創(chuàng)新斑馬魚技術(shù)在化妝品行業(yè)的應(yīng)用-環(huán)特生物 -2022

創(chuàng)新斑馬魚技術(shù)助力化妝品產(chǎn)業(yè)讓消費者選擇更輕松V-2021/03/25HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.環(huán)特生物周示玉目錄水中小白鼠認(rèn)識斑馬魚研究價值技術(shù)體系斑馬魚技術(shù)服務(wù)體系應(yīng)用價值為化妝品產(chǎn)業(yè)持續(xù)賦能環(huán)特簡介十余年發(fā)展榮譽等身1234HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.01水中小白鼠認(rèn)識斑馬魚技術(shù)的價值認(rèn)識斑馬魚與人類基因同源性高達(dá)87%

；一種被譽為“水中小白鼠”的模式生物；常見的熱帶魚，成體長4～6cm；胚胎24小時內(nèi)發(fā)育成型，1天成長相當(dāng)于鼠類8-10天；中國已是全球第2大斑馬魚研究大國。斑馬魚的生理、發(fā)育和代謝與哺乳類動物高度相似，能可靠模擬和預(yù)測人類生理、病理過程。高通量周期更短3R原則透明直觀整體模式生物，與人類皮膚結(jié)構(gòu)具有高度的相似性，且個體差異性較小，測試結(jié)果可重復(fù)性較高；可靠性高胚胎及幼魚通體透明，顯微鏡下可直接觀察多種組織器官變化，實驗結(jié)果直觀易懂；胚胎在24小時內(nèi)就可發(fā)育成形，斑馬魚1天的發(fā)育程度相當(dāng)于鼠類8～10天，實驗周期更短、成本更低；雌性斑馬魚每次可產(chǎn)卵200枚左右，是目前唯一適于微孔板高通量篩選的脊椎動物，可以實現(xiàn)多個樣品的同時篩選根據(jù)《歐盟動物保護(hù)法》，5天以內(nèi)的斑馬魚胚胎和幼魚由于自帶卵黃囊，無須進(jìn)食，因此不屬于動物，符合3R原則。斑馬魚技術(shù)優(yōu)勢：與人體皮膚結(jié)構(gòu)的強(qiáng)對應(yīng)性皮膚結(jié)構(gòu)斑馬魚皮膚結(jié)構(gòu)對應(yīng)人體皮膚結(jié)構(gòu)主要功能表皮層及基底膜區(qū)保護(hù)層角質(zhì)化上皮保護(hù)，抗菌因子微嵴層/支持角質(zhì)層，促進(jìn)分泌表面層顆粒層穩(wěn)定，氣體交換，防震中間層棘層粘液杯狀細(xì)胞、分泌細(xì)胞、感覺細(xì)胞、未分化細(xì)胞基底層基底層附著在真皮、半小體上透明層透明層含有層粘連蛋白和整合素致密層致密層含有膠原蛋白半橋粒半橋粒將基底層連接到細(xì)胞外基底層細(xì)胞橋粒細(xì)胞橋粒與上皮細(xì)胞粘結(jié)側(cè)線內(nèi)耳毛細(xì)胞運動和振動的感覺器官真皮層生黑色素細(xì)胞生黑色素細(xì)胞色素沉著，防止紫外線輻射鱗屑頭發(fā)保護(hù)、鈣源血管血管輸送血液，供應(yīng)營養(yǎng)皮下組織脂肪細(xì)胞脂肪細(xì)胞隔熱，儲存熱量，吸收創(chuàng)傷K：角質(zhì)形成細(xì)胞；M：黏液細(xì)胞；C：杯狀細(xì)胞；I：離子細(xì)胞綠色：內(nèi)皮細(xì)胞；紫色：成纖維細(xì)胞；黑色、黃色和銀色：色素細(xì)胞斑馬魚皮膚結(jié)構(gòu)斑馬魚皮膚中色素細(xì)胞分布ChangWJ,HwangPP.Developmentofzebrafishepidermis[J].BirthDefectsResearchPartCEmbryoTodayReviews,2011.Cooper,CynthiaD.Insightsfromzebrafishonhumanpigmentcelldiseaseandreatment[J].DevelopmentalDynamics,2017.斑馬魚被美國國立衛(wèi)生研究院列為第三大模式生物受到歐美食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可，并通過GLP認(rèn)證OECD認(rèn)定斑馬魚胚胎毒性測試為評價化學(xué)品毒性最敏感的體內(nèi)方法OECD和ISO共發(fā)布10+項斑馬魚化學(xué)品毒性檢測標(biāo)準(zhǔn)斑馬魚技術(shù)是FDA，EPA、EURLECVAM等國際組織認(rèn)可的檢測技術(shù)；斑馬魚技術(shù)論文頻頻登上《Nature》《Science》等刊物斑馬魚技術(shù)是國際大公司的標(biāo)配技術(shù)，如默克、強(qiáng)生等，用于產(chǎn)品技術(shù)開發(fā)斑馬魚技術(shù)受到國內(nèi)外廣泛認(rèn)可斑馬魚技術(shù)受到國際廣泛認(rèn)可HJ1609-2019

水質(zhì)急性毒性斑馬魚卵法ISO15088（2007）GB/T35515-2017化學(xué)品魚類雌激素、雄激素和芳香酶抑制活性試驗方法

OECD230（2009）GB/T35517-2017化學(xué)品魚類生殖毒性短期試驗方法

OECD229（2009）GB/T31270.12-2014化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則第12部分：魚類急性毒性試驗GB/T27861-2011化學(xué)品魚類急性毒性試驗

OECD203（1992）GB/T21858-2008化學(xué)品生物富集半靜態(tài)式魚類試驗

OECD305（1996）GB/T21854-2008化學(xué)品魚類早期生活階段毒性試驗

OECD210（1992）GB/T21814-2008工業(yè)廢水的試驗方法魚類急性毒性試驗

JISK0102-71:1998GB/T21808-2008化學(xué)品魚類延長毒性14天試驗

OECD204（1984）GB/T21807-2008化學(xué)品魚類胚胎和卵黃囊仔魚階段的短期毒性試驗

OECD212（1998）GB/T21806-2008化學(xué)品魚類幼體生長試驗

OECD215（2000）GB/T21800-2008化學(xué)品生物富集流水式魚類試驗

OECD305（1996）GB/T21281-2007危險化學(xué)品魚類急性毒性分級試驗方法《全球化學(xué)品分類和標(biāo)簽協(xié)調(diào)手冊》(GHS)GB/T13267-1991水質(zhì)物質(zhì)對淡水魚(斑馬魚)急性毒性測定方法

ISO7346-1～7346-3:1984斑馬魚評價毒性與安全性國際專著：Wiley，2012（其中9/10/11/17四章由環(huán)特首席科學(xué)家李春啟博士執(zhí)筆）斑馬魚技術(shù)作為一種全新評價方法的優(yōu)勢人體實驗細(xì)胞實驗/3D皮膚斑馬魚哺乳類動物實驗周期短-√√-實驗費用低--√-高通量-√√-高靈敏性-√√-應(yīng)用范圍廣√√√-與人體的相關(guān)性高√-√√實驗結(jié)果形象生動√-√√實驗技術(shù)易推廣--√-國家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)√√/--√用“水中小白鼠”斑馬魚，代替人類試用，全面評價產(chǎn)品及成分的安全性和功效，是一種從傳統(tǒng)體外試驗向人體實驗的有效過渡，并兼具前兩者優(yōu)點的一種新方法。1.斑馬魚發(fā)育、代謝與哺乳動物高度相似，基因與人類同源性達(dá)87%，能可靠模擬和預(yù)測人類生理與病理

(YuchenD.,

et

al.FrontiersinNeuroanatomy,2016)2.斑馬魚被科學(xué)界公認(rèn)為是評價毒性最敏感的體內(nèi)方法

(Pickering&Gast,1972;McKim,1977;vonWesternhagen,1988;Power,1997)斑馬魚技術(shù)在化妝品行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程近年來，越來越多的化妝品頭部企業(yè)、檢測機(jī)構(gòu)、社會團(tuán)體都投入到斑馬魚在化妝品評價的標(biāo)準(zhǔn)化工作中，得益于行業(yè)的認(rèn)可和支持。HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.02技術(shù)體系基于化妝品評價的技術(shù)體系斑馬魚技術(shù)安全評價體系的價值結(jié)構(gòu)質(zhì)量控制自檢與市場抽檢法規(guī)層面注冊與備案檢測品牌運營品牌方自我定位與社會責(zé)任獲取消費者信任，保證長期穩(wěn)定的品牌效應(yīng)品牌運營工廠自檢OEM/ODM交付品牌方市場監(jiān)督部門隨機(jī)抽檢質(zhì)量控制新原料：《化妝品新原料申報與評審指南》普通化妝品：特護(hù)化妝品：注冊與備案檢測《化妝品注冊和備案檢驗工作規(guī)范》`安全評價體系類胰蛋白酶含量致敏性虹膜帶寬/視動反應(yīng)急性毒性皮膚中性粒細(xì)胞數(shù)量刺激性雌激素含量慢性毒性/雌激素LC50眼刺激性雌魚卵巢變化、繁殖能力孕婦專類產(chǎn)品解決方案胚胎發(fā)育毒性嬰童專類產(chǎn)品功效宣稱的備案依據(jù)序號功效宣稱人體實驗室環(huán)特生物測試方案測試指標(biāo)誘導(dǎo)條件測試結(jié)果應(yīng)用場景1祛斑美白①√

1、美白功效測試1、黑色素抑制率/功效初篩2、酪氨酸酶活力2、酪氨酸酶活性抑制率/3、色素沉著功效3、色素沉著抑制率甲萘醌2防曬√

1、防曬功效1、紫外線損傷部位的防護(hù)效率UVB功效初篩3防脫發(fā)√

1、舒緩功效1、損傷部位炎癥細(xì)胞的抑制率SLS功效初篩2、修護(hù)功效2、損傷部位恢復(fù)率斷尾3、改善新陳代謝功效3、血流速的促進(jìn)率/4祛痘√

1、祛痘功效測試1、炎癥細(xì)胞的抑制率痤瘡丙酸桿菌功效初篩5滋養(yǎng)②√

1、膠原蛋白再生功效1、膠原蛋白基因表達(dá)上調(diào)率/功效初篩2、補(bǔ)水保濕功效2、局部皮膚脫水面積抑制率氯化鈉6修護(hù)②√

1、修護(hù)功效1、損傷部位恢復(fù)率斷尾功效初篩2、舒緩功效2、損傷部位炎癥細(xì)胞的抑制率斷尾7抗皺**1、抗皺功效1、膠原蛋白基因表達(dá)上調(diào)率/功效宣稱依據(jù)2、抗氧化功效2、氧化產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度甲萘醌8緊致**1、緊致功效1、彈性蛋白基因表達(dá)上調(diào)率/功效宣稱依據(jù)9舒緩**1、舒緩功效1、炎癥細(xì)胞的抑制率SLS功效宣稱依據(jù)2、舒緩神經(jīng)功效2、總運動距離的降低率冰醋酸10去屑**1、去屑功效1、炎癥細(xì)胞的抑制率馬拉色菌功效宣稱依據(jù)2、修護(hù)功效2、損傷部位恢復(fù)率斷尾11保濕**1、補(bǔ)水保濕功效1、局部皮膚脫水面積抑制率氯化鈉功效宣稱依據(jù)12護(hù)發(fā)**1、舒緩功效1、炎癥細(xì)胞的抑制率SLS功效宣稱依據(jù)2、修護(hù)功效2、損傷部位恢復(fù)率斷尾13宣稱溫和（無刺激）**1、溫和無刺激功效1、炎癥細(xì)胞遷移率/功效宣稱依據(jù)2、安全性宣稱功效2、斑馬魚胚胎半數(shù)存活率/功效評價技術(shù)體系美白祛斑功效機(jī)理：抑制黑色素抗氧化功效ROS清除率抗氧化功效減少色素沉著舒緩功效炎癥細(xì)胞減少舒緩功效緩解刺痛感修護(hù)功效促進(jìn)再生抗光老化功效皮膚皺縮改善微循環(huán)功效促進(jìn)微血管擴(kuò)張抗衰老功效Β-半乳糖苷酶活性補(bǔ)水保濕功效表皮細(xì)胞密度HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.03應(yīng)用價值為化妝品產(chǎn)業(yè)持續(xù)賦能原料端原料功效驗證，開發(fā)原料新的功效原料風(fēng)險監(jiān)控，控制原料毒副作用配方端配方篩選，原料處理技術(shù)優(yōu)化，確保最優(yōu)配方工藝風(fēng)險控制，確保加工過程無毒副產(chǎn)生營銷端視頻/圖文等實驗素材可視化宣傳支持魚叔叔實驗室自媒體矩陣聯(lián)合推廣政府項目、獎項聯(lián)合申報產(chǎn)品端功能驗證：為產(chǎn)品功效宣稱提供科學(xué)依據(jù)風(fēng)險控制：篩查產(chǎn)品中可能存在的毒副作用同類比對：確定產(chǎn)品優(yōu)勢定位1234斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用價值覆蓋從原料篩選、配方篩選、產(chǎn)品驗證和營銷服務(wù)等全產(chǎn)品生命周期的技術(shù)服務(wù)，為化妝品企業(yè)研發(fā)賦能，為消費者選擇好產(chǎn)品提供可信賴的參考依據(jù)。時間YP01YP02YP0324h51.0／55.948h51.0230.455.972h50.8108.955.996h35.9104.629.6120h35.987.529.7玻尿酸護(hù)膚品對斑馬魚胚胎的LC50值（μL/mL）

根據(jù)OECD236標(biāo)準(zhǔn)，被測物的LC50＞100mg/L，可近似為0.1μL/mL，則可認(rèn)為該物質(zhì)安全；三種玻尿酸護(hù)膚品都是安全的，YP02樣品最安全。斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料篩選評價指標(biāo)：是否有致敏性，提供表型圖及分析數(shù)據(jù)參考依據(jù)：專利號CN10334939B：一種斑馬魚類過敏檢測模型的建立及其應(yīng)用RuiYang,Qiao-Cong

Lao,

Hang-Ping

Yu,et.al.

Tween-80andImpurityInduceAnaphylactoidReactioninZebrafish.J.Appl.Toxicol，2015;35:295–301.DobsonJT,SeibertJ,TehEM,etal.CarboxypeptidaseA5identifiesanovelmastcelllineageinthezebrafishprovidingnewinsightintomastcellfatedetermination.Blood,2008,112(7):2969-2972.2號產(chǎn)品致敏試劑盒檢測過敏反應(yīng)檢測肥大細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生的類胰蛋白酶，有效預(yù)測原料/產(chǎn)品致敏風(fēng)險安全性評價：致敏性斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料篩選風(fēng)靡一時的大麻類植物原料2021.05.26正式禁用10μg/mL全部死亡0.1μg/mL身體彎曲心包水腫靜脈竇淤血腎性水腫斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料篩選美白原料的篩選：1、看安全性；2、看功效；3、可重復(fù)性；4、市場性價比。某間苯二酚類美白劑X某間苯二酚類美白劑XXX斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料篩選多肽成分活性協(xié)同增效斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料篩選多肽成分的緊致、抗皺功效乙酰基六肽-8復(fù)合多肽-1復(fù)合多肽-2棕櫚酰二肽-7棕櫚酰五肽-4原樣棕櫚酰五肽-4復(fù)配小分子HA+麥角硫因控制膠原蛋白表達(dá)的相關(guān)基因：col1a1b、col1a1a等控制彈性蛋白表達(dá)的相關(guān)基因：eln1、eln2等斑馬魚具有與人類相同的上述基因，并且具有相同的調(diào)控功能斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料篩查20%的原料添加量24%28%35%29%26%22%麥角硫因?qū)Π唏R魚ROS清除作用表型圖超級抗氧化劑——麥角硫因的功效篩查斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：原料改性研究評價指標(biāo)組別正常對照組0.0005%原樣0.01%脂質(zhì)體斑馬魚頭部黑色素信號強(qiáng)度（像素）16831152356462842610534777954076355958476944053646976451739504975603505108440891666477530024807776901653556492708660805191642385953059507894911610731465359145413Mean643215135146654美白功效（%）/2027P<0.001<0.0010.0005%原樣0.01%脂質(zhì)體正常對照組美白化妝品原料脂質(zhì)體包裹前后功效對比斑馬魚技術(shù)在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用：技術(shù)營銷(報告)某國貨美妝品牌線上爆款（面膜產(chǎn)品）和某代餐領(lǐng)導(dǎo)品牌（口服美容產(chǎn)品）HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.04環(huán)特簡介十余年發(fā)展榮譽等身亞洲首家斑馬魚生物科技公司為三大行業(yè)（營養(yǎng)保健食品、化妝品、藥物）提供功效及安全性評價等技術(shù)服務(wù)已通過AAALAC國際認(rèn)證、國家CNAS認(rèn)可、CMA資質(zhì)認(rèn)定牽頭發(fā)布國內(nèi)首批保健食品功效評價的斑馬魚檢測團(tuán)標(biāo)2項榮獲德國紐倫堡國際發(fā)明金獎、英國國際發(fā)明展金獎及杰出創(chuàng)新獎和中國發(fā)明協(xié)會發(fā)明創(chuàng)業(yè)獎項目獎金獎等多項發(fā)明類國