瓊脂平板表面，用鑷子尖壓一下，使其貼平，紙片一貼就不可再拿起，每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平板邊緣不少于15mm，直徑為90mm的平板，貼紙片7張，貼好紙片后，須在15min內(nèi)放培養(yǎng)箱，不可放CO2環(huán)境中。孵育：采用35°C，平板在孵箱內(nèi)單獨擺放，孵育18?24hr后，讀取結(jié)果。判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，測量抑菌環(huán)直徑，抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限，有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)會出現(xiàn)輕微生長，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣，抑菌環(huán)直徑判斷細(xì)菌的敏感性應(yīng)依據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》提供的解釋標(biāo)準(zhǔn)。3、應(yīng)遵守的準(zhǔn)則：備用紙片應(yīng)儲存在-20C冰箱保存。無低溫冰箱時，放冰隔內(nèi)保存。工作用紙片儲存冰箱中，不超過一