血清學(xué)檢驗及其新技術(shù)

關(guān)于血清學(xué)檢驗及其新技術(shù)CompanyLogo臨床生化檢查1常用生化分析技術(shù)2參考值、參考區(qū)間與醫(yī)學(xué)決定水平3蛋白質(zhì)測定4糖類及其代謝產(chǎn)物的測定5脂類與脂蛋白測定6電解質(zhì)測定7非蛋白氮類化合物測定8酶活力測定9激素及其代謝產(chǎn)物的測定10血?dú)夥治龅?頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo臨床免疫學(xué)及血清學(xué)檢查1總補(bǔ)體和單個成分的測定2免疫球蛋白測定3免疫復(fù)合物的測定4自身抗體的檢測5腫瘤免疫學(xué)檢查第3頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogoHotTipHowdoIincorporatemylogotoaslidethatwillapplytoalltheotherslides?

Onthe[View]menu,pointto[Master],andthenclick[SlideMaster]or[NotesMaster].Changeimagestotheoneyoulike,thenitwillapplytoalltheotherslides.概述第4頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo概述第5頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo全血、血清和血漿一般的，臨床檢驗采用的血液標(biāo)本分為：全血、血清和血漿全血：血液經(jīng)抗凝處理后的全部血液。血漿：離心除去血細(xì)胞后所得到的淡黃色液體。血清：如血液不經(jīng)抗凝處理，讓他自行凝固，則在抽血后的一段時間內(nèi)，血液會自動在一系列凝血因子的作用下發(fā)生凝集，血液首先凝固成一個整體，再經(jīng)過一段時間或用離心機(jī)離心，血液中凝固的部分會與一些清澈淡黃色的液體分離開，這些液體稱為血清。概述第6頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo血漿、血清血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。全血--主要用于血細(xì)胞成分的檢查血清和血漿，主要用于大部分臨床化學(xué)檢查和免疫學(xué)檢查血清--多用于血液生化、免疫等方面的測定；血漿多用于凝血等方面的測定。概述第7頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo血清的主要成分各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但血清的成份可能有幾百種之多，目前對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識概述第8頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo血清的主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)提供激素和各種生長因子提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用概述第9頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogoContents概述1臨床生化檢查2臨床免疫學(xué)及血清學(xué)檢查3血清學(xué)新技術(shù)4第10頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo臨床生化檢查1常用生化分析技術(shù)2參考值、參考區(qū)間與醫(yī)學(xué)決定水平3蛋白質(zhì)測定4糖類及其代謝產(chǎn)物的測定5脂類與脂蛋白測定6電解質(zhì)測定7非蛋白氮類化合物測定8酶活力測定9激素及其代謝產(chǎn)物的測定10血?dú)夥治雠R床生化檢驗第11頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)血常規(guī)檢查一般取用末梢血檢查，如指尖、耳垂部位的血。在經(jīng)過血液細(xì)胞分析儀器，電腦報告結(jié)果，此項目已成為檢查病畜的一個慣例，所以稱之為血常規(guī)。將采取的抗凝全血注入5ml的真空采血管，搖勻后去掉密封上蓋，將樣本放到采血針下吸樣，儀器顯示結(jié)果后打印。臨床生化檢驗第12頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-臨床意義血常規(guī)檢查在全身體檢中是基本的體檢項目，它的意義在于可以發(fā)現(xiàn)許多全身性疾病的早期跡象，診斷是否貧血，是否有血液系統(tǒng)疾病，反應(yīng)骨髓的造血功能等。例如：通常感染性疾病會使白細(xì)胞的數(shù)值和分類發(fā)生變化；貧血時血紅蛋白或紅細(xì)胞的檢驗值會降低；而血小板的減少會導(dǎo)致容易出血或出血后不容易止住，而血小板增多會增多血栓發(fā)生的可能；另外，有些腫瘤、變化反映性疾病也可以引起血常規(guī)檢查部分?jǐn)?shù)值的變化。臨床生化檢驗第13頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)臨床生化檢驗第14頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)的臨床意義血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞（RBC）臨床生化檢驗第15頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)的臨床意義白細(xì)胞（WBC）、中性粒細(xì)胞臨床生化檢驗第16頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)的臨床意義嗜酸性粒細(xì)胞

臨床生化檢驗第17頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)的臨床意義淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞

臨床生化檢驗第18頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)的臨床意義血小板（PLT）臨床生化檢驗第19頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo一、血常規(guī)-常規(guī)參數(shù)的臨床意義血沉、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)臨床生化檢驗第20頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗-血液化學(xué)檢查血清電解質(zhì)和酸堿平衡檢測：血清鉀、鈉、氯、鈣、無機(jī)磷，血?dú)馀c酸堿平衡，血液乳酸血清酶檢測：血清轉(zhuǎn)氨酶、血清堿性磷酸酶血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、血清肌酸激酶血清乳酸脫氫酶、血清淀粉酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、血清銅氧化酶、血清膽堿酯酶血清其他生化指標(biāo)檢測：血糖、血清蛋白質(zhì)、血清膽紅素、血清膽固醇、血清甘油三酯血清肌酐、血清尿素、血清尿酸、維生素（A/B/C….）臨床生化檢驗第21頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗-內(nèi)容臨床生化檢驗第22頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗-輔助診斷尿常規(guī)可以輔助診斷泌尿系統(tǒng)及其鄰近器官疾病，查不出腎上腺，要查腎上腺功能，需要查腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺、促腎上腺皮質(zhì)激素等腎上腺分泌的激素臨床生化檢驗第23頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗臨床生化檢驗第24頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗1.血糖

【臨床意義】對于胰島素，糖皮質(zhì)激素、腎上腺素等分泌不足或過多有鑒別意義，對于糖尿病的診斷和糖尿病的治療效果有一定意義。2.二氧化碳結(jié)合力

【臨床意義】對于判斷代謝性或呼吸性酸中毒、堿中毒有一定意義。臨床生化檢驗第25頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗3.尿素氮（BUN）

【臨床意義】判定腎功能。增高可見于各種原因的腎功能損害；肝功能嚴(yán)重?fù)p害時減低。4.肌酐

【臨床意義】對急、慢性腎炎的診斷和預(yù)后有重要意義5.尿酸

【臨床意義】增高：臨床多見于痛風(fēng)、急性及慢性腎炎、白血病、多發(fā)性骨髓瘤等臨床生化檢驗第26頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗6.鉀、鈉、氯

【臨床意義】判定電解質(zhì)及酸堿平衡情況7.鈣

【臨床意義】判定甲狀旁腺機(jī)能，維生素Ｄ缺乏癥，骨腫瘤，多發(fā)骨髓瘤有意義。8.蛋白：總蛋白、白蛋白【臨床意義】可了解體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的一般情況：對肝腎損害，多發(fā)性骨髓瘤等有一定診斷、鑒別診斷意義臨床生化檢驗第27頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗9.血清膽紅素：血清總膽紅素、血清直接膽紅素【臨床意義】診斷、鑒別診斷黃疸類型有重要意義。心血管疾病、中毒時升高10.谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）

【臨床意義】對肝膽疾病的診斷及病情變的觀察有重要意義。11.谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）

【臨床意義】急性心肌梗塞時升高，肝病及其它臟器炎癥時也常增高

臨床生化檢驗第28頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗12.r--谷氨酰轉(zhuǎn)移酶或轉(zhuǎn)酞酶（r--GT）

【臨床意義】肝膽系統(tǒng)病變特別是肝癌時明顯增高。13.肌酸磷酸激酶（CK）

【臨床意義】骨胳肌疾病、甲狀腺功能減退、急性心肌梗塞時顯著升高。14.乳酸脫氫酶（LDH）

【臨床意義】心、肝、肺等組織急性損害時明顯增高臨床生化檢驗第29頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗15.堿性磷酸酶（AKP）【臨床意義】阻塞性黃疸、肝炎、肝硬化、肺癌、骨肉瘤、腫瘤骨轉(zhuǎn)移等明顯升高。16.膽堿酯酶（CHE）【臨床意義】有機(jī)磷中毒，嚴(yán)重而廣泛的肝實(shí)質(zhì)性損害時減低。17.淀粉酶（AMS）【臨床意義】診斷胰腺炎、胰腺癌的主要指標(biāo)之一。流行性腮腺炎甲期，胰腺附近的胃穿孔，也常增高。

臨床生化檢驗第30頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo二、血清生化檢驗18.總膽固醇、甘油三脂

【臨床意義】了解體內(nèi)脂代謝情況，對冠心病、動脈粥樣硬化、高血壓、甲狀腺機(jī)能減退等診斷有意義。

臨床生化檢驗第31頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗免疫化學(xué)法特異定量個別蛋白質(zhì)常規(guī)：免疫濁度法、免疫擴(kuò)散法，免疫電泳法，微量：放射免疫測定（RIA），酶免疫測定法（ELA/ELISA）電泳測定：電泳組成圖譜半定量定量定量化學(xué)測定TPr，Alb染料結(jié)合法，UV法，折光法等臨床生化檢驗第32頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定1.凱氏定氮法－參考方法2.雙縮脲法(推薦)

3.酚試劑法4.散射比濁法5.染料結(jié)合法6.UV法7.折光測定法臨床生化檢驗第33頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定1.凱氏定氮法－參考方法優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確度高，精密度高，靈敏度高，是公認(rèn)的參考方法。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)時，不適合常規(guī)檢測，血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是疾病時。應(yīng)用：標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)定及校正其它常規(guī)方法臨床生化檢驗第34頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定2.雙縮脲法優(yōu)點(diǎn)：簡便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，10g-120g/L線性好，特異性與精密度好，批內(nèi)CV%＜2%，顯色穩(wěn)定。缺點(diǎn)：靈敏度較差，對蛋白質(zhì)含量低的體液標(biāo)本不適合。應(yīng)用：常規(guī)推薦方法。手工或上機(jī)使用。臨床生化檢驗第35頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定3.酚試劑法(Folin試劑法）Lowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+，提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。吸收峰為745-750nm。優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，改良法靈敏度高（10μg-60μg），適合測定蛋白含量少的標(biāo)本。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸比例不同，只適合測定單一蛋白質(zhì)。受一些藥物干擾。臨床生化檢驗第36頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定4.比濁法優(yōu)點(diǎn)：簡便不需特殊儀器。缺點(diǎn)：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應(yīng)溫度，蛋白絮狀沉淀等）5.染料結(jié)合法優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點(diǎn)：特異性不高；不同蛋白質(zhì)和染料的結(jié)合力不一致，標(biāo)準(zhǔn)物不易確定。臨床生化檢驗第37頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定6.紫外分光光度法優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡便，可保留蛋白生物活性，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度計及石英比色皿。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm測定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；核酸在206nm有最大吸收，在280nm有較大吸收，導(dǎo)致準(zhǔn)確性和特異性受影響。措施：在220-225nm波長區(qū)域，用0.15mol/l的NaCl稀釋1000-2000倍可消除干擾。5.染料結(jié)合法臨床生化檢驗第38頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定7.折光測定法優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速，易掌握，重復(fù)性較好，適合臨床急診，體檢篩查和胸腹水蛋白質(zhì)測定。缺點(diǎn)：準(zhǔn)確性較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影響，會由于A/G比值變化而產(chǎn)生誤差。

臨床生化檢驗第39頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-總蛋白測定臨床意義：總蛋白升高：①真性升高：MM、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等②假性升高：機(jī)體明顯失水，總蛋白含量相對升高，A/G幾乎不變總蛋白降低：①丟失過多②消耗增加③白蛋白合成減少④水腫臨床生化檢驗第40頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo三、血清蛋白檢驗-白蛋白測定1.染料結(jié)合法(推薦)2.鹽析法3.電泳法4.免疫化學(xué)法臨床生化檢驗第41頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogoContents概述1臨床生化檢查2臨床免疫學(xué)及血清學(xué)檢查3血清學(xué)新技術(shù)4第42頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)技術(shù)臨床免疫學(xué)檢驗

用于檢測抗原或抗體的體外免疫反應(yīng)技術(shù)或稱免疫檢測技術(shù)，這一類技術(shù)因一般都需用血清進(jìn)行試驗，通常稱為免疫血清學(xué)反應(yīng)或免疫血清學(xué)技術(shù)。第43頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗臨床免疫學(xué)檢驗一、凝聚性試驗?zāi)囼灒河深w粒性抗原參與沉淀試驗：由可溶性抗原參與二、標(biāo)記抗體技術(shù)熒光抗體標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)抗體技術(shù)同位素標(biāo)記技術(shù)三、中和試驗終點(diǎn)法中和試驗空斑減少試驗第44頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-凝集試驗臨床免疫學(xué)檢驗參與凝集試驗的抗體主要為IgG、IgM。凝集試驗可用于檢測抗原或抗體。凝集試驗可根據(jù)抗原的性質(zhì)、反應(yīng)的方式分為直接凝集試驗（簡稱凝集試驗）和間接凝集試驗。第45頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-凝集試驗臨床免疫學(xué)檢驗直接凝集試驗顆粒性抗原與凝集素直接結(jié)合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的試驗稱作直接凝集試驗(directagglutinationtest)玻片法：定性試驗，適用于新分離細(xì)菌的鑒定或分型試管法：定量試驗，檢測待測血清中是否存在相應(yīng)抗體和測定抗體含量第46頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-凝集試驗臨床免疫學(xué)檢驗間接凝集試將可溶性抗原(或抗體)先吸附于一種與免疫無關(guān)的，一定大小的不溶性顆粒(統(tǒng)稱為載體顆粒)的表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)稱為間接凝集反應(yīng)。敏感性高，但特異性較差第47頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-凝集試驗臨床免疫學(xué)檢驗間接血凝試驗將抗原致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測相應(yīng)抗體，在與相應(yīng)抗體反應(yīng)時出現(xiàn)肉眼可見凝集，稱為間接血凝試驗(passiveheamagglutinationassay,PHA)將抗體致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測檢樣本中相應(yīng)抗原，致敏紅細(xì)胞在與相應(yīng)抗原反應(yīng)時發(fā)生凝集，稱為反向間接血凝試驗(reversepassiveheamagglutinationassay,RPHA)。第48頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-凝集試驗臨床免疫學(xué)檢驗乳膠凝集試驗聚苯乙烯乳膠是利用化工原料聚苯乙稀經(jīng)過乳液聚合得到的高分子乳膠液，乳膠微球直徑約0.8m。對蛋白質(zhì)、核酸等高分子物質(zhì)具有良好的吸附性能。利用聚苯乙烯乳膠的微球作載體，以吸附某些抗原(或抗體)，即能用以檢測相應(yīng)的抗體(或抗原)，稱為乳膠凝集反應(yīng)。(latexagglutinationtest)第49頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-凝集試驗臨床免疫學(xué)檢驗協(xié)同凝集試驗葡萄球菌A蛋白(staphylococalproteinA，簡稱SPA)是大多數(shù)金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動物IgG分子的Fc片結(jié)合。SPA與IgG結(jié)合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗體活性。當(dāng)此被覆著特異性抗體的葡萄球菌與相應(yīng)的抗原結(jié)合時，就可互相連結(jié)引起協(xié)同凝集反應(yīng)，簡稱COAG。第50頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-沉淀試驗臨床免疫學(xué)檢驗可溶性抗原(如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗(precipitationtest)。第51頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-沉淀試驗臨床免疫學(xué)檢驗環(huán)狀沉淀試驗在小口徑試管內(nèi)先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽性反應(yīng)。本法主要用于抗原的定性試驗，如炭疽病的診斷(Ascoli試驗)。試驗時出現(xiàn)白色沉淀帶的最高抗原稀釋倍數(shù)，即為血清的沉淀價。第52頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-沉淀試驗臨床免疫學(xué)檢驗瓊脂免疫擴(kuò)散試驗抗原抗體在瓊脂凝膠中擴(kuò)散，當(dāng)二者在比例適當(dāng)處相遇，即發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成肉眼可見的沉淀帶，此種反應(yīng)稱為瓊脂免疫擴(kuò)散，又簡稱瓊脂擴(kuò)散和免疫擴(kuò)散。單向單擴(kuò)散單向雙擴(kuò)散雙向單擴(kuò)散雙向雙擴(kuò)散第53頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-酶標(biāo)抗體技術(shù)臨床免疫學(xué)檢驗根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化反應(yīng)的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術(shù)?；境绦颍簶?biāo)記－抗原抗體復(fù)合物－底物根據(jù)底物溶液的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。第54頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-酶標(biāo)抗體技術(shù)臨床免疫學(xué)檢驗酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)ELISA是當(dāng)前應(yīng)用最廣、發(fā)展最快的一項新技術(shù)。其基本過程是將抗原(或抗體)吸附于固相載體，在載體上進(jìn)行免疫酶染色反應(yīng)，底物顯色后用肉眼或分光光度計判定結(jié)果。第55頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-酶標(biāo)抗體技術(shù)臨床免疫學(xué)檢驗免疫組化染色技術(shù)標(biāo)本制備和處理：組織切片、壓片、涂片、細(xì)胞蓋片；消除內(nèi)源性過氧化酶染色：間接法、直接法顯色觀察第56頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-放射免疫測定（RIA）臨床免疫學(xué)檢驗將同位素測量的高度敏感性和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性結(jié)合起來而建立的免疫分析技術(shù)可定量分析，也可定性分析特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性和精密度好第57頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-中和試驗臨床免疫學(xué)檢驗抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學(xué)試驗稱為中和試驗。主要用于病毒感染的血清學(xué)診斷、病毒分離株的鑒定、不同病毒株的抗原關(guān)系研究、疫苗免疫原性的評價、免疫血清的質(zhì)量評價和檢測動物血清中的抗體等。第58頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-中和試驗臨床免疫學(xué)檢驗終點(diǎn)法中和試驗(endpointneutralizationtest)固定病毒稀釋血清法：測定病毒毒價；固定病毒稀釋血清接種細(xì)胞或動物，計算中和價固定血清稀釋病毒法：固定血清稀釋病毒接種細(xì)胞或動物，計算LD50，然后計算中和指數(shù)（中和組LD50/對照組LD50）第59頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-中和試驗臨床免疫學(xué)檢驗空斑減少試驗(plaguereductiontest)：空斑數(shù)減少50％的血清量作為中和滴度病毒稀釋成每一接種劑量含100PFU，加倍比稀釋的血清，37℃1h接種細(xì)胞加入預(yù)溫的營養(yǎng)瓊脂計算空斑數(shù)第60頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-其他檢測技術(shù)

臨床免疫學(xué)檢驗免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)（immunoblotting）免疫沉淀（immunoprecipitation）化學(xué)發(fā)光免疫測定（chemiluminescentimmunoassay，CLIA）膠體金免疫檢測技術(shù)第61頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗-沉淀試驗臨床免疫學(xué)檢驗間接血凝試驗將抗原致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測相應(yīng)抗體，在與相應(yīng)抗體反應(yīng)時出現(xiàn)肉眼可見凝集，稱為間接血凝試驗(passiveheamagglutinationassay,PHA)將抗體致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測檢樣本中相應(yīng)抗原，致敏紅細(xì)胞在與相應(yīng)抗原反應(yīng)時發(fā)生凝集，稱為反向間接血凝試驗(reversepassiveheamagglutinationassay,RPHA)。第62頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗臨床免疫學(xué)檢驗一、凝聚性試驗?zāi)囼灒河深w粒性抗原參與沉淀試驗：由可溶性抗原參與第63頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗臨床免疫學(xué)檢驗一、凝聚性試驗?zāi)囼灒河深w粒性抗原參與沉淀試驗：由可溶性抗原參與第64頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo免疫血清學(xué)實(shí)驗臨床免疫學(xué)檢驗一、凝聚性試驗?zāi)囼灒河深w粒性抗原參與沉淀試驗：由可溶性抗原參與第65頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo1、總補(bǔ)體和單個成分的測定臨床免疫學(xué)檢驗血清總補(bǔ)體溶血活性（CH50）測定50％溶血法：50～100U／ml脂質(zhì)體法：26～55lU／ml目視比色法第66頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo1、總補(bǔ)體和單個成分的測定臨床免疫學(xué)檢驗[臨床意義]補(bǔ)體是機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分，其主要功能是抗感染，同時也有引起炎癥的作用，參與變態(tài)反應(yīng)?？傃a(bǔ)體活性測定，主要是反映補(bǔ)體(C1～C9)經(jīng)傳統(tǒng)途徑活化的活性。等。第67頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo1、總補(bǔ)體和單個成分的測定臨床免疫學(xué)檢驗總補(bǔ)體活性升高：見于各種急性炎癥、感染、組織損傷、惡性腫瘤等，一些傳染病，如風(fēng)濕熱、傷寒、結(jié)核、麻疹等也可見補(bǔ)體代償性升高總補(bǔ)體活性降低，可能有以下幾種原因：(1)補(bǔ)體消耗增多：常見于血清病、急性腎小球腎炎、慢性腎炎、SLE活動期、惡性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性溶血性貧血等。(2)補(bǔ)體大量喪失：多見于腎病綜合征乃大面積烙傷等情況；。(3)補(bǔ)體合成不足：主要見于各種肝病患者，如肝硬化、慢性活動性肝炎及急性重癥肝炎第68頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo1、總補(bǔ)體和單個成分的測定臨床免疫學(xué)檢驗常作為單個補(bǔ)體成分的檢測指標(biāo)：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等。測定方法：免疫溶血法（檢測單個補(bǔ)體成分的活性）免疫化學(xué)法（檢測單個補(bǔ)體成分的含量）自動化免疫散射比濁法第69頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo1、總補(bǔ)體和單個成分的測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫溶血法--以“C4活性測定”為例該方法要用新鮮RBC、溶血素、豚鼠血清、影響因素多。也可用平皿法：用EAR4制備瓊脂板、打孔、加樣，以溶血環(huán)直徑大小判斷C4活性。用免疫化學(xué)法檢測C4含量，簡單、特異、重復(fù)性好，但不能反映其活性。4.臨床意義：用于檢測先天性補(bǔ)體缺乏；含量降低：遺傳性血管性水腫、原發(fā)性混合性冷球蛋白血癥。第70頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo1、總補(bǔ)體和單個成分的測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫化學(xué)法分類：1.單向免疫擴(kuò)散2.火箭免疫電泳3.透射比濁法4.散射比濁法前兩種方法：手工操作繁瑣、耗時長、影響因素多、結(jié)果重復(fù)性差，已趨于淘汰。后兩種方法：通過儀器對補(bǔ)體的C3、C4、B因子等單個成分進(jìn)行自動化測定。第71頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫球蛋白G（IgG）免疫球蛋白A（IgA）免疫球蛋白M（IgM）免疫球蛋白D（IgD）免疫球蛋白E（IgE）心肌肌鈣蛋白T（cTnT）肌紅蛋白（Mb）類風(fēng)濕因子（RF）第72頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗1.低Ig血癥

（1）先天性低Ig血癥（2）獲得性低Ig血癥2.高Ig血癥

（1）非特異型多克隆免疫球蛋白增高癥（2）特異型單克隆免疫球蛋白增殖癥

第73頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗（一）血清蛋白區(qū)帶電泳M區(qū)帶的出現(xiàn)（二）免疫球蛋白定量某一類免疫球蛋白的顯著增高（三）輕鏈片段定量測定單向免疫擴(kuò)散法或ELISA（四）免疫電泳或免疫固定電泳第74頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫球蛋白G（IgG）增高：①IgG、IgA、IgM在機(jī)體的防御中發(fā)揮重要作用。若IgG、IgA、IgM幾種不同的免疫球蛋白均增高稱之為多克隆性增高，常見于各種感染，特別是慢性感染、自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、淋巴瘤、肺結(jié)核、肝臟疾病和寄生蟲病等；②單一的免疫球蛋白增高，又稱單克隆性增高，主要見于免疫增殖性疾病，如多發(fā)性骨髓瘤等。IgG降低：可見于各種先天性或獲得性體液免疫缺陷病、聯(lián)合免疫缺陷病等。第75頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫球蛋白A（IgA）增高：見于IgA型分泌型多發(fā)性骨髓瘤（MM）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肝硬化和腎臟疾病等。降低：多見于反復(fù)呼吸道感染、原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病及自身免疫性疾病等。第76頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫球蛋白M（IgM）增高：見于病毒性肝炎初期、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肝硬化等。降低：可見于IgA型多發(fā)性骨髓瘤、先天性免疫缺陷病、免疫抑制療法后、淋巴系統(tǒng)疾病和腎病綜合征等。第77頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫球蛋白D（IgD）升高：①多發(fā)性高IgD血癥：慢性感染性疾?。ńY(jié)核、麻風(fēng)、骨髓炎、化膿性皮膚?。?、惡性營養(yǎng)不良、特異反應(yīng)性疾病、部分原發(fā)性免疫缺陷癥（高IgM血癥、伴免疫球蛋白缺乏癥、IgA單獨(dú)缺乏癥）、周期性發(fā)熱（2-12年）等；②單純性高IgD血癥：IgD骨髓瘤、良性單純性免疫球蛋白血癥很少、IgD型多發(fā)性骨髓瘤等。降低：IgD缺乏的家族（常染色體異常）、IgD、IgA、IgM免疫球蛋白減少為原發(fā)性免疫功能缺陷癥（幼畜的一過性低γ-球蛋白血癥、、重癥復(fù)合性免疫功能缺陷癥（SCID）、Good綜合征，IgD顯著減少甚至消失：類肉瘤病、IgD單獨(dú)缺乏有易感的傾向等。第78頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫球蛋白E（IgE）升高：見于變態(tài)反應(yīng)性疾病、寄生蟲感染、急慢性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。特別是IgE型多發(fā)性骨髓瘤病病畜，IgE增高可作為臨床確診依據(jù)。降低：多見于先天性或獲得性丙種球蛋白缺乏癥、惡性腫瘤、長期使用免疫抑制劑等。第79頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗心肌肌鈣蛋白T（cTnT）肌鈣蛋白為近年來發(fā)現(xiàn)的心肌蛋白標(biāo)志物，具有高度心肌特異性。主要用于診斷心肌缺血性損傷，包括心絞痛、可逆性心肌組織損傷、不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗死等。第80頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo2、免疫球蛋白測定臨床免疫學(xué)檢驗肌紅蛋白（Mb）肌紅蛋白是一項出現(xiàn)早、敏感性高而非特異性的診斷指標(biāo)，對急性心肌梗死（AMI）早期診斷有一定價值。它存在于心肌和骨骼肌中，在急性心肌梗死時釋放入血，癥狀出現(xiàn)后1～3小時升高，4～12小時達(dá)到高峰，故在診斷急性心肌梗死和判斷急性心肌梗死病情方面具有主要一定的價值。（1）骨骼肌損傷：急性肌肉損傷和肌病。（2）休克。（3）急性或慢性腎衰竭。第81頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo3、免疫復(fù)合物的測定臨床免疫學(xué)檢驗免疫復(fù)合物：抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物非抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物第82頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo3、免疫復(fù)合物的測定臨床免疫學(xué)檢驗一、PEG比濁法PEG用于沉淀蛋白質(zhì)，沉淀具有可選性，對蛋白質(zhì)生物活性無影響。在pH、離子強(qiáng)度等條件固定時，蛋白質(zhì)分子量越大，用以沉淀的PEG濃度越小。分離血清免疫復(fù)合物一般采用最終濃度為3％～4％PEG(分子量6000)，對蛋白質(zhì)沉淀具有良好的選擇性。其濁度與血清中免疫復(fù)合物含量相關(guān)，用分光光度計測定其A值，以每批試驗熱聚人IgG(heatagglutionafionhumanIgG，HAHG)制備出標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得免疫復(fù)合物相對含量。第83頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo3、免疫復(fù)合物的測定臨床免疫學(xué)檢驗二、C1q固相法利用循環(huán)免疫復(fù)合物具有與C1q結(jié)合的特性，包被Clq于微量反應(yīng)板，加入待測血清，免疫復(fù)合物與C1q結(jié)合，再用標(biāo)記抗人IgG檢測免疫復(fù)合物中IgG，加底物顯色，根據(jù)顏色深淺判斷免疫復(fù)合物含量。反應(yīng)層次為C1q-免疫復(fù)合物一酶標(biāo)記抗人IgG底物。第84頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo3、免疫復(fù)合物的測定臨床免疫學(xué)檢驗三、抗C3一CIC—ELISA將抗C3抗體包被，循環(huán)免疫復(fù)合物在體內(nèi)已結(jié)合了C3，通過C3介導(dǎo)CIC與固相抗C3連接，加酶標(biāo)記抗人IgG檢測復(fù)合物中IgG，加底物顯色，根據(jù)顏色深淺判斷免疫復(fù)合物含量，反應(yīng)層次為抗c3抗體一免疫復(fù)合物一酶標(biāo)記抗人IgG抗體一底物。第85頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo3、免疫復(fù)合物的測定臨床免疫學(xué)檢驗Raji細(xì)胞法：Raji細(xì)胞是由Burkitt淋巴瘤患者分離建立的B細(xì)胞株，可在體外長期傳代。其表面有大量C3b、C1q和C3d受體，無mIg，利用這些受體與結(jié)合補(bǔ)體的循環(huán)免疫復(fù)合物結(jié)合，加入同位素標(biāo)記的抗人IgG，反應(yīng)層次為Raji細(xì)胞一循環(huán)免疫復(fù)合物一同位素標(biāo)記抗人IgG復(fù)合物。本方法敏感性較高，實(shí)用性強(qiáng)。但需培養(yǎng)Raji細(xì)胞及同位素標(biāo)記抗IgG，操作繁瑣，不易長期保持實(shí)驗結(jié)果的穩(wěn)定。第86頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo3、免疫復(fù)合物的測定臨床免疫學(xué)檢驗評價：①高度敏感性；②簡便可作常規(guī)應(yīng)用；③相對特異性，能檢出各種抗體類型和分子大小的循環(huán)免疫復(fù)合物；④重復(fù)性好；⑤試驗前不需對標(biāo)本進(jìn)行滅活或特殊處理。檢測循環(huán)免疫復(fù)合物的方法雖有幾十種，但仍沒有一種能具備上述所有特點(diǎn)。所以各種方法只能檢測某一類或某個范圍的免疫復(fù)合物；不同方法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物原理各異。第87頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo4、自身抗體的檢測臨床免疫學(xué)檢驗（一）抗核抗體（antinuclearantibody，ANA（二）抗ENA抗體譜（三）類風(fēng)濕因子（rheumatoidfactor，RF）（四）其他自身抗體第88頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo4、自身抗體的檢測臨床免疫學(xué)檢驗（一）ANA的檢測方法間接免疫熒光法用小鼠肝切片或印片作為細(xì)胞核基質(zhì)，還可用核質(zhì)豐富的培養(yǎng)細(xì)胞如Hep-2，作為抗原。用熒光顯微鏡觀察ANA熒光著染強(qiáng)度和免疫熒光圖形。稀釋待檢血清可檢測ANA效價。第89頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo4、自身抗體的檢測臨床免疫學(xué)檢驗（二）抗ENA抗體譜的檢測方法雙向免疫擴(kuò)散對流免疫電泳斑點(diǎn)酶免疫技術(shù)免疫印跡技術(shù)第90頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo4、自身抗體的檢測臨床免疫學(xué)檢驗（三）類風(fēng)濕因的檢測方法RF的檢測最常用IgG致敏的膠乳顆粒凝集試驗，或速度散射比濁法，但只能檢測IgM類的RF。IgG類，IgA類和IgE類RF需ELISA等方法檢測第91頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo5、腫瘤免疫學(xué)檢查臨床免疫學(xué)檢驗?zāi)[瘤標(biāo)志物檢測放射免疫測定法（RIA）酶免疫測定法（EIA）熒光免疫測定法（FEIA）時間分辨熒光分析法化學(xué)發(fā)光法電化學(xué)發(fā)光法酶免疫測定法（EIA）第92頁,共104頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogoContents概述1臨床生化檢查2臨床免疫學(xué)及血清學(xué)檢查3