食用菌栽培技術(shù)

關(guān)于食用菌栽培技術(shù)教學(xué)目標(biāo)：掌握常規(guī)菌種篩選技術(shù)；掌握孢子分離技術(shù)；基本掌握誘變育種和細(xì)胞質(zhì)融合育種技術(shù)。教學(xué)重點(diǎn)：組織分離技術(shù)、孢子分離技術(shù)第2頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

食用菌的繁殖方式共有三種，即無性繁殖、有性繁殖和準(zhǔn)性繁殖。

第一節(jié)食用菌的繁殖方式

一、無性繁殖不通過有性生殖細(xì)胞的結(jié)合，而由親代直接產(chǎn)和新個(gè)體的生殖方式叫無性繁殖，食用菌的無性繁殖主要有以下幾種形式：1.可以菌絲斷裂的方式繁殖：2.以產(chǎn)和無性孢子的方式繁殖：如香菇產(chǎn)生節(jié)孢子，雙孢蘑菇產(chǎn)生次生孢子，草菇產(chǎn)生厚垣孢子，黑木耳產(chǎn)生鉤狀分生孢子等。3.以出芽方式繁殖：第3頁,共41頁，2024年2月25日，星期天二、有性繁殖通過有性生殖細(xì)胞的結(jié)合，產(chǎn)生新個(gè)體的繁殖方式，叫有性繁殖。第4頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

孢子核基因的不同就決定了其所萌發(fā)成的單核菌絲的不同性別。有性繁殖根據(jù)進(jìn)行質(zhì)配的單核菌絲的性別，又可以分為以下兩種形式。（一）同宗結(jié)合：1.初級同宗結(jié)合由單個(gè)孢子萌發(fā)而形成的菌絲全，無需親和性，很快發(fā)展成雙核菌比體，并通過鎖狀聯(lián)合增殖。每個(gè)細(xì)胞內(nèi)的兩個(gè)核沒有遺傳上的差別，均能形成子實(shí)體。第5頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

2.次級同宗結(jié)合減數(shù)分裂后4個(gè)子核，“雌雄”兩兩相配分別通過孢子梗（小梗）進(jìn)入孢子，形成2個(gè)含有異核的孢子。這種擔(dān)孢子一旦萌發(fā)，初期為多核，隨之產(chǎn)生隔膜，將每一個(gè)細(xì)胞分隔成只含有2個(gè)核的細(xì)胞。頂端細(xì)胞核又不斷再進(jìn)行分裂，到一定程度又再被橫隔成每一細(xì)胞內(nèi)只含有2個(gè)核的菌絲，周而復(fù)始。這種雙核菌絲具有結(jié)實(shí)性，稱之為次級同宗結(jié)合。第6頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

（二）異宗結(jié)合異宗結(jié)合是一種“雌雄不同株”自身不孕的有性生殖方式。在擔(dān)子菌亞門中，異宗結(jié)合占90%，主要有兩種形式。1.二極性異宗結(jié)合一部分食用菌的單核菌絲有“雌”、“雄”之分，通常用“＋”、“－”表示。唯有兩條性別不同的菌絲進(jìn)行交配產(chǎn)生的雙核菌絲，才具有結(jié)實(shí)性。第7頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

2.四極性異宗結(jié)合由同一子實(shí)體所產(chǎn)生的擔(dān)孢子萌發(fā)的菌絲間進(jìn)行交配時(shí)，唯有1/4的交配組合能產(chǎn)生可孕的雙核菌絲。第8頁,共41頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)食用菌的生活史食用菌的生活史，是指從孢子萌發(fā)，經(jīng)歷菌絲體、子實(shí)體階段，直到產(chǎn)生第二代即同一種孢子的全過程。一、傘菌的生活史1.擔(dān)孢子萌發(fā)2.單核菌絲（初生菌絲）開始發(fā)育。3.兩條可親和的單核菌絲進(jìn)行質(zhì)配。4.質(zhì)配形成異核的雙核菌絲。多數(shù)種類的雙核菌絲可見鎖狀聯(lián)合，第9頁,共41頁，2024年2月25日，星期天一、傘菌的生活史5.在適宜的環(huán)境條件下，雙核菌絲體組織化，開成各種食用菌所特有的子實(shí)體。6.來自兩個(gè)親本的一對交配型不同的單倍體核在擔(dān)子中融合，進(jìn)行核配，形成一個(gè)雙倍體核。7.雙倍體核進(jìn)行減數(shù)分裂，結(jié)果產(chǎn)生四個(gè)單倍體核，原擔(dān)子變成擔(dān)子。8.各個(gè)單倍體核分別移支擔(dān)子小梗的頂端，形成擔(dān)孢子。至此，一個(gè)完整的生活史結(jié)束了。

第10頁,共41頁，2024年2月25日，星期天二、有性生殖過程中細(xì)胞核的變化一是質(zhì)配后開始的異核雙核階段，即異核雙核期。具有產(chǎn)生子實(shí)體的能力。二是核配后開始的短暫的雙倍核期。三是核配馬上進(jìn)行減數(shù)分裂，每個(gè)細(xì)胞中都有4個(gè)單倍體核，稱為單核期，此期亦短暫。

第11頁,共41頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)選種技術(shù)一、選種的原理和方法1.原理食用菌的種性是通過菌絲體的繁衍逐代傳遞的，所以自然選擇就側(cè)重于在不同菌株之間進(jìn)行，而不是在同一菌株的后代中進(jìn)行。第12頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

食用菌自然選育的基本流程：收集品種資源生理性能測定品種比較試驗(yàn)擴(kuò)大、示范推廣第13頁,共41頁，2024年2月25日，星期天2.方法①品種資源的收集.盡可能的收集有足夠代表性的野生菌株。確定采種的目標(biāo)，采集點(diǎn)的地理?xiàng)l件，并做好詳細(xì)的采集記錄。第14頁,共41頁，2024年2月25日，星期天②生理性能測定標(biāo)本采集后應(yīng)盡快采用多種分離方法獲取菌株，隨后，立即用平板做拮抗試驗(yàn)（即分離的菌株菌絲兩兩配對接入同一平板培養(yǎng)基內(nèi)），適溫培養(yǎng)，經(jīng)十余日，不同菌株的菌落內(nèi)是否出現(xiàn)拮抗線，同時(shí)還可在平板或生長測定管上測定菌絲生長速度及對溫度的反應(yīng)。第15頁,共41頁，2024年2月25日，星期天③菌株比較比較各菌株的優(yōu)劣，詳細(xì)記錄各菌株的產(chǎn)量、菇形、溫性、干鮮比、始菇期、菇潮間隔、形態(tài)等。為了試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，要保證菌種的質(zhì)量，培養(yǎng)基配方，接種，管理措施等可能影響結(jié)果的因素，盡可能使之一致。試驗(yàn)還應(yīng)按生物統(tǒng)計(jì)原理進(jìn)行安排。第16頁,共41頁，2024年2月25日，星期天④擴(kuò)大試驗(yàn)上述的品種評比結(jié)果僅是個(gè)階段性的成果，還應(yīng)和當(dāng)?shù)氐漠?dāng)家菌株同時(shí)進(jìn)行栽培，證實(shí)它是更優(yōu)良的菌株。⑤示范推廣經(jīng)擴(kuò)大試驗(yàn)后，將選出的優(yōu)良品種放到有代表性的試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行示范性生產(chǎn)，待試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步確定之后，再由點(diǎn)到面推廣。第17頁,共41頁，2024年2月25日，星期天二、菌種分離什么是菌種的分離呢？將有價(jià)值的子實(shí)體的局部組織、孢子或基內(nèi)菌絲移接到斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱為菌種分離。第18頁,共41頁，2024年2月25日，星期天（一）種子資源的獲得種子資源的獲得有野外采集和栽培場所采集兩種途徑。野外標(biāo)本的采集，主要適用于食用菌的野生種馴化、遺傳育種、生理生態(tài)以及各種研究用的一級種的分離。而在食用菌栽培上的一級種的分離，其種菇的來源主要是從栽培場中經(jīng)留種獲得的。第19頁,共41頁，2024年2月25日，星期天①種菇（耳）的選擇分離對象應(yīng)從當(dāng)?shù)禺?dāng)家品種，或從外地引進(jìn)并經(jīng)大面積栽培后表現(xiàn)出高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的菌株中選擇。留種種菇要求菇形理想，長勢健壯，無蟲無病的子實(shí)體。第20頁,共41頁，2024年2月25日，星期天②成熟度的選擇組織分離一般選擇幼菇，即器官分化尚未結(jié)束時(shí)采摘。此時(shí)菇體正在生長。從最旺盛的“生長點(diǎn)”挑取組織，其菌絲萌發(fā)快，長勢好，而且操作時(shí)，組織塊纖維化程度低，容易挑取。第21頁,共41頁，2024年2月25日，星期天（二）菌種分離菌種分離可以分為孢子分離、組織分離和基內(nèi)菌絲分離三種。1.分離前的準(zhǔn)備①培養(yǎng)基的選擇通常使用PDA培養(yǎng)基。特殊分離培養(yǎng)時(shí)，常采用相應(yīng)的培養(yǎng)基。第22頁,共41頁，2024年2月25日，星期天②種菇的預(yù)處理種菇采摘后，若種菇水分太高，菇蓋沾粘，可適當(dāng)風(fēng)干后再進(jìn)行分離。膠質(zhì)耳只能用無菌水多次沖洗，無菌濾紙吸干，然后讓耳片子實(shí)層上重新產(chǎn)生成熟的孢子供分離，這樣可降低污染率。第23頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

2、組織分離①傘菌組織分離法組織分離時(shí)，用75%酒精棉球擦拭雙手及接種工具。點(diǎn)燃酒精燈，將尖頭鑷子燒灼滅菌；隨后將種菇縱向撕成兩半，于菌柄、菌肉交界處切取火柴頭大小的組織塊，迅速抖落到試管中，燒灼管口及棉塞，塞上棉塞。這些操作都是在酒精燈火焰無菌區(qū)域進(jìn)行的。第24頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

②膠質(zhì)菌類組織分離法一種方法是將耳片反復(fù)用無菌水沖洗，切成0.5cm小塊移入培養(yǎng)基，于28℃下進(jìn)行培養(yǎng)；另一種方法是剖取尚未展開耳片的耳基團(tuán)內(nèi)的組織塊進(jìn)行分離。第25頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

③菌核的組織分離法一些藥用菌如茯苓、豬苓、雷丸都有菌核。進(jìn)行組織分離時(shí)，采用含漿汁多的菌核。在無菌的條件之下，將菌核剖開，于菌核的附近，剖取蠶豆大小的菌核組織塊移入斜面培養(yǎng)基上，在26-30℃下培養(yǎng)。第26頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

④特特殊的組織分離2.菌索分離3.子實(shí)層分離1.生長點(diǎn)分離第27頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

3.木腐菌基內(nèi)菌絲分離①把分離用菇木的部分或全部的表面在火焰上輕燎。②取小刀在火焰上滅菌，對準(zhǔn)菇木上菇柄（耳基）的著生位置切成兩半。③確定欲分離菌絲在菇木上的位置，再次用火焰滅菌過的小刀，在欲分離部位刻劃數(shù)個(gè)井字。④用火焰滅過菌的接種鉤，鉤取一小塊木屑（綠豆大小或更?。┮平佑谛泵媾囵B(yǎng)基。⑤接種后將試管置于25—27℃下培養(yǎng)，促使其恢復(fù)。近風(fēng)干的種木內(nèi)菌絲常處于休眠狀態(tài)。接種后，種木吸濕，菌絲逐漸恢復(fù)生長。如果短期時(shí)間內(nèi)分離物未曾發(fā)，則可保留至4周后，再斷定分離是否成功。第28頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

孢子分離主要是指利用子實(shí)體上產(chǎn)生的成熟有性孢子分離培養(yǎng)獲得純菌種的方法。分為多孢分離與單孢分離兩種。（一）多孢分離4.孢子分離技術(shù)1.種菇孢子彈射法第29頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

2.帖褶法3.褶上涂抹法：4.空中孢子捕捉法:5.鉤懸法第30頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

6.試管插割法

此法方便快捷，成功率高，是多數(shù)菌種孢子分離的主要方法。適合于大型子實(shí)體的孢子分離。具體操作方法是：無菌操作迅速用無菌試管取下組織塊。用接種鎬將組織塊推至距斜面培養(yǎng)基1cm處，塞好棉塞。于25-28℃條件下見光豎立培養(yǎng)至12小時(shí)左右，在無菌操作條件下用尖頭鑷子取出組織塊。繼續(xù)暗光培養(yǎng)，2-3天后，萌發(fā)成星芒狀的單孢子菌落。第31頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

所謂單孢分離即從收集到的多孢子中將單個(gè)孢子分離出來，分別培養(yǎng)，作為育種的材料。1.涂抹法：用已沾濕無菌水的接種針，從孢子印上沾取孢子，在無菌條件下，插入盛用無菌水的小試管內(nèi)振蕩稀釋成適宜濃度的孢子懸濁液。隨后無菌條件下劃線培養(yǎng)。（二）單孢分離第32頁,共41頁，2024年2月25日，星期天2.梯度稀釋點(diǎn)樣法用同樣的方法制成濃度較高的孢子懸濁液。同時(shí)取滅菌過的空試管數(shù)根，排序編號。按無菌操作規(guī)程獲得一系列的不同濃度梯度的孢子懸浮液。再用毛細(xì)管在各個(gè)梯度孢子液中取樣培養(yǎng)，單孢萌發(fā)后菌絲便長入小培養(yǎng)基塊中，再將其轉(zhuǎn)移到試管斜面上培養(yǎng)獲得單孢培養(yǎng)物。

第33頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

第四節(jié)育種技術(shù)一、雜交育種的原理食、藥用菌的雜交是指不同種或種內(nèi)不同株系之間的交配，后者則理重要。第34頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

二、雜交育種的方法1.選擇親本：2.單孢子分離3.單孢子雜交配對第35頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

4.轉(zhuǎn)管繁殖將可親和的組合移入新的斜面保存?zhèn)溆?。四極性的異宗結(jié)合的食用菌，由于自交不育，經(jīng)配對后，凡出現(xiàn)雙核菌絲的組合，并能正常結(jié)實(shí)者，即證明雜交成功。次級同宗結(jié)合食用菌（如雙孢蘑菇），首先經(jīng)過單孢子分離、培養(yǎng)，獲取不孕菌絲。隨后進(jìn)行不孕性菌絲間的配對。第36頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

5.初次篩選經(jīng)過初步篩選，淘汰大部分表現(xiàn)一般的菌株。經(jīng)初篩后再做出菇試驗(yàn)比較，選出優(yōu)良菌株。

第37頁,共41頁，2024年2月25日，星期天

6.復(fù)篩通過栽培比較，選出少數(shù)性能優(yōu)良的菌株。出菇鑒定包括如下幾個(gè)方面：①菌絲生長速度：②出菇菌塊（袋）的表型特征：③子實(shí)體表型特征：④測定其最適生長溫度、濕度等。⑤計(jì)算子實(shí)體的產(chǎn)量。

第38頁,共41頁