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選修一專題5課題1DNA的粗提取與鑒定選修一專題5課題11DNA提取和鑒定的實(shí)驗(yàn)步驟破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液選取實(shí)驗(yàn)材料去除濾液中的雜質(zhì)粗提取析出DNA提純鑒定DNADNA提取和鑒定的實(shí)驗(yàn)步驟破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液選取實(shí)2去除濾液中的雜質(zhì)粗提取去除濾液中的雜質(zhì)粗提取3DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)(使用冷卻的酒精,對(duì)DNA的凝集效果較佳),靜置2-3min,溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物,這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取上面的水析出DNA提純DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為4鑒定DNA時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml于兩只試管中,其中一只加入DNA絲狀物,各加入二苯胺4ml試劑?;旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min,待試管冷卻后,比較兩只試管中溶液顏色的變化,看看溶解有DNA的溶液是否有藍(lán)色鑒定DNA鑒定DNA時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L的N5單元鞏固提升精練5[1]6單元鞏固提升精練5[1]7單元鞏固提升精練5[1]8(2)觀察絲狀物呈什么顏色?答:白色(2)觀察絲狀物呈什么顏色?答:白色910
不變藍(lán)——對(duì)照組溶液逐漸變藍(lán)絲狀物(DNA)實(shí)驗(yàn)組圖示結(jié)果加入物質(zhì)比較均加入:①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL鑒定時(shí)藍(lán)色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關(guān)。自變量你能采用其他方法對(duì)DNA進(jìn)行鑒定嗎?洋蔥的鱗片葉表皮細(xì)胞取少許絲狀物,置玻片中央,加1滴甲基綠溶液,絲狀物變成綠色。鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。⑧DNA的鑒定10不變藍(lán)——對(duì)照組溶液逐漸絲狀物(DNA10專題5DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片斷專題5DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)11.PCR原理⑴.在80-100°C的溫度范圍內(nèi),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體,雙鏈分開,這個(gè)過程稱為變性。⑵.當(dāng)溫度緩慢降低后,兩條彼此分離的DNA鏈又會(huì)重新結(jié)合成雙鏈。⑶.PCR利用了DNA的熱變性原理,通過控制溫度來(lái)控制雙鏈的解聚與結(jié)合,現(xiàn)在使用的PCR儀實(shí)質(zhì)上也是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。.PCR原理⑴.在80-100°C的溫度范圍內(nèi),DNA的雙螺12高溫解決了打開雙鏈的問題,但是,又導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題,耐高溫的TaqDNA聚合酶解決了高溫導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題,促成了PCR技術(shù)的自動(dòng)化。5.TaqDNA聚合酶的應(yīng)用6.需要為PCR反應(yīng)提供的物質(zhì)緩沖液、DNA模板,分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物,四種脫氧核苷酸,耐熱的DNA聚合酶,同時(shí)通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。高溫解決了打開雙鏈的問題,但是,又導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題13將離心管放入PCR儀上,設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。循環(huán)數(shù)變性復(fù)性延伸第一次94℃,10min--30次94℃,30s55℃,30s72℃,1min最后一次94℃,1min55℃,30s72℃,1minPCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán),每次循環(huán)可以分為三個(gè)基本步驟──變性、復(fù)性和延伸.將離心管放入PCR儀上,設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。循環(huán)數(shù)變性14靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’Taq
DNA聚合酶PCR循環(huán)第三步:引物延伸靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’Ta15選修一專題5課題3血紅蛋白的提取和分離選修一專題5課題316知識(shí)總結(jié)血紅蛋白的提取和分離蛋白質(zhì)分子的差異性凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定知識(shí)總結(jié)血紅蛋白的提取和分離蛋白質(zhì)分子的差異性凝膠色譜法原17二、實(shí)驗(yàn)操作蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步:(1)樣品處理:包括洗滌紅細(xì)胞;血紅蛋白釋放;分離血紅蛋白溶液。(2)粗分離:透析除去分子較小的雜質(zhì)。(3)純化:通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。(4)純度鑒定:通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。↓↓↓二、實(shí)驗(yàn)操作蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步:(1)樣品處理:18(一)樣品處理及粗分離1、紅細(xì)胞的洗滌:
(2)目的:是去除雜蛋白(1)步驟:血液+檸檬酸鈉→低速短時(shí)離心→吸出上層血漿→紅細(xì)胞+5倍體積生理鹽水→緩慢攪拌10min→低速短時(shí)離心→吸出上清液→反復(fù)洗滌直至上清液無(wú)黃色(一)樣品處理及粗分離(3)注意事項(xiàng):洗滌次數(shù)過少,無(wú)法除去血漿蛋白;離心速度過高或時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀,達(dá)不到分離的效果。(一)樣品處理及粗分離1、紅細(xì)胞的洗滌:(2)目的:19在蒸餾水和甲苯作用下攪拌,紅細(xì)胞破裂釋放2、血紅蛋白的釋放:蒸餾水的作用是加入甲苯的作用是充分?jǐn)嚢璧哪康氖鞘辜t細(xì)胞大量吸水脹裂溶解紅細(xì)胞的細(xì)胞膜加速紅細(xì)胞的破裂攪拌器轉(zhuǎn)子磁力攪拌器攪拌器正在工作在蒸餾水和甲苯作用下攪拌,紅細(xì)胞破裂釋放2、血紅蛋白的釋放203.分離血紅蛋白分離過程紅細(xì)胞混合液中速離心10min離心管濾紙過濾脂類物質(zhì)燒杯紅細(xì)胞破碎混合液→中速長(zhǎng)時(shí)離心(2000r/min×10min)→濾紙過濾除去脂質(zhì)→分液漏斗分離出血紅蛋白,得到紅色透明液體。3.分離血紅蛋白分離過程紅細(xì)胞中速離心離心管濾紙過濾脂類物質(zhì)21有機(jī)溶劑無(wú)色透明的甲苯層脂類物質(zhì)白色脂溶性物質(zhì)沉淀層血紅蛋白溶液紅色透明液體紅細(xì)胞破碎物沉淀暗紅色沉淀物有機(jī)溶劑無(wú)色透明的甲苯層脂類物質(zhì)白色2220mmol/L磷酸緩沖液1mL1mL4、透析(粗提取):裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中(PH為7.0)透析。目的:除去樣品中分子量較小的雜質(zhì),或用于更換樣品中的緩沖液20mmol/L磷酸緩沖液4、透析(粗提?。貉b入透析袋并置23㈠凝膠色譜法(分配色譜法)1、凝膠:一些微小多孔的球體(內(nèi)含許多貫穿的通道,由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖)2、概念:根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法3、原理:㈠凝膠色譜法(分配色譜法)1、凝膠:一些微小多孔的球體(24具體過程具體過程25在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳示意圖在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)26單元鞏固提升精練5[1]27當(dāng)你的才華還撐不起你的野心時(shí),你就該努力。心有猛虎,細(xì)嗅薔薇。我TM竟然以為我竭盡全力了。能力是練出來(lái)的,潛能是逼出來(lái)的,習(xí)慣是養(yǎng)成的,我的成功是一步步走出來(lái)的。不要因?yàn)橄M?jiān)持,要堅(jiān)持的看到希望。最怕自己平庸碌碌還安慰自己平凡可貴。腳踏實(shí)地過好每一天,最簡(jiǎn)單的恰恰是最難的。拿夢(mèng)想去拼,我怎么能輸。只要學(xué)不死,就往死里學(xué)。我會(huì)努力站在萬(wàn)人中央成為別人的光。行為決定性格,性格決定命運(yùn)。不曾揚(yáng)帆,何以至遠(yuǎn)方。人生充滿苦痛,我們有幸來(lái)過。如果驕傲沒有被現(xiàn)實(shí)的大海冷冷拍下,又怎么會(huì)明白要多努力才能走到遠(yuǎn)方。所有的豪言都收起來(lái),所有的吶喊都咽下去。十年后所有難過都是下酒菜。人生如逆旅,我亦是行人。駕馭命運(yùn)的舵是奮斗,不抱有一絲幻想,不放棄一點(diǎn)機(jī)會(huì),不停止一日努力。失敗時(shí)郁郁寡歡,這是懦夫的表現(xiàn)。所有偷過的懶都會(huì)變成打臉的巴掌。越努力,越幸運(yùn)。每一個(gè)不起舞的早晨,都是對(duì)生命的辜負(fù)。死魚隨波逐流,活魚逆流而上。墻高萬(wàn)丈,擋的只是不來(lái)的人,要來(lái),千軍萬(wàn)馬也是擋不住的既然選擇遠(yuǎn)方,就注定風(fēng)雨兼程。漫漫長(zhǎng)路,荊棘叢生,待我用雙手踏平。不要忘記最初那顆不倒的心。胸有凌云志,無(wú)高不可攀。人的才華就如海綿的水,沒有外力的擠壓,它是絕對(duì)流不出來(lái)的。流出來(lái)后,海綿才能吸收新的源泉。感恩生命,感謝她給予我們一個(gè)聰明的大腦。思考疑難的問題,生命的意義;贊頌真善美,批判假惡丑。記住精彩的瞬間,激動(dòng)的時(shí)刻,溫馨的情景,甜蜜的鏡頭。感恩生命賦予我們特有的靈性。善待自己,幸福無(wú)比,善待別人,快樂無(wú)比,善待生命,健康無(wú)比。一切偉大的行動(dòng)和思想,都有一個(gè)微不足道的開始。在你發(fā)怒的時(shí)候,要緊閉你的嘴,免得增加你的怒氣。獲致幸福的不二法門是珍視你所擁有的、遺忘你所沒有的。驕傲是勝利下的蛋,孵出來(lái)的卻是失敗。沒有一個(gè)朋友比得上健康,沒有一個(gè)敵人比得上病魔,與其為病痛暗自流淚,不如運(yùn)動(dòng)健身為生命添彩。有什么別有病,沒什么別沒錢,缺什么也別缺健康,健康不是一切,但是沒有健康就沒有一切。什么都可以不好,心情不能不好;什么都可以缺乏,自信不能缺乏;什么都可以不要,快樂不能不要;什么都可以忘掉,健身不能忘掉。選對(duì)事業(yè)可以成就一生,選對(duì)朋友可以智能一生,選對(duì)環(huán)境可以快樂一生,選對(duì)伴侶可以幸福一生,選對(duì)生活方式可以健康一生。含淚播種的人一定能含笑收獲一個(gè)有信念者所開發(fā)出的力量,大于個(gè)只有興趣者。忍耐力較諸腦力,尤勝一籌。影響我們?nèi)松慕^不僅僅是環(huán)境,其實(shí)是心態(tài)在控制個(gè)人的行動(dòng)和思想。同時(shí),心態(tài)也決定了一個(gè)人的視野、事業(yè)和成就,甚至一生。每一發(fā)奮努力的背后,必有加倍的賞賜。懶惰像生銹一樣,比操勞更消耗身體。所有的勝利,與征服自己的勝利比起來(lái),都是微不足道。所有的失敗,與失去自己的失敗比起來(lái),更是微不足道挫折其實(shí)就是邁向成功所應(yīng)繳的學(xué)費(fèi)。在這個(gè)塵世上,雖然有不少寒冷,不少黑暗,但只要人與人之間多些信任,多些關(guān)愛,那么,就會(huì)增加許多陽(yáng)光。一個(gè)能從別人的觀念來(lái)看事情,能了解別人心靈活動(dòng)的人,永遠(yuǎn)不必為自己的前途擔(dān)心。當(dāng)一個(gè)人先從自己的內(nèi)心開始奮斗,他就是個(gè)有價(jià)值的人。沒有人富有得可以不要?jiǎng)e人的幫助,也沒有人窮得不能在某方面給他人幫助。時(shí)間告訴你什么叫衰老,回憶告訴你什么叫幼稚。不要總在過去的回憶里纏綿,昨天的太陽(yáng),曬不干今天的衣裳。今天做別人不愿做的事,明天就能做別人做不到的事。到了一定年齡,便要學(xué)會(huì)寡言,每一句話都要有用,有重量。喜怒不形于色,大事淡然,有自己的底線。趁著年輕,不怕多吃一些苦。這些逆境與磨練,才會(huì)讓你真正學(xué)會(huì)謙恭。不然,你那自以為是的聰明和藐視一切的優(yōu)越感,遲早會(huì)毀了你。無(wú)論現(xiàn)在的你處于什么狀態(tài),是時(shí)候?qū)ψ约赫f(shuō):不為模糊不清的未來(lái)?yè)?dān)憂,只為清清楚楚的現(xiàn)在努力。世界上那些最容易的事情中,拖延時(shí)間最不費(fèi)力。崇高的理想就像生長(zhǎng)在高山上的鮮花。如果要搞下它,勤奮才能是攀登的繩索。行動(dòng)是治愈恐懼的良藥,而猶豫、拖延將不斷滋養(yǎng)恐懼。海浪的品格,就是無(wú)數(shù)次被礁石擊碎又無(wú)數(shù)閃地?fù)湎蚪甘?。人都是矛盾的,渴望被理解,又害怕被看穿。?jīng)過大海的一番磨礪,卵石才變得更加美麗光滑。生活可以是甜的,也可以是苦的,但不能是沒味的。你可以勝利,也可以失敗,但你不能屈服。越是看起來(lái)極簡(jiǎn)單的人,越是內(nèi)心極豐盛的人。盆景秀木正因?yàn)楸蝗四鐞?,才破滅了成為棟梁之材的?mèng)。樹苗如果因?yàn)榕峦炊芙^修剪,那就永遠(yuǎn)不會(huì)成材。生活的激流已經(jīng)涌現(xiàn)到萬(wàn)丈峭壁,只要再前進(jìn)一步,就會(huì)變成壯麗的瀑布。生命很殘酷,用悲傷讓你了解什么叫幸福,用噪音教會(huì)你如何欣賞寂靜,用彎路提醒你前方還有坦途。山澗的泉水經(jīng)過一路曲折,才唱出一支美妙的歌通過云端的道路,只親吻攀登者的足跡。敢于向黑暗宣戰(zhàn)的人,心里必須充滿光明。驕傲,是斷了引線的風(fēng)箏,稍縱即逝;自卑,是剪了雙翼的飛鳥,難上青天。這兩者都是成才的大向你的美好的希冀和追求撒開網(wǎng)吧,九百九十九次落空了,還有一千次呢。只有創(chuàng)造,才是真正的享受,只有拼搏,才是充實(shí)的生活。激流勇進(jìn)者方能領(lǐng)略江河源頭的奇觀勝景忙于采集的蜜蜂,無(wú)暇在人前高談闊論有一個(gè)人任何時(shí)候都不會(huì)背棄你,這個(gè)人就是你自己。誰(shuí)不虛偽,誰(shuí)不善變,誰(shuí)都不是誰(shuí)的誰(shuí)。又何必把一些人,一些事看的那么重要。有一種女人像貝殼一樣,外面很硬,內(nèi)在其實(shí)很軟。心里有一顆美麗的珍珠,卻從來(lái)不輕易讓人看見。人生沒有絕對(duì)的公平,而是相對(duì)公平。在一個(gè)天平上,你得到越多,勢(shì)必要承受更多,每一個(gè)看似低的起點(diǎn),都是通往更高峰的必經(jīng)之路。你要學(xué)會(huì)捂上自己的耳朵,不去聽那些熙熙攘攘的聲音;這個(gè)世界上沒有不苦逼的人,真正能治愈自己的,只有你自己。時(shí)間會(huì)告訴你一切真相。有些事情,要等到你漸漸清醒了,才明白它是個(gè)錯(cuò)誤;有些東西,要等到你真正放下了,才知道它的沉重。時(shí)間并不會(huì)真的幫我們解決什么問題,它只是把原來(lái)怎么也想不通的問題,變得不再重要了。生活不是讓你用來(lái)妥協(xié)的。你退縮得越多,那么可以讓你喘息的空間也就是越少。胸懷臨云志,莫負(fù)少年時(shí)唯有行動(dòng)才能解除所有的不安。明天的希望,讓
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