蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)

蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第1頁1、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)熟悉蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)深入掌握蛋白質(zhì)性質(zhì)蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第2頁2、試驗(yàn)難點(diǎn)與重點(diǎn)2.1蛋白質(zhì)沉淀方法有哪些2.2蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)原理蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第3頁3、試驗(yàn)原理蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定原因:水化膜、表面電荷加入適當(dāng)試劑使蛋白質(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失去水化層，或者與一些試劑結(jié)合成不解鹽后，蛋白質(zhì)膠體溶液就不穩(wěn)定，并將產(chǎn)生沉淀。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第4頁改變蛋白質(zhì)表面水化層及電荷主要路徑有：改變?nèi)芤弘x子強(qiáng)度改變?nèi)芤簆H改變?nèi)芤航殡姵?shù)改變?nèi)芤簻囟鹊鞍踪|(zhì)沉淀可逆與不可逆區(qū)分蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第5頁能使蛋白質(zhì)沉淀試劑有：高濃度中性鹽

（NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl（中和蛋白質(zhì)電荷，可逆）這種加入鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出現(xiàn)象稱為鹽析，用于蛋白質(zhì)分離制備有機(jī)溶劑

丙酮、乙醇

(破壞蛋白質(zhì)水膜，用于在提取DNA等時(shí)去除蛋白質(zhì)，冰浴條件沉淀蛋白質(zhì)短時(shí)間內(nèi)是可逆，不然不可逆)重金屬鹽

Hg2+、Ag+、Pb+（與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電荷時(shí)，形成不易溶解鹽,或改變蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)）生物堿試劑沉淀：三氯乙酸，苦味酸，鎢酸等（必須在溶液pH大于pI時(shí)，蛋白質(zhì)帶正電荷，能夠與生物堿試劑結(jié)合）加熱變性沉淀：豆腐等電點(diǎn)沉淀：Glu生產(chǎn)蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第6頁4、試驗(yàn)步驟蛋白質(zhì)溶液1mlNaCl晶體少許，溶解，95%乙醇2ml加入混勻觀察沉淀產(chǎn)生加水沉淀是否溶解？需要先加蛋白質(zhì)溶液，再加飽和硫酸銨，不然清蛋白與球蛋白會(huì)同時(shí)析出除去球蛋白加多變成鹽析，作用中和電荷，加速沉淀蛋白質(zhì)溶液5ml加入5ml飽和硫酸銨溶液加入微微搖動(dòng)，靜置數(shù)分鐘觀察沉淀產(chǎn)生為球蛋白過濾濾液中加硫酸銨粉末析出清蛋白，加水沉淀是否溶解？操作注意點(diǎn)：如加入硫酸銨粉沫過量，會(huì)有硫酸銨晶體出現(xiàn)，要與蛋白質(zhì)沉淀區(qū)分開來。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第7頁蛋白質(zhì)溶液2ml加入1%醋酸4-5滴，加入5%鞣酸數(shù)滴加入混勻沉淀？加水沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)溶液2ml加入1%醋酸4-5滴，加入飽和苦味酸數(shù)滴加入混勻沉淀？加水沉淀是否溶解？pH大于pIpH小于pI時(shí)帶正電荷蛋白質(zhì)溶液2ml加入1%醋酸鉛，至有沉淀出現(xiàn)加入加水沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)溶液2ml加入1%硫酸酮，至有沉淀出現(xiàn)加入加水沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第8頁5、原始數(shù)據(jù)管號(hào)123456是否產(chǎn)生沉淀沉淀是否能溶解蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第9頁6、問題6.1、蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀主要原因是什么？何謂可逆沉淀和