異葉敗醬提取物DI對胃癌細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究_第1頁
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文檔簡介

異葉敗醬提取物DI對胃癌細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究目的：異葉敗醬是一種傳統(tǒng)的中藥,其根和根莖富含揮發(fā)油,具有一定的藥用價值,民間用于治療子宮癌和宮頸癌。我們的前期研究通過對異葉敗醬有效成分的分離提取,得到了一種具有抗腫瘤活性的化合物單體Deacetylisovaltratum(DI)。本研究旨在探討DI對人胃癌細(xì)胞AGS和HGC-27的作用,并對其可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討,為抗腫瘤候選藥物的篩選和研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和開發(fā)方向。方法：采用MTT法檢測DI對不同類型的腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用,同時進(jìn)行集落形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖變化；采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測DI作用后細(xì)胞周期變化以及細(xì)胞凋亡率；采用Hoechst33258熒光染色法觀察DI作用后細(xì)胞的凋亡情況；采用JC-1染色法檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化；采用Westernblot法檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)；以及采用Tubulin聚合實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞微管的變化。結(jié)果：DI能抑制多種實(shí)體瘤細(xì)胞的增殖,對胃癌細(xì)胞AGS和HGC-27在72h的IC50分別為5.78±0.12μM和14.07±0.55μM。隨著濃度的增加也能抑制AGS和HGC-27細(xì)胞的集落形成；流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果表明DI能引起人胃癌細(xì)胞AGS和HGC-27的G2/M期阻滯,而Tubulin聚合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DI能促進(jìn)細(xì)胞微管聚合,抑制有絲分裂,使細(xì)胞阻滯在M期；Westernblot結(jié)果顯示,一定濃度的DI作用不同時間后,AGS和HGC-27的p-Chkl蛋白表達(dá)量上升,而cdc25c和cdc2蛋白表達(dá)則逐漸下調(diào)。DI還能通過改變線粒體膜通透性,激活caspase3,引起PARP的切割,最終誘導(dǎo)AGS和HGC-27細(xì)胞凋亡。結(jié)論：DI可能通過調(diào)控Chkl-cdc25c-cdc2通路,促進(jìn)微管聚合抑制解聚,抑制

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