LS-T 6148-2023 糧油檢測(cè) 糧食中鉛的測(cè)定 時(shí)間分辨熒光免疫層析快速定量法

0ICS67.600CCSB20中華人民共和國(guó)糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)LS/T

6148—2023糧油檢測(cè) 糧食中鉛的測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫層析快速定量法i l t e s- i l t e s- tTimeresolvedfcmehod-

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-國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局 發(fā)

布LS/T6148—2023前 言本文件按照

GB/T1.標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局提出。S本文件由全國(guó)糧油標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(AC/TC270)歸口。S本文件起草單位:江南大學(xué)、深圳市易瑞生物技術(shù)股份有限公司、深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司、東莞市森邁德生物科技有限公司、南京微測(cè)生物科技有限公司、江蘇省糧油質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心。本文件主要起草人:胥傳來(lái)、匡華、郭玲玲、劉麗強(qiáng)、雷咸祿、徐麗廣、付輝、馬濤、周巧妮、蔣永青、黃斌、張金超、劉海森、楊志華、肖理文、趙皖、張祎、賈繼榮。LS/T6148—2023糧油檢測(cè) 糧食中鉛的測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫層析快速定量法1

范圍本文件規(guī)定了時(shí)間分辨熒光免疫層析快速定量法測(cè)定糧食中鉛含量的試劑及材料、儀器及設(shè)備、樣品制備、樣品測(cè)定、結(jié)果表述和重復(fù)性。本文件適用于稻谷、糙米、大米、小麥、玉米等糧食中鉛的快速定量檢測(cè)。本文件的方法檢出限為0.5mg/kg,定量限為0.9mg/kg。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T5491

糧食、油料檢驗(yàn) 扦樣、分樣法GB/T5494

糧油檢驗(yàn) 糧食、油料的雜質(zhì)、不完善粒檢驗(yàn)GB/T6682

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3

術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4

原理試樣提取液中的鉛與含銪-時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記的特異性抗體發(fā)生結(jié)合后,抑制了層析過(guò)程中抗體與檢測(cè)線上鉛-載體蛋白偶聯(lián)物的免疫反應(yīng),使檢測(cè)線上熒光強(qiáng)度降低,通過(guò)熒光分析儀內(nèi)置曲線自動(dòng)計(jì)算出試樣中鉛的含量。5

試劑及材料除另有說(shuō)明外,所用試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合

GB/T6682中三級(jí)水的要求。15. 試劑1115.. 硝酸(HNO3)。1112 2135.. 磷酸氫二鈉(NaHPO12 2135.. 氫氧化鈉(NaOH)。 2 C14 71516 C5.. 乙二胺四乙酸二鈉(C10H14N2NaO8, 2 C14 71516 C5..

4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,CAS號(hào):365-45-9),純度大于98%。5..

曲拉通X-100(34H62O11)。1LS/T6148—202325. 溶液配制2215.. 樣品提取溶液21(1.量取24mL硝酸

5.1),緩慢加入424mL水中,混勻,室溫密封條件下,有效期6個(gè)月(1.配套提供,或根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書配制。225.. 中和液226 (1.

8. (1.稱取72.g磷酸氫二鈉

5.2)、0g氫氧化鈉

5.3),用水溶解定容至500mL,室6 (1.

8. (1.效期6個(gè)月。由檢測(cè)卡配套提供,或根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書配制。235.. 樣品稀釋液234 (1.

9. ( 5

2(1.稱取3.0g乙二胺四乙酸二鈉

5.4)、50g4-羥乙基哌嗪乙磺4 (1.

9. ( 5

2(1.5.6),用水定容至500mL,室溫條件下,有效期6個(gè)月。由檢測(cè)卡配套提供,或根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書配制。245.. 鉛時(shí)間分辨熒光免疫層析卡(以下簡(jiǎn)稱“檢測(cè)卡”)24性能應(yīng)滿足附錄

A

的要求,不同品牌不同批次的檢測(cè)卡使用前應(yīng)按照附錄

A

進(jìn)行檢測(cè)卡性能測(cè)定。6

儀器及設(shè)備126. 天平:感量0.1g。126.實(shí)驗(yàn)礱谷機(jī)。3 446. 粉碎機(jī):電機(jī)轉(zhuǎn)速3 446. 檢驗(yàn)篩:0目。 :5 5566. 離心管

1. :5 5566. 渦旋振蕩器。7 386. 離心機(jī):轉(zhuǎn)速7 386. 孵育器:7℃±3℃。9 216. 時(shí)間分辨熒光分析儀:激發(fā)波長(zhǎng)為365nm±5nm,發(fā)射波長(zhǎng)為9 216.0

移液槍:00μL、1000μL。7

樣品制備17. 樣品制備1117.. 按照

GB/T5491進(jìn)行扦樣、分樣,在采樣過(guò)程中,應(yīng)防止樣品污染。其中,稻谷樣品用實(shí)驗(yàn)礱谷11(2) (6.12機(jī)

6.

脫殼后,按照

(2) (6.127.. 隨機(jī)取樣500g,粉碎后使其全部過(guò)檢驗(yàn)篩 4),充分混勻后,放入聚乙烯瓶或袋中。27. 樣品儲(chǔ)存2將試樣按照測(cè)試和備用分別存放。于-18℃及以下條件保存。2LS/T6148—20238

分析步驟18. 試樣處理10 ( 0(2. ( ( ((2. 5準(zhǔn)確稱取5.g(精確至0.1g)樣品于50mL離心管

6.5)中,加入25.0 ( 0(2. ( ( ((2. 55.1),用渦旋振蕩器

6.6)振蕩5min,離心機(jī)

6.7)5000r/min離心3min。用移液槍

6.10)取200μL上清液,加入與已加入300μL中和液

5.2)的1.mL離心管中,渦旋混合后,靜置3min,再加(2.入200μL的樣品稀釋液

5.3)渦旋混勻,(2.注:不同廠家檢測(cè)卡所用的樣品制備方法可能不同,按照產(chǎn)品使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行操作。2218. 樣品測(cè)定2218.. 孵育(3) (6.

3拆開產(chǎn)品包裝,將檢測(cè)卡

5.

放入孵育器 8),(3) (6.

3228.. 檢測(cè)22(8.(8) ( (1時(shí)間分辨熒光分析儀讀取相應(yīng)磁卡曲線后進(jìn)入測(cè)試界面,(8.(8) ( (1測(cè)卡加樣孔中,孵育器

6.37℃下孵育6min后,立即將檢測(cè)卡

5.3)放入時(shí)間分辨熒光分析儀

6.9)中進(jìn)行檢測(cè)(

min內(nèi)讀取數(shù)據(jù)有效)。注:不同廠家時(shí)間分辨熒光分析儀所用儀器界面設(shè)置可能不同,按照儀器使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行。9

結(jié)果分析1Tsi 9239. 1Tsi 923述步驟,進(jìn)行測(cè)定。以鉛含量值的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)、檢測(cè)線T

信號(hào)值與質(zhì)控線C

信號(hào)值的比值(/C)為縱坐標(biāo),采用四參數(shù)logitc擬合算法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,擬合程度R2

值應(yīng)在0.9以上。9. 試樣中鉛含量由時(shí)間分辨熒光分析儀自動(dòng)計(jì)算并顯示,單位為毫克每千克(mg/kg)。9. 檢測(cè)結(jié)果在臨界值時(shí),進(jìn)行復(fù)驗(yàn)確認(rèn),復(fù)驗(yàn)方法應(yīng)按照相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。10

重復(fù)性在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的20%。3LS/T6148—2023附 錄

A(規(guī)范性)鉛時(shí)間分辨熒光免疫層析卡性能評(píng)價(jià)要求1A. 概述1本文件規(guī)定了時(shí)間分辨熒光免疫層析卡的技術(shù)性能要求,用于對(duì)時(shí)間分辨熒光免疫層析法檢測(cè)類產(chǎn)品的技術(shù)性能進(jìn)行驗(yàn)證,以確認(rèn)其適用于本方法。2A. 準(zhǔn)確度23采用高、中、低3個(gè)濃度水平的自然污染有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法定值的自然污染樣3品,每個(gè)濃度水平測(cè)試不少于6次,取平均值。計(jì)算檢測(cè)卡檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際樣品定值的偏差,

個(gè)濃度水平的偏差均應(yīng)控制在-20%~+20%之間。3A. 重復(fù)性32采用0.mg/kg左右污染水平的自然污染有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法定值的自然污染樣2品

,測(cè)定不少于6次,計(jì)算檢測(cè)卡批內(nèi)變異系數(shù),變異系數(shù)應(yīng)小于或等于15%。4A. 檢出限4計(jì)算20份陰性樣品測(cè)定均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差,其結(jié)果應(yīng)小于或等于產(chǎn)品靈敏度標(biāo)示值。5A. 批間穩(wěn)定性52采用0.mg/kg左右污染水平的自然污染有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法定值的自然污染樣2品,不應(yīng)少于6個(gè)批次,每個(gè)批次測(cè)定不少于2次,