3.2基因工程的基本操作程序課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修34

3.2基因工程的基本操作程序本節(jié)聚焦:1.基因工程的基本操作程序主要包括哪幾個(gè)步驟？2.基因工程操作的每一步涉及的技術(shù)和方法有哪些？基因表達(dá)載體

我國(guó)是棉花的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)。棉花在種植的過(guò)程中，常常會(huì)受到一些害蟲(chóng)的侵襲，其中以棉鈴蟲(chóng)最為常見(jiàn)。棉鈴蟲(chóng)可以使棉花產(chǎn)量減少三分之一，嚴(yán)重時(shí)，甚至能使一片棉田絕收。大量施用農(nóng)藥殺蟲(chóng)，不僅會(huì)提高生產(chǎn)成本，還可能造成農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境的污染。P76轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉(使棉鈴蟲(chóng)死亡，左）與非轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉（右）

科學(xué)家將蘇云金桿菌的“殺蟲(chóng)基因”——Bt抗蟲(chóng)蛋白基因轉(zhuǎn)到棉花里，讓棉花也能產(chǎn)生Bt抗蟲(chóng)蛋白（蘇云金桿菌伴胞晶體蛋白）——破壞鱗翅目昆蟲(chóng)的消化系統(tǒng)來(lái)殺死棉鈴蟲(chóng)。

從社會(huì)中來(lái)

1997年，我國(guó)政府首次批準(zhǔn)商業(yè)化種植轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉。到2015年，我國(guó)已育成轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉新品種100多個(gè)，減少農(nóng)藥用量40萬(wàn)噸，增收節(jié)支社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益450億元。你知道轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉抗蟲(chóng)的機(jī)制是什么嗎？P76蘇云金桿菌與載體拼接普通棉花（無(wú)抗蟲(chóng)特性）棉花細(xì)胞抗蟲(chóng)棉提取導(dǎo)入抗蟲(chóng)基因（Bt抗蟲(chóng)蛋白基因）重組DNA分子培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的簡(jiǎn)要過(guò)程1.目的基因的篩選與獲取2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.目的基因的

檢測(cè)與鑒定實(shí)例：具體的步驟是？(含抗蟲(chóng)基因）（含有并表達(dá)抗蟲(chóng)基因）一目的基因的篩選和獲取1.目的基因

在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因，就是目的基因。根據(jù)不同的需要，目的基因不同，主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因。如：與生物抗逆性、優(yōu)良品質(zhì)、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相關(guān)的基因。資料：蘇云金桿菌通過(guò)產(chǎn)生蘇云金桿菌伴胞晶體蛋白（Bt抗蟲(chóng)蛋白），破壞鱗翅目昆蟲(chóng)的消化系統(tǒng)來(lái)殺死棉鈴蟲(chóng)?？茖W(xué)家將“殺蟲(chóng)基因”轉(zhuǎn)入棉花中，棉花產(chǎn)生Bt抗蟲(chóng)蛋白抵抗蟲(chóng)害。目的基因也可以是具有調(diào)控作用的因子。一目的基因的篩選和獲取2.目的基因篩選方法：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，以及序列數(shù)據(jù)庫(kù)、序列比對(duì)工具等的應(yīng)用，越來(lái)越多的基因的

為人們所知。結(jié)構(gòu)和功能DNA測(cè)序儀核苷酸序列比對(duì)氨基酸序列比對(duì)一目的基因的篩選和獲取3.目的基因的獲取?獲取目的基因的方法：①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲?、谌斯ず铣散劾肞CR獲取和擴(kuò)增目的基因前提：方法：DNA合成儀基因比較小、核苷酸序列已知通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成PCR——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR是一項(xiàng)根據(jù)

的原理，在

提供參與DNA復(fù)制的

與

，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。DNA半保留復(fù)制體外各種組分反應(yīng)條件聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNA半保留復(fù)制體外（PCR擴(kuò)增儀/PCR儀）對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因全稱原理操作環(huán)境目的優(yōu)點(diǎn)PCR技術(shù)一目的基因的篩選和獲取PCR擴(kuò)增儀控制溫度解旋酶DNA聚合酶▲子鏈的延伸方向：模板：原料：能量：酶：DNA的兩條母鏈4種游離的脫氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶復(fù)制特點(diǎn):①邊解旋邊復(fù)制②半保留復(fù)制堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（保證復(fù)制的準(zhǔn)確進(jìn)行）要點(diǎn)回顧:體內(nèi)DNA復(fù)制條件5'端→3'端復(fù)制原則:

因?yàn)镈NA聚合酶只能從5'端向3'端延伸子鏈。DNA復(fù)制所需的基本條件:參與的組分在DNA復(fù)制中的作用解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物提供DNA復(fù)制的模板合成DNA子鏈的原料打開(kāi)DNA雙鏈催化合成DNA子鏈?zhǔn)笵NA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始連接脫氧核苷酸（PCR用耐高溫的DNA聚合酶）（PCR用高溫代替）（PCR的引物2種）引物是一小段能與

的一段堿基序列__________的____________DNA母鏈互補(bǔ)配對(duì)短單鏈核酸3’5’DNA母鏈3’5’引物3’5’引物3’5’DNA母鏈（通常20-30個(gè)核苷酸）PCR技術(shù)耐高溫的DNA聚合酶DNA模板引物緩沖溶液四種脫氧核苷酸PCR擴(kuò)增儀（PCR儀）條件:微量離心管——控制溫度（dNTP）（2種）一般添加Mg2+（激活真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶）PCR的條件：目的基因DNA（模板）、四種游離的脫氧核苷酸、耐高溫DNA聚合酶、引物、一定的緩沖溶液(維持反應(yīng)體系的pH）、Mg2+（激活DNA聚合酶的活性）、控制溫度變化PCR技術(shù)基本過(guò)程3’5’3’5’3’5’3’5’A.變性

當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈B.復(fù)性（退火）當(dāng)溫度下降到50℃左右時(shí)，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合C.延伸當(dāng)溫度上升到72℃左右時(shí)，溶液中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’變性復(fù)性延伸

PCR技術(shù)第一輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第二輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過(guò)變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第二輪循環(huán)的產(chǎn)物；第二輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第三輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過(guò)變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第三輪的產(chǎn)物；第二輪循環(huán)的產(chǎn)物第三輪循環(huán)的產(chǎn)物完成后，常采用

來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。瓊脂糖凝膠電泳PCR技術(shù)擴(kuò)增結(jié)果：以指數(shù)形式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）2n（1）若開(kāi)始只有一個(gè)DNA提供模板，則循環(huán)n次后獲得的子代DNA數(shù)目為

個(gè)。（2）若開(kāi)始有N個(gè)DNA提供模板，則循環(huán)n次后獲得的子代DNA數(shù)目為

個(gè)。2nN?2n變性90℃以上延伸72℃左右復(fù)性50℃左右基本過(guò)程DNA復(fù)制PCR技術(shù)場(chǎng)所遵循原則條件解旋方式酶特點(diǎn)結(jié)果PCR技術(shù)vsDNA復(fù)制堿基互補(bǔ)配對(duì)原則堿基互補(bǔ)配對(duì)原則模板、4種脫氧核苷酸、酶、能量、引物模板、4種脫氧核苷酸、酶、能量、引物(2種）DNA在高溫下熱變性解旋解旋酶催化半保留復(fù)制、邊解旋邊復(fù)制半保留復(fù)制、全解旋再?gòu)?fù)制體外復(fù)制細(xì)胞內(nèi)（主要在細(xì)胞核內(nèi)）大量的DNA片段形成整個(gè)DNA分子耐高溫的DNA聚合酶解旋酶、DNA聚合酶等DNA連接酶①全稱：②操作環(huán)境：③原理：④前提：⑤條件：⑥過(guò)程：⑦優(yōu)點(diǎn)：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外（PCR擴(kuò)增儀/PCR儀）可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因（以指數(shù)形式擴(kuò)增）DNA半保留復(fù)制已知目的基因的一段核苷酸序列（為了合成引物）模板DNA、4種游離脫氧核苷酸、引物（1對(duì)）、耐高溫的DNA聚合酶變性：復(fù)性：延伸：DNA解鏈（超過(guò)90℃）引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈（50℃左右）Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成（72℃左右）模板、原料、引物、酶、能量（dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP）（本質(zhì)？如何合成？）引物是一小段核酸，能與DNA母鏈的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)。通常20-30個(gè)核苷酸，人工合成回顧：PCR技術(shù)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（1）引物是一小段能與

的短單鏈核酸，通常為20-30個(gè)核苷酸。DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)（2）在DNA聚合酶的作用下，兩條子鏈的延伸方向都是

。引物與目的基因模板鏈的

端結(jié)合。從子鏈的5′端向3′端延伸3′【拓展練習(xí)】1．PCR反應(yīng)與體內(nèi)DNA復(fù)制的引物在化學(xué)本質(zhì)上是否相同？不相同。但PCR反應(yīng)時(shí)所用引物是人工加入的一小段DNA

體內(nèi)DNA復(fù)制所需引物為RNA聚合酶合成的一小段RNA

思考討論：2．PCR過(guò)程中需要加入兩種引物，原因是？3．兩種引物的要求？（理解）DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，不能從頭合成，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時(shí)被擴(kuò)增。①引物自身不能環(huán)化②兩種引物之間不能互補(bǔ)配對(duì)③引物長(zhǎng)度不宜過(guò)短，防止引物隨機(jī)結(jié)合PCR技術(shù)用PCR可以擴(kuò)增mRNA嗎？mRNA不可以直接擴(kuò)增，需要將它逆轉(zhuǎn)錄成cDNA再進(jìn)行擴(kuò)增。1.逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的DNA鏈，形成RNA-DNA雜交分子；2.核酸酶H降解RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈，使之變成單鏈DNA；3.以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的DNA鏈，形成雙鏈DNA分子，即cDNA過(guò)程基因表達(dá)載體的構(gòu)建二基因表達(dá)載體構(gòu)建模式圖基因表達(dá)載體重組DNA分子目的基因DNA限制酶限制酶DNA連接酶載體②能自我復(fù)制①有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)③具有標(biāo)記基因載體應(yīng)具備條件：限制酶切割位點(diǎn)標(biāo)記基因復(fù)制原點(diǎn)基因表達(dá)載體中還應(yīng)存在那些結(jié)構(gòu)？載體的種類：質(zhì)粒（常用）、噬菌體、動(dòng)植物病毒①

;②

?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建二——核心步驟基因表達(dá)載體由哪些部分組成啟動(dòng)子：位于基因上游的一段有特殊序列的DNA片段RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄。終止子：位于基因上游的一段有特殊序列的DNA片段終止轉(zhuǎn)錄1.目的使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用2.組成標(biāo)記基因：目的基因：復(fù)制原點(diǎn)：鑒別或篩選含有重組DNA分子的受體細(xì)胞注意：目的基因必須插入到

與

之間。啟動(dòng)子終止子DNA復(fù)制的起始位點(diǎn)。化學(xué)本質(zhì)基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子、終止子的來(lái)源：①如果目的基因是從自然界中已有的物種中分離出來(lái)的，已含有啟動(dòng)子、終止子，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不需要在質(zhì)粒上接上特定的啟動(dòng)子、終止子。②如果目的基因是通過(guò)人工方法合成的，或是cDNA，則目的基因是不含啟動(dòng)子和終止子的。因此，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要在目的基因的前后端接上特定的啟動(dòng)子、終止子。重組DNA分子限制酶目的基因限制酶切割位點(diǎn)獲取目的基因DNA連接酶基因表達(dá)載體構(gòu)建模式圖限制酶啟動(dòng)子限制酶切割位點(diǎn)終止子標(biāo)記基因復(fù)制原點(diǎn)質(zhì)粒同種限制酶或能產(chǎn)生相同末端的限制酶？基因表達(dá)載體的構(gòu)建二——核心步驟基因表達(dá)載體構(gòu)建模式圖基因表達(dá)載體3.過(guò)程培育抗蟲(chóng)棉的簡(jiǎn)要過(guò)程載體自身環(huán)化片段間的連接目的基因自身環(huán)化質(zhì)粒自身環(huán)化目的基因與質(zhì)粒連接目的基因與目的基因連接質(zhì)粒與質(zhì)粒連接正向連接

反向連接目的基因11’22’122’1’22’1’1如何解決這一問(wèn)題？單酶切缺點(diǎn)：

思考：如果用同一種限制酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶處理后會(huì)出現(xiàn)幾種產(chǎn)物？(只考慮兩兩結(jié)合)①質(zhì)粒、目的基因自身環(huán)化；②質(zhì)粒與目的基因反向連接雙酶切！3種旁欄思考題2.將生物的所有DNA直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡(jiǎn)便嗎？如果這么做，效果會(huì)怎樣？

有人采用總DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個(gè)生物的總DNA提取出來(lái)，花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒(méi)有進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建。這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣也無(wú)法確定哪些基因?qū)肓耸荏w植物。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（常用）基因槍法（單子葉植物常用）花粉管通道法2.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法：

——顯微注射法——Ca2+轉(zhuǎn)化法（我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)）1.轉(zhuǎn)化的概念：

目的基因進(jìn)入_________內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)_____和_____的過(guò)程。受體細(xì)胞維持穩(wěn)定表達(dá)花粉管通道法（我國(guó)獨(dú)創(chuàng)）②在植物授粉后一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液(含目的基因）滴在花柱切面，使目的基因通過(guò)花粉管通道進(jìn)入胚囊。①用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過(guò)花柱直通胚囊。簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，但要求花朵較大方法：實(shí)例：優(yōu)缺點(diǎn)：我國(guó)“轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉”農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（常用）

能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力。隨著轉(zhuǎn)化方法的突破，用農(nóng)桿菌侵染水稻、玉米等多種

植物也取得了成功。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有

，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞時(shí)，Ti質(zhì)粒的

可轉(zhuǎn)移至被侵染的細(xì)胞，并整合到該細(xì)胞的

。2.轉(zhuǎn)化原理：1.農(nóng)桿菌的特點(diǎn)：T-DNATi質(zhì)粒大型環(huán)狀DNA農(nóng)桿菌T-DNA染色體DNA上單子葉Ti質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，目的基因該插到Ti質(zhì)粒哪里？T—DNA上Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞目的基因插入植物細(xì)胞染色體DNA上表達(dá)新性狀轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（常用）3.過(guò)程：植物組織培養(yǎng)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的兩次拼接和兩次導(dǎo)入①兩次拼接:第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上。

第二次拼接(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA被拼接到受體細(xì)胞的

染色體DNA上。②兩次導(dǎo)入:第一次導(dǎo)入是將含目的基因的Ti質(zhì)粒重新導(dǎo)入農(nóng)桿菌。

第二次導(dǎo)入(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。1.顯微注射法科學(xué)家用病毒DNA與目的基因一起構(gòu)建的載體，去感染受體動(dòng)物細(xì)胞，也能使目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞內(nèi)，如腺病毒載體等。2.病毒侵染法導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞——顯微注射法將含目的基因的表達(dá)載體提純受精卵顯微注射含目的基因的受精卵具有新性狀的動(dòng)物雌性動(dòng)物輸卵管或子宮胚胎移植早期胚胎

細(xì)胞

處理大腸桿細(xì)胞

Ca2+感受態(tài)

與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞吸收DNA分子基因表達(dá)載體使細(xì)胞處于一種能夠吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的生理狀態(tài)。注：原核生物作為受體細(xì)胞產(chǎn)生的真核生物的蛋白質(zhì)通常沒(méi)有生物活性，需要在體外進(jìn)行再加工。導(dǎo)入微生物細(xì)胞——Ca2+轉(zhuǎn)化法增加細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性因?yàn)闆](méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)一步加工。四目的基因的檢測(cè)與鑒定①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——“抗原—抗體雜交技術(shù)”2.個(gè)體生物學(xué)水平鑒定1.分子水平檢測(cè)抗性檢測(cè)：功能活性比較：PCR技術(shù)

或分子雜交技術(shù)——檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞中是否穩(wěn)定維持和表達(dá)——檢測(cè)目的基因的表達(dá)產(chǎn)物抗蟲(chóng)、抗病接種實(shí)驗(yàn)；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能活性比較利用專一性——檢測(cè)是否具有抗性以及抗性強(qiáng)度等方法如：胰島素注射到糖尿病模型小鼠①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因方法1：PCR擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因生物提取DNADNA作為模板PCR操作M：marker；1-陽(yáng)性質(zhì)粒；2：原始品系；3-9轉(zhuǎn)Bt品系；轉(zhuǎn)Bt基因品系PCR瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果DNA半保留復(fù)制原理：四目的基因的檢測(cè)與鑒定是否擴(kuò)增出目的基因以“抗蟲(chóng)棉”為例（含Bt抗蟲(chóng)蛋白基因）電泳操作

引物如何設(shè)定？原因：帶標(biāo)記的基因探針，與目的基因DNA單鏈在一定條件下互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成雙鏈，從而出現(xiàn)雜交帶。四目的基因的檢測(cè)與鑒定①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因酶切轉(zhuǎn)膜標(biāo)記的DNA/RNA探針DNA分子雜交（Southern-blot)流程圖以“抗蟲(chóng)棉”為例（含Bt抗蟲(chóng)蛋白基因）方法2：

DNA分子雜交技術(shù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理：②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA方法：PCR擴(kuò)增或分子雜交技術(shù)轉(zhuǎn)基因生物提取RNARNA作為模板PCR操作電泳是否擴(kuò)增出目的基因逆轉(zhuǎn)錄cDNA四目的基因的檢測(cè)與鑒定提取RNA轉(zhuǎn)膜標(biāo)記的DNA/RNA探針RNARNA分子雜交(NorthernBlot)流程圖以“抗蟲(chóng)棉”為例（含Bt抗蟲(chóng)蛋白基因）③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法：

抗原與抗體的特異性結(jié)合原理：蘇云金芽孢桿菌提取Bt抗蟲(chóng)蛋白注射小鼠體內(nèi)抗體標(biāo)記抗體提取蛋白電泳分離抗原抗體雜交轉(zhuǎn)基因生物四目的基因的檢測(cè)與鑒定放射性檢測(cè)

（雜交帶）以“抗蟲(chóng)棉”為例（含Bt抗蟲(chóng)蛋白基因）過(guò)程：提取轉(zhuǎn)基因植物的蛋白質(zhì)+相應(yīng)抗體→是否出現(xiàn)雜交帶抗原—抗體雜交技術(shù)2.個(gè)體生物學(xué)水平鑒定沒(méi)有抗蟲(chóng)基因的棉花植株有抗蟲(chóng)基因的棉花植株棉鈴蟲(chóng)沒(méi)有死亡棉鈴蟲(chóng)死亡接種棉鈴蟲(chóng)四目的基因的檢測(cè)與鑒定以“抗蟲(chóng)棉”為例（含Bt抗蟲(chóng)蛋白基因）轉(zhuǎn)Bt基因非轉(zhuǎn)基因四目的基因的檢測(cè)與