抗菌日用塑料制品

抗菌日用塑料制品本文件規(guī)定了抗菌日用塑料制品的術(shù)語(yǔ)和定義、要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸和貯存。本文件適用于具有抗菌功能的日用塑料制品，其他日用品也可參照?qǐng)?zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB4789.2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定GB4806.7食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸用塑料材料及制品GB9685食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸材料及制品用添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB15193.1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序GB/T31402塑料塑料表面抗菌性能試驗(yàn)方法衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1抗菌日用塑料制品antibacterialdailyplasticproducts以各類塑料樹(shù)脂為基本材料，通過(guò)不同的生產(chǎn)工藝加工而成的具有抗菌功能的各種日用塑料制品以及以塑料為抗菌部位與其他材料結(jié)合構(gòu)成的各種制品。2示例：包括各種膜、袋、手套、臺(tái)布、罐、收納籃、箱、柜、瓶、盒、3.2抗菌antimicrobial采用物理、化學(xué)等方法殺滅細(xì)菌、真菌等微生物和/或妨礙細(xì)菌、真菌等微生物生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程。3.3抗細(xì)菌antibacterial采用物理、化學(xué)等方法殺滅細(xì)菌和/或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程。3.4抗菌率antibacterial/antimicrobialrate抗菌試驗(yàn)中用百分率來(lái)表示對(duì)照組與試驗(yàn)組的細(xì)菌或真菌數(shù)量的差異。3.5抗菌活性值antibacterial/antimicrobialactivity抗菌試驗(yàn)中對(duì)照組與試驗(yàn)組的細(xì)菌或真菌活菌數(shù)量對(duì)數(shù)值的差值。4要求4.1基本要求4.1.1抗菌日用塑料制品應(yīng)符合相應(yīng)國(guó)家法律法規(guī)的規(guī)定。4.2抗菌性能要求抗菌日用塑料制品的抗菌性能對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌應(yīng)同時(shí)符合表1的要求。表1抗菌性能要求4.3衛(wèi)生安全性要求4.3.1抗菌日用塑料制品衛(wèi)生安全性要求3抗菌日用塑料制品中使用的抗菌劑應(yīng)符合衛(wèi)生安全性要求，其廠家應(yīng)提供相關(guān)資質(zhì)證明或材料衛(wèi)生安全性報(bào)告。使用中與人密切接觸的抗菌日用塑料制品應(yīng)符合表2的要求。表2抗菌日用塑料制品衛(wèi)生安全性要求5試驗(yàn)方法5.1塑料，無(wú)孔日用材料等硬質(zhì)表面材料抗菌性能的試驗(yàn)方法按照附錄A規(guī)定的方法執(zhí)行。5.2塑料纖維、塑料織物、塑料微孔濾材等表面不規(guī)則的日用塑料制品材料的抗菌性能的試驗(yàn)方法按照附錄B規(guī)定的方法執(zhí)行。5.3抗菌物質(zhì)溶出性試驗(yàn)按照附錄C規(guī)定的方法執(zhí)行。5.4衛(wèi)生安全性檢測(cè)中除抗菌物質(zhì)溶出性試驗(yàn)外的其他試驗(yàn)按照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）或GB15193系列標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定執(zhí)行。6檢驗(yàn)規(guī)則6.1檢驗(yàn)分類檢驗(yàn)分為出廠檢驗(yàn)和型式檢驗(yàn)。6.2出廠檢驗(yàn)抗菌日用塑料制品經(jīng)檢驗(yàn)合格后方可出廠。出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目及抽樣規(guī)則按廠家各自產(chǎn)品情況進(jìn)行制定。6.3型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)正常生產(chǎn)時(shí)每年進(jìn)行一次，當(dāng)原料、配方或工藝變化較大時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)。需要將抗菌劑批次正式檢測(cè)報(bào)告納入型式檢驗(yàn)范疇，要求供應(yīng)商提供每個(gè)批次的出廠抗菌性能或抗菌有效成分檢測(cè)報(bào)告。6.4判定規(guī)則判定規(guī)則與復(fù)驗(yàn)4當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果符合本文件規(guī)定的技術(shù)要求，則判定該批次合格；當(dāng)這些檢驗(yàn)項(xiàng)目中任一項(xiàng)出現(xiàn)不符合時(shí)，應(yīng)重新取兩倍量的包裝單元中采樣進(jìn)行核驗(yàn)，核驗(yàn)結(jié)果有一項(xiàng)指標(biāo)不符合本文件的要求時(shí)，整批產(chǎn)品判為不合格。6.5使用中與人密切接觸的產(chǎn)品的性能應(yīng)同時(shí)滿足抗菌劑的衛(wèi)生安全性要求和抗菌日用塑料制品的抗菌性能要求。7標(biāo)志產(chǎn)品標(biāo)志應(yīng)符合以下規(guī)定，并至少包括如下內(nèi)容：a)抗菌活性成分；b)抗菌加工方式；c)抗菌加工的部位；d)執(zhí)行的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)；e)產(chǎn)品抗菌性能指標(biāo)。8包裝、運(yùn)輸、貯存8.1包裝產(chǎn)品包裝應(yīng)符合GB/T191標(biāo)準(zhǔn)要求。采用無(wú)內(nèi)襯編織袋或其他包裝形式。包裝袋的封口應(yīng)保證產(chǎn)品在貯存、運(yùn)輸時(shí)不被污染。包裝袋要防塵、防潮。8.2運(yùn)輸在運(yùn)輸和裝卸過(guò)程中不得使用鐵鉤等銳利工具和拋擲。運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持整潔，避免二次污染，避免劇烈振動(dòng)，防止產(chǎn)品損傷、防止日曬和雨淋。8.3貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存在干燥、整潔的倉(cāng)庫(kù)內(nèi)，嚴(yán)禁與腐蝕品、易燃品混合貯存。貯存時(shí)，應(yīng)遠(yuǎn)離火源、熱源與污染源，并防止陽(yáng)光直接照射。根據(jù)不同日用塑料制品約定不同的貯存期。示例：食品塑料周轉(zhuǎn)箱自生產(chǎn)日期起貯存期為二年；塑料5（規(guī)范性附錄）貼膜法A.1原則本方法通過(guò)定量接種細(xì)菌于待檢樣品上，用貼膜的方法使細(xì)菌均勻接觸樣品，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的培養(yǎng)后，測(cè)得樣品中的活菌數(shù)，并計(jì)算樣品的抗細(xì)菌率。本方法適用于抗菌日用塑料制品的抗細(xì)菌性能試驗(yàn)。A.2條件A.2.1測(cè)試中所用的細(xì)菌以下兩種菌種是試驗(yàn)所采用的。a）金黃色葡萄球菌b）大腸桿菌根據(jù)需要也可采用其它菌種。使用其它菌種時(shí)，必須在檢測(cè)報(bào)告中說(shuō)明采用菌種及采用理由。試驗(yàn)所用菌株如表A.1所示。如從有別于表A.1的機(jī)構(gòu)獲取菌株，則該機(jī)構(gòu)必須是國(guó)際菌種保藏中心（WFCC：WorldFederationofCultureCullection）的成員或日本菌種保藏協(xié)會(huì)（JSCC：JapanSoceityofCultureCollection）的成員，并且菌株必須和表A.1相同。準(zhǔn)備這些菌種時(shí)需要參照供應(yīng)商的使用說(shuō)明。表A.1試驗(yàn)所用的菌株A.2.2試劑、培養(yǎng)基及培養(yǎng)液所使用的水必須是電導(dǎo)率小于1us/cm的蒸餾水或去離子水。所有的試劑均需達(dá)到分析純或微生物試驗(yàn)的級(jí)別。A.2.2.1非離子表面活性劑聚山梨醇脂A.2.2.2生物材料以下是所需要的生物材料：―卵磷脂-酵母浸膏-牛肉膏6-蛋白胨-酪蛋白胨-大豆蛋白胨-胰蛋白胨A.2.2.3培養(yǎng)基A.2.2.3.1概要應(yīng)用下列專用培養(yǎng)基，如采用商用培養(yǎng)基必須參照培養(yǎng)基說(shuō)明。A.2.2.3.2細(xì)菌懸液用培養(yǎng)基―1/500營(yíng)養(yǎng)肉湯（1/500NB）將3.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水或去離子水中，放入錐瓶中混合并充分溶解后，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH為6.8－7.2，在高壓蒸汽滅菌器中滅菌，若配好后不立即使用，要在5℃—10℃下保存。不要使用配制完存放一個(gè)星期或以上的1/500營(yíng)養(yǎng)肉湯。A.2.2.3.3營(yíng)養(yǎng)瓊脂將5.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0g氯化鈉和15.0g瓊脂，加入1000ml蒸餾水或去離子水中，置入錐瓶、混合并放入沸水浴中攪拌使其充分溶解。用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH為7.0－7.2（25℃),高壓滅菌（參見(jiàn)A.2.4.2）。若配好后不立即使用，要在5℃—10℃下保存。不要使用配制完存放一個(gè)月或以上的培養(yǎng)基。A.2.2.3.4平板計(jì)數(shù)瓊脂將2.5g酵母浸膏、5.0g胰蛋白胨、10.0g葡萄糖和15g瓊脂加入到1000ml蒸餾水或去離子水中，置于錐瓶中混合并在沸水浴中攪拌使其充分溶解。然后用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH為7.0-7.2（25℃),進(jìn)行高壓滅菌(參見(jiàn)A.2.4.2）。若配好后不立即使用，要在5℃—10℃下保存。不要使用配制完存放一個(gè)月或以上的培養(yǎng)基。A.2.2.3.5斜面培養(yǎng)基將6-10ml加熱溶解后的營(yíng)養(yǎng)瓊脂注入加旋蓋的試管，高壓蒸汽滅菌。滅菌后的試管在潔凈間中置于15°傾角，讓培養(yǎng)基凝固。若配好后不立即使用，在5℃—10℃下保存。若沒(méi)有冷凝水出現(xiàn)，將其溶解，并凝固后使用。不要使用配制完存放一個(gè)月或以上的斜面培養(yǎng)基。A.2.2.3.6SCDLP肉湯將17.0g酪蛋白胨、3.0g大豆蛋白胨、5.0g氯化鈉和2.5g磷酸二氫鈉、2.5g葡萄糖和1.0g卵磷脂加入到1000ml蒸餾水或去離子水中，充分混合后加7.0g非離子表面活性劑，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH為6.8－7.2（25℃)。高壓蒸汽滅菌（參見(jiàn)A.2.4.2）。若配好后不立即使用，要在5℃—10℃下保存。不要使用配制完存放一個(gè)月或以上的SCDLP肉湯。A.2.2.3.7磷酸鹽緩沖溶液將34.0g磷酸二氫鉀放入容量瓶中，加入500ml蒸餾水或去離子水并將其充分溶解。用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH為6.8－7.2（25℃)。然后加入蒸餾水或去離子水將溶液定容到1000ml。用高壓濕熱法滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃—10℃下保存。不要使用配制完存放一個(gè)月或以上的磷酸鹽緩沖溶液。A.2.2.3.8磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液將8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水或去離子水中得到生理鹽水，用該生理鹽水將A.2.2.3.7得到的磷酸鹽緩沖溶液稀釋到800倍。用高壓濕熱法滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃—10℃下保存。不要使用配制完存放一個(gè)月或以上的磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液。A.2.3儀器在沒(méi)有特別說(shuō)明的情況下，使用下面的器具和材料。A.2.3.1干熱滅菌器：能維持160℃至180℃的溫度，溫度波動(dòng)不超過(guò)±2℃7A.2.3.2高壓蒸汽滅菌器：能在（121±2℃)保溫并在（103±5）kPa保壓A.2.3.3帶攪拌的加熱電爐或水浴鍋A.2.3.4pH計(jì)精度達(dá)到±0.2A.2.3.5天平精度達(dá)到±0.01gA.2.3.6微量移液管已滅菌A.2.3.7培養(yǎng)箱：在設(shè)定溫度下溫度精度達(dá)到±0.1℃A.2.3.8旋渦混合器A.2.3.9超聲波清洗器A.2.3.10直徑4mm的接種環(huán)，滅菌后使用A.2.3.11覆蓋膜：不影響微生物生長(zhǎng)并且不吸水的材料（用聚乙烯，聚丙烯或聚酯如聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯制成建議膜的厚度在0.05-0.10mm之間。注意：均質(zhì)袋切取的膜也可以使用。A.2.3.12帶螺蓋試管A.2.3.13培養(yǎng)皿：直徑90-100mm，滅菌后使用A.2.3.14紗布或脫脂棉A.2.3.151000mL容量瓶A.2.3.16制備培養(yǎng)基所需要的具塞三角瓶等A.2.4儀器滅菌和菌種的保藏方法A.2.4.1干熱滅菌滅菌溫度和時(shí)間如下：A.2.4.2高壓蒸汽滅菌溫度：121±2℃時(shí)間：不短于15min。A.2.4.3玻璃器皿準(zhǔn)備先用堿性或中性的清潔劑洗干凈，而后用蒸餾水或去離子水沖洗干凈。使用前用干熱滅菌器或高壓蒸汽滅菌器滅菌。A.2.4.4細(xì)菌的保藏方法在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，細(xì)菌保藏溫度在5℃—10℃。每個(gè)月接種一次，五次接種或接種間隔超過(guò)1個(gè)月的菌種不可以再使用，必須從相關(guān)機(jī)構(gòu)獲取新的菌種進(jìn)行試驗(yàn)。A.3試驗(yàn)操作A.3.1細(xì)菌前培養(yǎng)用消過(guò)毒的接種環(huán)從保藏細(xì)菌的培養(yǎng)基中取1環(huán)細(xì)菌接種到斜面培養(yǎng)基（A.2.2.3.5）上，35±1℃條件下培養(yǎng)16-24小時(shí)。從這一培養(yǎng)基上再取一接種環(huán)細(xì)菌到新的斜面培養(yǎng)基上，35±1℃條件下培養(yǎng)16-20小時(shí)。A.3.2測(cè)試樣片的準(zhǔn)備8每種經(jīng)過(guò)抗菌處理的材料至少準(zhǔn)備3個(gè)樣片，而沒(méi)處理過(guò)的材料至少需要六個(gè)樣片。未經(jīng)處理的樣片一半是在接種后直接測(cè)量活細(xì)胞數(shù)，一半是在接種24h后進(jìn)行測(cè)量。提示：使用三個(gè)以上未經(jīng)處理實(shí)驗(yàn)材料的樣本有助于減少變異，尤其對(duì)于那些抗微生物效果較差的材料更為必要。對(duì)單一塑料進(jìn)行一系列不同抗菌方式的抗菌處理時(shí)，若各個(gè)樣品的抗菌檢測(cè)在同時(shí)并采用同樣的接種方法進(jìn)行，只需一套未處理樣品即可。準(zhǔn)備抗菌處理和未作抗菌處理的材料樣片，尺寸為（50±2）mm×（50±2）mm,試樣厚度不大于10mm。如制品不能切成這樣大小的樣片，只要能得到可覆蓋400-1600mm2的薄膜的要求即可。優(yōu)先考慮在制品上切得滿足要求的式樣塊，但是，制品不能得到滿足要求的樣片，則利用相同的原料和工藝單獨(dú)制備樣片。如樣片尺寸不同于50mm×50mm，則在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中說(shuō)明其實(shí)際尺寸。制樣時(shí)，注意避免被微生物或外來(lái)有機(jī)物污染。同樣，樣片之間不允許接觸。如用金屬裝置來(lái)避免交叉污染，必須確定金屬物沒(méi)有任何抗菌作用。必要時(shí)，測(cè)試前，用70%酒精對(duì)樣片清洗、消毒、滅菌。由于樣片清洗會(huì)導(dǎo)致軟化、樣片表面涂層溶解及組分溶出等，所以應(yīng)該避免清洗。因嚴(yán)重污染需要清洗時(shí)，在試驗(yàn)報(bào)告中對(duì)清洗方法做出說(shuō)明。A.3.3接種菌液的制備用消毒過(guò)的接種環(huán)，取一環(huán)A.3.1中預(yù)前培養(yǎng)的細(xì)菌接種到少量根據(jù)（A.2.2.3.2）配制的1/500NB培養(yǎng)液。確保細(xì)菌分散均勻，并采用顯微鏡觀察及數(shù)菌器具或利用其它合適的方法（如分光光度測(cè)定法）估計(jì)細(xì)菌數(shù)目。用1/500的營(yíng)養(yǎng)肉湯對(duì)此細(xì)菌懸液稀釋到可以評(píng)估細(xì)菌數(shù)量的濃度，其范圍為（2.5-10）×105cells/ml，最佳值為6×105個(gè)/ml。用此作為接種菌液。若菌液不立即使用，將其冷凍至0℃,在2小時(shí)內(nèi)使用。A.3.4樣片的接種待測(cè)表面是制品外表面，制品的橫截面是不需要測(cè)試的。將A.3.2中制備的每個(gè)樣片，分別放入消過(guò)毒的培養(yǎng)皿中，檢測(cè)面朝上。用移液管量取A.3.3中的菌液0.4ml，滴到每個(gè)樣片表面。并將A.2.3.11所制備的40mm×40mm薄膜蓋于菌液上，并向下輕輕壓薄膜使菌液分散到薄膜各個(gè)邊緣，但確保不要使菌液從薄膜邊溢出。試樣接種完并蓋上覆蓋膜后，蓋上培養(yǎng)皿的上蓋。除特別說(shuō)明外，50mm×50mm樣片對(duì)應(yīng)薄膜的標(biāo)準(zhǔn)尺寸為（40±2）mm×（40±2）mm。若樣片為非標(biāo)準(zhǔn)尺寸，則根據(jù)樣品大小調(diào)整薄膜尺寸。但薄膜尺寸不應(yīng)小于400mm2，并且薄膜邊緣距樣片邊緣2.2mm-5mm。如薄膜不是40mm×40mm的尺寸，則在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中說(shuō)明其實(shí)際尺寸。所用的接種菌液體積也相應(yīng)調(diào)整并在報(bào)告中加以記錄。至關(guān)重要的是菌液不能從薄膜邊溢出。有些表面（比如親水性強(qiáng)的表面）很難抑制這種溢出?？刹捎萌缦碌倪x項(xiàng)1來(lái)抑制溢出、如選項(xiàng)1不能奏效，則選用選項(xiàng)2。如有一選項(xiàng)能抑制溢出的發(fā)生，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中說(shuō)明。-選項(xiàng)1：減少菌液體積以適用于測(cè)試表面，但菌液體積不應(yīng)小于0.1ml。菌液體積減小，但需增加菌液細(xì)菌濃度，以保證通常測(cè)試時(shí)所需要的細(xì)菌數(shù)水平。-選項(xiàng)2：通過(guò)增加惰性增稠劑以增加菌液的粘度，比如瓊脂或其他材料。A.3.5接種后樣片的培養(yǎng)除特殊說(shuō)明外，含有接種后樣片（包括一半為未經(jīng)抗菌處理制品的接種樣片）的培養(yǎng)皿，在（35±1）℃相對(duì)濕度不小于90%的條件下培養(yǎng)24小時(shí)。根據(jù)在培養(yǎng)溫度下的檢測(cè)所得到的細(xì)菌活性值來(lái)確定制品的抗菌效果。在各方面同意的條件下，也要采用其他培養(yǎng)溫度。如使用的不是（35±1）℃,在試驗(yàn)結(jié)果要有記錄。提示：若培養(yǎng)溫度低于35℃,活菌總數(shù)將會(huì)減少。這就使所測(cè)得的細(xì)菌活性和35℃下所測(cè)得的抗菌效果不同。A.3.6試驗(yàn)樣片上細(xì)菌的收集A.3.6.1直接接種后的樣片上細(xì)菌的收集9接種后，立即對(duì)已接種的一半的未抗菌處理樣片進(jìn)行處理，在各培養(yǎng)皿中加入10mlSCDLP肉湯（A.2.2.3.6）或其他適宜而有效的中和劑。以此種方法得到樣品上細(xì)菌的回收率。重要的是，必須對(duì)樣片充分沖洗，沖洗的方法是用移液管吸取和釋放，對(duì)樣品充分沖洗，沖洗次數(shù)需達(dá)到四次以上。須特別注意的是，需要得到足夠的細(xì)菌液回收量。如試驗(yàn)中采用了A.3.4中的選項(xiàng)2，導(dǎo)致菌液的粘度增大，尤其要注意這種情況。在這些情況下就必須采用一些機(jī)械手段，如旋轉(zhuǎn)和超聲波振動(dòng)等。若采用上述方法后回收率能和上述的沖洗方法持平或有所提高，則可加以采用。若變更回收方法，則需要在報(bào)告中加以說(shuō)明。由于樣片的尺寸和性質(zhì)的關(guān)系，采用10ml中和劑回收細(xì)菌有困難，則可增加中和劑溶液的用量。若中和劑的體積不等于10ml，則在報(bào)告中要真實(shí)記錄，并在計(jì)算抗菌效果時(shí)加以考慮。其他沖洗方法將影響所測(cè)得的抗菌活性結(jié)果，因此必須充分證實(shí)其有效性才可使用。A.3.6.2培養(yǎng)后的樣片上細(xì)菌的收集根據(jù)A.3.5的程序培養(yǎng)后，按照A.3.6.1處理培養(yǎng)后的樣片，然后立即根據(jù)A.3.7進(jìn)行樣片上活菌數(shù)的測(cè)定。A.3.7傾注平板培養(yǎng)法確定活菌數(shù)用磷酸鹽生理鹽水緩沖液（A.2.2.3.8）對(duì)SCDLP回收液通過(guò)10倍梯度稀釋過(guò)程，以計(jì)算活菌。將樣片上的回收液及其10倍稀釋液各取1ml，分別放入消過(guò)毒的培養(yǎng)皿中。每個(gè)培養(yǎng)皿中注入15ml平板計(jì)數(shù)瓊脂，輕輕攪拌以分散細(xì)菌，所有平板均必須制重復(fù)試樣。對(duì)各皿進(jìn)行同樣操作后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，并在（35±1）℃下培養(yǎng)40h到48h。培養(yǎng)后，對(duì)菌落數(shù)為30-300的培養(yǎng)皿進(jìn)行菌落記數(shù)。對(duì)于任一稀釋級(jí)倍數(shù)，記下菌落數(shù)并保留兩位有效數(shù)字，記錄稀釋倍數(shù)。若1ml洗脫液中細(xì)菌數(shù)小于30，則對(duì)該培養(yǎng)皿直接計(jì)數(shù)。如任何培養(yǎng)皿均沒(méi)有菌落，則記錄為＜1。A.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果A.4.1計(jì)算活菌數(shù)對(duì)于每個(gè)樣片，都按照式（A.1）來(lái)計(jì)算活菌數(shù)：其中，N：每個(gè)樣片每平方厘米的活菌數(shù)；E：菌落數(shù)；G：稀釋倍數(shù)；V：用于洗脫的SCDLP培養(yǎng)液的體積（mlA：覆蓋膜的表面積(mm2)。記錄活菌數(shù)時(shí)取二位有效數(shù)字，若某一稀釋倍數(shù)的任一瓊脂板上都沒(méi)有菌落，則將活菌數(shù)記做V（用于洗脫的SCDLP培養(yǎng)液的體積ml）。計(jì)算平均數(shù)時(shí)，如各樣均沒(méi)有活菌數(shù)，則記錄為V。例如：V＝10ml時(shí)，計(jì)算所得平均活菌數(shù)為10。A.4.2試驗(yàn)成立條件A.4.2.1當(dāng)A.4.2.2，A.4.2.3，A.4.2.4三個(gè)條件分別都得到滿足時(shí)，試驗(yàn)才被認(rèn)為有效。反之，則試驗(yàn)無(wú)效，須重新進(jìn)行試驗(yàn)。A.4.2.2未進(jìn)行抗菌處理的樣片接種后直接測(cè)得的活菌數(shù)對(duì)數(shù)值應(yīng)該滿足下面要求：其中，L最大：活菌數(shù)的最大對(duì)數(shù)值；L最?。夯罹鷶?shù)的最小對(duì)數(shù)值；L平均：全部樣片活菌數(shù)對(duì)數(shù)的平均值。A.4.2.3未處理的樣片接種后直接測(cè)得的活菌平均值應(yīng)在6.2×103個(gè)/cm2至2.5×104個(gè)/cm2范圍內(nèi)。A.4.2.4每個(gè)未處理樣片在接種24h后殘留的活菌數(shù)不小于6.2×101個(gè)/cm2。A.4.3計(jì)算抗菌活性值在檢測(cè)被認(rèn)為有效的情況下，可通過(guò)式（A.3）來(lái)計(jì)算抗菌活性，結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)一位。HUt－U0At－U0Ut－At）???????????????????????（A.3）其中，H：抗菌性；U0：未處理樣片接種后直接測(cè)得的活菌數(shù)對(duì)數(shù)的平均值；t：未處理樣片接種后培養(yǎng)24h后殘留活菌數(shù)對(duì)數(shù)的平均值；At：抗菌樣片接種24h后殘留活菌數(shù)對(duì)數(shù)的平均值。A.4.4計(jì)算抗菌率抗菌率計(jì)算公式為：P：抗菌率（%）Mt：試驗(yàn)菌種接種培養(yǎng)24小時(shí)后的3個(gè)對(duì)照樣上的細(xì)菌數(shù)的平均值；t：試驗(yàn)菌種接種培養(yǎng)24小時(shí)后的3個(gè)測(cè)試樣上的細(xì)菌數(shù)的平均值。（規(guī)范性附錄）振蕩法B.1原理將試樣與對(duì)照樣分別裝入一定濃度的試驗(yàn)菌液的三角燒瓶中，在規(guī)定的溫度下振蕩一定時(shí)間，測(cè)定三角燒瓶?jī)?nèi)菌液在振蕩前及振蕩一定時(shí)間后的活菌濃度，計(jì)算抑菌率，以此評(píng)價(jià)試樣的抗菌效果。B.2試驗(yàn)條件B.2.1試驗(yàn)器具分光光度計(jì)：檢測(cè)波長(zhǎng)475nm或660nm適合于測(cè)試試驗(yàn)菌液的濃度。恒溫培養(yǎng)箱：溫控精度為±1℃。水浴鍋：溫度能保持在46℃±2℃。恒溫振蕩器（搖床）：溫度精度為±1℃。冰箱：溫度能保持在5℃~10℃。玻璃門(mén)冷藏箱：溫度能保持在5℃~10℃。高壓滅菌鍋：溫度能保持在121℃,壓力能保持在103kPa。帶塞三角燒瓶：容量為250mL。培養(yǎng)皿：直徑90mm。旋渦式振動(dòng)器。二級(jí)生物安全柜。試管、吸管、燒瓶等實(shí)驗(yàn)室常用器具。B.2.2培養(yǎng)基和試劑試驗(yàn)所用試劑應(yīng)是分析純的或適合于微生物試驗(yàn)用的。試驗(yàn)用水應(yīng)是純水，如蒸餾水。注：建議使用現(xiàn)有商業(yè)化的脫水原料制備培養(yǎng)基，并嚴(yán)格按照相關(guān)產(chǎn)品B.2.2.1營(yíng)養(yǎng)肉湯牛肉膏3g蛋白胨5g蒸餾水（最終定容至）1000mL滅菌后，pH值為6.8±0.2。B.2.2.2營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨5g瓊脂粉15g蒸餾水（最終定容至）1000mL滅菌后，pH值為6.8±0.2。B.2.2.30.03mol/LPBS（磷酸鹽）緩沖液磷酸氫二鈉2.84g磷酸二氫鉀1.36g蒸餾水（最終定容至）1000mL滅菌后，pH值為7.2~7.4，5℃~10℃保存?zhèn)溆谩.2.3試驗(yàn)菌種B.2.3.1菌種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌：金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus（ATCC6538P）；革蘭氏陰性細(xì)菌：大腸桿菌Escherichiacoli（ATCC8739或ATCC29522）。注1：可使用加入世界菌種保藏聯(lián)合會(huì)（WFCC）的菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的、注2：如果需要，可采用其他的試驗(yàn)菌種，培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和B.2.3.2菌種轉(zhuǎn)種及保存凍干菌激活后接種斜面試管培養(yǎng)，然后貯存于冰箱（5℃~10℃),作為保存菌。每一個(gè)月應(yīng)轉(zhuǎn)種一次，轉(zhuǎn)種后放于冰箱（5℃~10℃)保存，轉(zhuǎn)種次數(shù)不應(yīng)超過(guò)10代。若轉(zhuǎn)種后保存時(shí)間超過(guò)一個(gè)月，不能用于下一次轉(zhuǎn)種。B.2.3.3標(biāo)識(shí)對(duì)每個(gè)菌種應(yīng)標(biāo)注如下信息：a）供應(yīng)凍干菌的菌種保藏機(jī)構(gòu)名稱；b）凍干菌的名稱和編號(hào)；c）凍干菌的批號(hào)；d）凍干菌激活日期；e）保存菌的貯藏日期；f）保存菌的實(shí)驗(yàn)室編號(hào)。B.3試驗(yàn)菌液的準(zhǔn)備B.3.1細(xì)菌菌液的培養(yǎng)和準(zhǔn)備B.3.1.1兩步預(yù)培養(yǎng)程序制備細(xì)菌接種菌懸液從3代～10代的細(xì)菌保存菌種（B.2.3.2）試管斜面中取一接種環(huán)細(xì)菌，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（B.2.2.2）上劃線。于37℃±1℃,培養(yǎng)18h～24h。用接種環(huán)從平板中挑出一個(gè)典型菌落，接種于20mL營(yíng)養(yǎng)肉湯（B.2.2.1）中。37℃±1℃,130r/min，振蕩培養(yǎng)18h～20h，即制成了接種菌懸液。菌液含量采用分光光度計(jì)法或稀釋法測(cè)定，活菌數(shù)應(yīng)達(dá)到1根109CFU/mL～5根109CFU/mL。此新鮮菌液應(yīng)在4h內(nèi)盡快使用，以保證接種菌的活性。B.3.1.2細(xì)菌接種菌液的準(zhǔn)備用吸管從細(xì)菌懸液（B.3.1.1）中吸取2mL～3mL（參考數(shù)值。由此步驟調(diào)整接種活菌數(shù)目，大腸桿菌取下限，金黃色葡萄球菌取上限移入裝有9mL營(yíng)養(yǎng)肉湯（B.2.2.1）的試管中，充分混勻。吸取1mL移入另一支裝有9mL營(yíng)養(yǎng)肉湯（B.2.2.1）的試管中，充分混勻。吸取1mL移入裝有9mL0.03mol/LPBS緩沖液（B.2.2.3）的試管中，充分混勻。吸取5mL移入裝有45mL0.03mol/LPBS緩沖液（B.2.2.3）的三角燒瓶中。充分混勻，稀釋至含活菌數(shù)目3根105CFU/mL～4根105CFU/mL（由此固定的4次稀釋程序，此接種菌液中含有微量的營(yíng)養(yǎng)肉湯用來(lái)對(duì)試樣接種。此接種菌液應(yīng)在4h內(nèi)盡快使用，以保持接種菌的活性。B.4試樣的準(zhǔn)備B.4.1試樣將抗菌試樣及對(duì)照樣（未經(jīng)抗菌處理的同材質(zhì)試樣）分別剪成約10mm×10mm大小的碎片，稱取1.0g±0.05g作為一份試樣，用小紙片包好。根據(jù)試驗(yàn)需要稱取多份試樣，每份試樣均用小紙片包好。注：當(dāng)未經(jīng)抗菌處理的同材質(zhì)試樣不可獲得時(shí)，采用不加試樣B.4.2試樣滅菌將裝有試樣的小紙包放入高壓滅菌鍋，于121℃、103KPa滅菌15min。備用。若試樣不宜采用高壓蒸汽滅菌，可采用其他方法滅菌，但所用的滅菌方法不應(yīng)影響抗菌性能和檢測(cè)結(jié)果；對(duì)同一個(gè)檢測(cè)樣本的試樣、對(duì)照樣應(yīng)采用同一種滅菌方法。B.5試驗(yàn)操作B.5.1試樣及試劑裝瓶準(zhǔn)備6個(gè)250mL三角燒瓶。在其中3個(gè)燒瓶中各加入對(duì)照樣1.0g±0.05g，3個(gè)燒瓶中各加入抗菌織物試樣1.0g±0.05g。然后在每個(gè)燒瓶中各加入70mL±0.1mL0.03mol/LPBS緩沖液（B.2.2.3）。B.5.2“0”接觸時(shí)間制樣用吸管往3個(gè)對(duì)照樣燒瓶中各加入5mL接種菌液（B.3.1.2）。蓋好瓶塞，放在恒溫振蕩器上，在24℃±1℃,以250r/min～300r/min，振蕩1min±5s，然后進(jìn)行下一步“0”接觸時(shí)間取樣。B.5.3“0”接觸時(shí)間取樣用吸管在“0”接觸時(shí)間制樣的3個(gè)對(duì)照樣燒瓶中各吸取1mL±0.1mL溶液，移入裝9mL±0.1mL0.03mol/LPBS緩沖液（B.2.2.3）的試管中，充分混勻。用10倍稀釋法再進(jìn)行1次稀釋，充分混勻。吸取1mL±0.1mL移入滅菌的平皿，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（B.2.2.2）。每個(gè)102稀釋倍數(shù)的試管分別吸液制作兩個(gè)平板作平行樣。室溫凝固，倒置平板，37℃±1℃培養(yǎng)24h~48h。記錄每個(gè)平板中的菌落數(shù)。菌的平均菌落數(shù)宜控制在200CFU～250CFU的范B.5.4定時(shí)振蕩接觸用吸管往3個(gè)抗菌織物試樣燒瓶中各加入5mL接種菌液（B.3.1.2），蓋好瓶塞。已完成“0”接觸時(shí)間取樣且蓋好瓶塞的另3個(gè)燒瓶不需再加接種液。再將此6個(gè)燒瓶置于恒溫振蕩器上，在24℃B.5.5稀釋培養(yǎng)及菌落數(shù)的測(cè)定到規(guī)定時(shí)間后，從每個(gè)燒瓶中吸取1mL±0.1mL試液，移入裝有9mL±0.1mL0.03mol/LPBS緩沖液（B.2.2.3）的試管中，充分混勻。用10倍稀釋法系列稀釋至合適稀釋倍數(shù)。用吸管從每個(gè)稀釋倍數(shù)的試管中分別吸取1mL±0.1mL移入滅菌的平皿，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（B.2.2.2）約15mL。每個(gè)稀釋倍數(shù)的試管分別吸液制作兩個(gè)平板作平行樣。室溫凝固，倒置平板，37℃±1℃培養(yǎng)24h~48h。選擇菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間的合適稀釋倍數(shù)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若最小稀釋倍數(shù)平板中的菌落數(shù)＜30，則按實(shí)際數(shù)量記錄；若無(wú)菌落生長(zhǎng)，則菌落數(shù)記為“＜1”。兩個(gè)平行平板的菌落數(shù)相差應(yīng)在15%以內(nèi)，否則此數(shù)據(jù)無(wú)效，應(yīng)重作試驗(yàn)。B.6結(jié)果的計(jì)算及評(píng)價(jià)B.6.1活菌濃度的計(jì)算根據(jù)兩個(gè)平板得到的菌落數(shù)，按式（B.1）計(jì)算每個(gè)試樣燒瓶?jī)?nèi)的活菌濃度（保留兩位有效數(shù)）。K＝Z×C..........................（B.1）式中：K——每個(gè)試樣燒瓶?jī)?nèi)的活菌濃度（CFU/mL）；Z——兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值；C——稀釋倍數(shù)。B.6.2試驗(yàn)有效性的判斷對(duì)照樣本不應(yīng)有明顯的抗菌作用。經(jīng)振蕩后對(duì)照組回收菌落數(shù)不應(yīng)低于“0”接觸時(shí)間回收菌落數(shù)的10%，否則試驗(yàn)無(wú)效B.6.3抑菌率的計(jì)算振蕩接觸18h后，比較對(duì)照樣與抗菌試樣燒瓶?jī)?nèi)的活菌濃度，按式（B.3）計(jì)算抑菌率（保留兩位有效數(shù)）。YWt-Qt）/Wt×100%.....................（B.3）式中：Y——試樣的抑菌率；Wt——3個(gè)對(duì)照樣（或空白對(duì)照）18h振蕩接觸后燒瓶?jī)?nèi)的活菌濃度的平均值（CFU/mLQt——3個(gè)抗菌試樣18h振蕩接觸后燒瓶?jī)?nèi)的活菌濃度的平均值（CFU/mL）。（規(guī)范性附錄）溶出性試驗(yàn)方法（抑菌環(huán)試驗(yàn)）C.1原理利用抗菌劑不斷析出經(jīng)瓊脂擴(kuò)散形成不同濃度梯度，顯示抑菌作用。試驗(yàn)通過(guò)抑菌環(huán)大小來(lái)判斷抗菌劑是否析出，是否符合本文件的溶出性要求。C.2試驗(yàn)條件C.2.1主要設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱（37±1）℃、冷藏箱5℃~10℃、二級(jí)生物安全柜、壓力蒸氣滅菌器、電熱干燥箱、游標(biāo)卡尺、滅菌試管、滅菌移液管、滅菌三角燒瓶、接種環(huán)、酒精燈。C.2.2材料制備C.2.2.1對(duì)照樣直徑15mm的圓形或邊長(zhǎng)為15mm的正方形無(wú)菌干燥濾紙。C.2.2.2試樣由抗菌部位裁制成直徑15mm的圓形或邊長(zhǎng)為15mm的正方形，厚度不超過(guò)4mm，適合檢測(cè)的待檢樣品。C.2.2.3滅菌試驗(yàn)前對(duì)試樣和對(duì)照樣進(jìn)行滅菌。如不適于用消毒劑處理的樣品，可直接用無(wú)菌水沖洗后晾干，紫外線照射1h。對(duì)試驗(yàn)