單克隆抗體-課件

單克隆抗體-ppt課件1專題2細胞工程動物細胞融合與單克隆抗體專題2細胞工程2精品資料精品資料3你怎么稱呼老師？如果老師最后沒有總結一節(jié)課的重點的難點，你是否會認為老師的教學方法需要改進？你所經(jīng)歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽曬，也不怕那風雨狂，只怕先生罵我笨，沒有學問無顏見爹娘……”“太陽當空照，花兒對我笑，小鳥說早早早……”單克隆抗體-ppt課件4學習目標1.通過閱讀課文、圖片，能說出動物細胞融合的原理、方法、過程、意義2.通過回憶抗體的產(chǎn)生過程，能理解單克隆抗體的概念3.通過小組合作學習，教師提供的資料分析自主構建單克隆抗體的制備過程4.通過閱讀課本和資料，能說出單克隆抗體的優(yōu)點與應用學習目標1.通過閱讀課文、圖片，能說出動物細胞融合的原理、方5一、動物細胞融合一、動物細胞融合6活動一：閱讀課本P52思考與討論：1.誘導動物細胞融合的方法？2.動物細胞融合體現(xiàn)了細胞膜的什么特性？3.為什么滅活的病毒能作為誘導劑？（參考生物技術資料卡）4.不滅活的病毒能作為誘導劑嗎？5.動物細胞融合的結果是什么？6.融合后一定是雜交細胞嗎？7.雜交細胞遺傳物質有什么特點？8.動物細胞融合的意義？最大的應用？活動一：閱讀課本P52思考與討論：7細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞1.誘導的方法？6.融合后細胞的類型？7.AB雜交細胞遺傳物質有什么特點？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質1.1動物細胞融合過程2.原理？AB細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分8A細胞B細胞人工誘導1.2動物細胞融合的概念雜交細胞動物細胞融合（也稱細胞雜交）：是指兩個或多個細胞融合形成一個單核細胞的過程。A細胞B細胞人工誘導1.2動物細胞融合的概念雜交細胞動物9主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質體融合

細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性細胞融合的原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學方法（同101.3動物細胞融合技術的意義和應用1.3動物細胞融合技術的意義和應用11強調：效應B細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白。溫故知新1.抗體是什么？2.抗體如何產(chǎn)生？3.抗體主要分布在哪里？能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞（即效應B細胞）。4.如果一個農(nóng)夫被毒蛇咬了，如何獲得相應的抗體來治療？強調：效應B細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B12抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復注射從動物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復注射從動物的血清中分離抗體該法制132.1單克隆抗體的定義：克隆單個B淋巴細胞所產(chǎn)生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

單：一個B淋巴細胞克隆：該細胞大量增殖為相同的細胞群抗體：該細胞群產(chǎn)生的特異性抗體。二、單克隆抗體2.1單克隆抗體的定義：單：一個B淋巴細胞二、單克隆抗體14一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術設計方案：動物細胞融合技術單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能的產(chǎn)生專一抗體1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術15活動二：閱讀課本P53-54思考與討論:1.為什么要對小鼠進行注射特定的抗原？2.選擇了哪兩種細胞進行細胞融合？3.為什么選這兩種細胞？4.細胞融合后獲得幾種類型的融合細胞？5.有幾種雜交瘤細胞？6.兩次篩選的目的？7.如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？2.2單克隆抗體的制備過程活動二：閱讀課本P53-54思考與討論:2.2單克隆抗體的制16用抗原免疫小鼠骨髓瘤細胞的培養(yǎng)B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合多種細胞獲得產(chǎn)生相應抗體的B細胞產(chǎn)生專一抗體無限增殖BB

、B瘤、瘤瘤

（B、瘤）用抗原免疫小鼠骨髓瘤細胞的培養(yǎng)B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合多種細17由于培養(yǎng)基中缺乏相應的營養(yǎng)物，骨髓瘤細胞死亡B淋巴細胞培養(yǎng)幾天后死亡雜交瘤細胞置于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。由于培養(yǎng)基中缺乏相應的營養(yǎng)物，骨髓瘤細胞死亡B淋巴細胞培養(yǎng)幾18多孔細胞培養(yǎng)板陽性克隆的篩選和克隆化培養(yǎng)用培養(yǎng)液稀釋（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞多孔細胞培養(yǎng)板陽性克隆的篩選和克隆化培養(yǎng)用培養(yǎng)液稀釋（二選）19注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)由單個雜交瘤細胞通過克隆，所產(chǎn)生的化學性質單一、特異性強的抗體。單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)由單個雜交瘤細胞通過克隆，所產(chǎn)20活動三、用以下文字和箭頭來構建單克隆抗體的制備過程已免疫的B淋巴細胞、骨髓瘤細胞、BB細胞，B瘤細胞，瘤瘤細胞、雜交瘤細胞、產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞、體外培養(yǎng)、體內(nèi)培養(yǎng)、單克隆抗體、融合、篩選你學會了嗎？活動三、用以下文字和箭頭來構建單克隆抗體的制備過程已免疫的B21過程：B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇性培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞（B-瘤細胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體過程：B淋巴細胞融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇性培養(yǎng)222.3單克隆抗體的應用診斷試劑——最廣泛應用準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準確率在90％以上。2.3單克隆抗體的應用診斷試劑——最廣泛應用單克隆抗體最主要23“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物

單抗導向，藥物為彈頭治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞?！吧飳棥保絾慰寺】贵w＋藥物治療疾病和運載藥物主要用于治24兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活的病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高，可大量制備本節(jié)小結重點特點：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導251.動物細胞融合最常用的誘導方法是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動2.動物細胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞BB課堂評價評價方向：學習目標1動物細胞融合的方法、意義1.動物細胞融合最常用的誘導方法是（）BB課堂評263.單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）B淋巴細胞B．T淋巴細胞C．骨髓瘤細胞D．雜交瘤細胞課堂評價D評價方向：學習目標2單克隆抗體的概念3.單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）課堂評價D評274.科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞A課堂評價評價方向：學習目標3單克隆抗體制備的過程4.科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培28課堂評價5．下列關于單克隆抗體的敘述，錯誤的是A.特異性強、靈敏度高

B.單克隆抗體就是“生物導彈”C.單克隆抗體可用于疾病診斷和治療

D.生產(chǎn)單克隆抗體需要利用動物細胞培養(yǎng)技術

B評價方向：學習目標4單克隆抗體的優(yōu)點與應用課堂評價5．下列關于單克隆抗體的敘述，錯誤的是B評價方向：29謝謝謝謝30因為每一種B淋巴細胞可以產(chǎn)生一種抗體，人體有幾百萬個B淋巴細胞，也就是可以產(chǎn)生幾百萬中抗體。雖然你注射了某種抗原，但是產(chǎn)生對應的抗體也只有其中的一個B淋巴細胞。所以我們用傳統(tǒng)方法從動物血清里面提取的抗體往往特異性差，純度低。因為每一種B淋巴細胞可以產(chǎn)生一種抗體，人體有幾百萬個B淋巴細316、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在_________________的誘導下融合。③將誘導后產(chǎn)生的多種細胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞_____________的能力，又具有________________的本領。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。⑥將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。化學性質單一，特異性強的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產(chǎn)生專一抗體6、（1）單克隆抗體是指32（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是