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文檔簡介
核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第1頁第一節(jié)示蹤原理及特點一、定義:示蹤劑→吸收、分布、排泄、研究轉(zhuǎn)移規(guī)律及研究疾病、診療一門科學。示蹤技術(shù)處理實際問題,不能取代特點:引入物不能太多……太小……示蹤技術(shù)發(fā)展過程:二、基礎(chǔ)原理:Tracer與未標識時化學、生物學性質(zhì)相同,利用放射性可測量進行示蹤物跟綜研究(位置、數(shù)量、轉(zhuǎn)變)。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第2頁三、示蹤研究特點:1、靈敏度高,可達10-14-----10-18g2、測定方法簡單、不用分離,提純……3、合乎生理條件4、可定位研究和定量研究5、可動態(tài)研究,對數(shù)據(jù)做動態(tài)分析6、標識分子易分辨(新舊分子判別)7、非創(chuàng)傷性四、常見試驗類型:離體示蹤整體示蹤單標或多標示蹤核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第3頁1、選擇試驗類型幾個標準
a.吸收、分布、轉(zhuǎn)運、排泄等用整體示蹤實驗;
b.研究物質(zhì)在精細結(jié)構(gòu)中運動規(guī)律,可選離體試驗,但結(jié)果須有整體試驗驗證;
c.物質(zhì)轉(zhuǎn)化研究,離體、整體都得做;
d.單用離體試驗有時可能得犯錯誤結(jié)論。五、示蹤試驗應(yīng)注意問題(八個)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第4頁2、示蹤物選擇應(yīng)考慮問題1)射線類型:γ、β(中能、低能……)2)T1/2:3)放化純:>95%4)比活度:要適當5)標識位置選擇要依據(jù)試驗來定6)標識物穩(wěn)定性、價格7)載體量大?。狠d體指與放素化學狀態(tài)相同穩(wěn)定同位素、如51Cr中混有Cr、穩(wěn)定性Cr就是戴體。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第5頁3、示蹤量估算:
預(yù)試驗或前人經(jīng)驗,應(yīng)注意人體內(nèi)稀釋、組織內(nèi)濃聚及對動物健康影響
辦法:查文件+預(yù)試驗+確定儀器效率核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第6頁4、示蹤引入路徑:口服、灌胃v、m、皮下、腹腔。5、樣品制備要有利于定量、定位測量、測量方法確定后,要考慮樣品容量,測量時間等問題。6、數(shù)據(jù)處理:依據(jù)不一樣試驗?zāi)繕?,選擇適當參數(shù)。7、動物試驗:適當動物,包含大小、動物特征、防護、尸體處理。8、短半衰期核素要考慮衰變校正核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第7頁六、示蹤試驗中同位素效應(yīng)
1、同位素效應(yīng):不一樣同位素之間原子質(zhì)量差異較大,因而它們參予同一化學反應(yīng)速度不一樣稱之。如:1H(p)e(周期表中H)
2H(n、p)e
3H(2n、p)e
表示方法:以同位素間參加化學反應(yīng)速率常數(shù)比值來表示,如KH/KTKH/KD
氫同位素表示法核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第8頁2、同位素效應(yīng)分類:
1)初級同位素效應(yīng):與放素連接化學健對速度影響(主鍵)
2)次級同位素效應(yīng):與放素相鄰化學健對速度影響(次?。?/p>
3)溶劑同位素效應(yīng):溶劑中某原子被同位素取代而影響溶質(zhì)反應(yīng)速度,如普通化學反應(yīng)在水中,若改為氘水,對反應(yīng)速度影響。
4)物質(zhì)體系同位素效應(yīng):進入體內(nèi)后對生化反應(yīng)速度影響,如H2O改為2H2O喂養(yǎng)動物對生化反應(yīng)影響。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第9頁
核素稀釋法核素稀釋法測物質(zhì)含量原理:稀釋前后放素量不變。(忽略衰變、排泄等原因)
1、測血容量或體液含量:Cl和Br放射性同位素主要在細胞外液分布,進入細胞極少。如用82Br引入體液中,引入總活度為A(β-),待一定時間混勻后,抽取少許體液測得比放為q/ml,則體液量等于A/q(ml),即
C1V1=C2(V1+VX)
核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第10頁2、測Rbc壽命或其它細胞壽命取Rbc與Na51CrO4混合,淋洗后Rbc即被標上,引入體內(nèi)不一樣時間測放,研究其壽命。另一個方法:15N—甘氨酸引入血液,Rbc合成時攝取15N—AA,所以新生成Rbc含有放射性,30天左右15NRbc達高峰,而且保持一定時間恒定,最終15NRbc逐步死亡而放射性下降,可算得Rbc壽命。同理,該法可研究Wbc、腫瘤細胞等。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第11頁
原理:將已知比活度標識物與非標識物混合,測出混合物比活度,可求出非標識物含量。(混合前后放射性不變原理)設(shè):已知標識物量為m1,比活度為S1(dpm/mg)混合物測得比活度為S2(dpm/mg),求混合物中非標識物化學量mx
據(jù)混合前后放射性不變原理得
S1m1=S2(m1+mx)Mx=m1(s1/s2—1)舉例:134(參考試驗核醫(yī)學與核藥學,胡亞兒、劉長征等主編)3、正稀釋法測物質(zhì)含量核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第12頁4、反稀釋法:用已知非標識物測標識物含量。原理:同3(135)設(shè):已知非標識物量為m2
已知標識物比活度為S1
混合后測得比活度為S2
求標識物化學量mx
據(jù)原理得:S1mx=S2(m2+mx)m2S2mx=--------------S1—S2核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第13頁5、核素雙稀釋法(參考)設(shè)取兩份待測放射性樣品,這兩份放射性相等。分別加入非標識已知m1
和m2混合,取出少許提純,測得比活度為S1;S2得:S1(m1+mX)=S2(m2+mX)
S2m2—S1m1mX=-------------------S1—S2核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第14頁
一、參入試驗:目標是搞清楚體內(nèi)一些物質(zhì)如前身物、反應(yīng)產(chǎn)物、中間代謝步驟及轉(zhuǎn)化條件。
1、參入試驗類型:整體+離體整體參入試驗:如3H-TdR證實TdR是DNA合成前體物離體參入試驗:含有生理活性生物材料,如組織切片、組織勻漿、游離細胞、亞細胞顆粒等,將標識物加入,以證實試驗可能性,但做結(jié)論要有整體試驗驗證才可靠。第三節(jié)物質(zhì)轉(zhuǎn)化示蹤核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第15頁2、主要參數(shù)
產(chǎn)物總放參入百分率=---------------×100%
前身物總放產(chǎn)物比活度相對比活度=------------------
(參入率)前身物比活度核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第16頁
①淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗試驗設(shè)計原理(細胞培養(yǎng)):
DNA子代細胞(子代細胞含有放射性)
DNA子代細胞植物血凝素淋巴細胞PHA淋巴母細胞(能分裂繁殖)3H-TdR培養(yǎng)72hr3、參入試驗舉例應(yīng)用核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第17頁用3H-TdR參入淋巴細胞量(即Lim中放射性強弱)反應(yīng)出淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力。應(yīng)用:
反應(yīng)細胞免疫狀態(tài)反應(yīng)細胞增殖速度試驗結(jié)果表示形式:參入百分率百萬細胞DNA計數(shù)=cpm/106cell
試驗組DNA放射性刺激指數(shù)=--------------------------------
對照組DNA放射性核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第18頁②證實甘氨酸是血紅素前體物(設(shè)計原理)理論推測可能前身物有5種,分別為甘氨酸、檸檬酸胺、DL-谷氨酸、DL-脯AA、DL-亮AA,分別用放素標識后引入細胞培養(yǎng),最終測定合成Rbc放射性,證實甘氨酸是其前體物。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第19頁4、代謝物轉(zhuǎn)化參入試驗舉例:將蛋AA中甲基CH3用C2H3置換標識,得到標識物為氘標識蛋AA,做整體參入試驗,其合成肌酸中含有可測氘,說明肌酸中甲基是由蛋AA轉(zhuǎn)過來。5、參入競爭抑制試驗原理:類似于RIA
標識前身物和非標識前身物+參入試驗中,與單獨用標識前身參入試驗結(jié)果放射性不一樣。深入證實參入試驗。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第20頁二、雙標識參入試驗原理將待研究前身物用兩種不一樣核素(如放一放,穩(wěn)—放)標識,測定計算待示蹤物中兩種核素活度比值。并將試驗結(jié)果比值與該比值做比較,兩比值應(yīng)保持(大致)不變。
核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第21頁舉例(1)證實肌酸或腎上腺素合成過程中,甲基轉(zhuǎn)移為整體轉(zhuǎn)移,而不是分解后重新形成。將甲基用雙標識標上,測出該甲基兩種核素比值,即可確定。(2)證實生物堿Elymoclavine前身物N2-甲基色AA是非完整基團參入到產(chǎn)物中去。將前身物用14C和3H雙標識,并測兩放比值,引入試驗后測產(chǎn)物兩放比值,發(fā)覺產(chǎn)物兩放比值顯著降低,證實了試驗構(gòu)想。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第22頁第四節(jié)物質(zhì)吸收、分布、排泄示蹤一、吸收示蹤1、吸收百分率測定:該技術(shù)尤其對一些藥品吸收研究有用,將該藥標識后口服或灌胃,然后搜集類便測放射性,若吸收入血再排入消化道量忽略不計,(如龍膽紫)測:
攝入量—糞例殘余量吸收率=------------------
攝入量
應(yīng)用:研究某藥品吸收情況或一些疾病會使胃腸道吸收率大大下降。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第23頁2、生物利用度
絕對利用度:將相同劑量同一示蹤物分別V和口服,不一樣時間取血測放射性,得下列圖(143):對兩曲線下面積分別積分叫做AUC
口服AUC
絕對利用度=-------------------×100%
靜注AUC
利用核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第24頁相對利用度指用二種不一樣口服方案,其差異能夠是不一樣劑型,或加某一輔助因子,得到下面圖型:口服但改變劑型AUC2AUC1
AUC1相對利用度=-----------AUC2應(yīng)用:臨床、藥理、預(yù)防醫(yī)學核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第25頁二、吸收時化學形態(tài)示蹤研究
內(nèi)容:確定一些復(fù)雜有機物在消化道中經(jīng)降解后以什么化學形態(tài)被吸收。P1441、單標識示蹤
如用14C標識游離脂肪酸經(jīng)胃腸道發(fā)覺長鏈脂肪酸70~90%以甘油三酯形式出現(xiàn)在淋巴液中,而短鏈者以游離酸形式出現(xiàn)在門脈血中說明腸道可吸收游離脂肪酸,長鏈者要在腸壁重新形成甘油三酯入淋巴液,短鏈可直接進入血循環(huán)。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第26頁2、雙標識示蹤:將示蹤物在二個不一樣部位標上二種不一樣放素,口服后追綜二種標識去向。如在膽固醇酯7a位標上3H,在脂肪酸羧基位上用14C標識,口服后搜集胸導管淋巴液,分別測二個放素、結(jié)果見表。
核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第27頁表3H14C雙標識示蹤淋巴液分析----------------------------------------------------------------------------------------
3H14C3H/14C
----------------------------------------------------------------------------------------回收7.3260.29膽固醇30.1膽固醇酯69.91.2甘油三酯93.4磷酯5.4------------------------------------------------------------------核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第28頁結(jié)論:膽固醇吸收與脂肪酸吸收不一樣,脂肪酸主要出現(xiàn)在甘油三酯中,膽固醇酯在腸道先水解為游離膽固醇和脂肪酸,然后才吸收,進而再參入新成份。膽固醇合成近40步反應(yīng)幾乎每一步都是用示蹤試驗說明。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第29頁
研究某物質(zhì)在何部位吸收入血循環(huán)、能區(qū)分內(nèi)源性與外源性物質(zhì)標識物。
1、將感興趣腸段切下來,翻過來結(jié)扎,泡在示蹤溶液中,看進入腸袋內(nèi)示蹤物,研究示蹤物吸收率,叫離體腸段試驗。
2、動物口服示蹤物、不一樣時間處死動物、分離腸段內(nèi)容物、測放,研究不一樣腸段吸收特征。
3、口服示蹤物后觀察消化道壁內(nèi)示蹤物含量改變、研究吸收效果最正確腸段區(qū)域。
4、將示蹤物引入特定部位、如呼吸道、直腸、舌下等,觀察血液中示蹤情況。三、吸收部位示蹤研究核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第30頁四、物質(zhì)分布與轉(zhuǎn)運示蹤研究物質(zhì)在體內(nèi)處于不停更新動態(tài)平衡中、分布和轉(zhuǎn)運有其規(guī)律性,但病理情況下這些規(guī)律破壞。動態(tài)觀察宏觀水平細胞水平亞細胞水平試驗步驟:分子水平
1、購置或標識示蹤物并引入動物體內(nèi)
2、測量+ARG觀察示蹤物分布
3、選擇參數(shù),擬合數(shù)據(jù)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第31頁應(yīng)用舉例:
1、濃集區(qū)域確實定:如氟烷麻醉劑:用14C標識后引入動物、發(fā)覺放射性主要在大腦和小腦白質(zhì),所以起全麻作用。
2、乙酰唑胺利尿作用,口服有NS副作用,35S標識后引入動物體內(nèi)發(fā)覺在下丘腦、海馬等部位有濃集。
3、魚腥草可治療支氣管炎,標識后引入體內(nèi)發(fā)覺支氣管組織有較高濃集。
核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第32頁4、青蒿素可治療瘧疾,用3H—青蒿素引入感染瘧疾動物體內(nèi)發(fā)覺放射性在感染Rbc中,深入定位在瘧原蟲質(zhì)膜和食物泡。
5、碩士理性物質(zhì)在體內(nèi)分布示蹤試驗,如骨鈣代謝與老年人關(guān)系。
6、特定標識物示蹤試驗:如probe、標識單抗、標識互補DNA或RNA,標識受體配基等進行原位雜交、放免顯象、RBA、ARG分析。
7、碩士理物質(zhì)在體內(nèi)轉(zhuǎn)運示蹤試驗核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第33頁
如一些激素進入血液后與運載蛋白結(jié)合進行轉(zhuǎn)運、可經(jīng)過將其標識后進行示蹤研究,并經(jīng)過生化過程分析加以證實。又如將各型脂蛋白標識后引入動物,ARG發(fā)覺動脈放射性增強。第五節(jié)細胞動力學示蹤研究(不做介紹、感興趣者可自學)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第34頁第六節(jié)放素示蹤動力學定義:研究物質(zhì)體內(nèi)運動規(guī)律,并推算相關(guān)數(shù)學表示式及參數(shù)理論試驗方法稱之。內(nèi)容:
1、用已知體系預(yù)計待研究對象體內(nèi)運動規(guī)律
2、用取得資料來建立、推算相關(guān)體系數(shù)學表示式及參數(shù)。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第35頁示蹤物:指被研究系統(tǒng)內(nèi)模擬研究對象物質(zhì)。示蹤物基礎(chǔ)要求:1)不干擾體內(nèi)生理狀態(tài)2)標識核素要小到與被示蹤物相比可略不計。3)能夠被追蹤測量核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第36頁示蹤動力學一些基礎(chǔ)概念(P156)代謝庫:指一個假想,有特定物理功效空間分類:開放性代謝庫:現(xiàn)有入庫物質(zhì),也有出庫物質(zhì)閉合性代謝庫:只進不出或只出不進。庫大小P:表示某物質(zhì)在代謝庫中量通道:指進出庫通道:(不止1,2條)。穩(wěn)態(tài)代謝庫:進出庫速率相同:庫內(nèi)代謝處于平衡狀態(tài)。非穩(wěn)態(tài)代謝庫:進出庫速率不相同,庫內(nèi)代謝處于非平衡狀態(tài)或形成新動態(tài)平衡。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第37頁更新速率FXX:指庫中某物質(zhì)單位時間內(nèi)更新量。條件:庫處于動態(tài)平衡條件下。輸入速率FXY:指單位時間進入庫量輸出速率FYX:指單位時間輸出庫量注:X代表庫,Y代表通道,F(xiàn)代表速率,F(xiàn)角標小字輸入在前,輸出符號在后,比如:FXO:表示只輸入不輸出(如消化道吸收)FOX:表示不輸入只排泄(排尿)產(chǎn)生速率PR:單位時間從系統(tǒng)外(庫外)獲取物質(zhì)量。動力學幾個參數(shù)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第38頁排除速率DR:單位時間向庫外排出量去除率Cl:單位時間排除物質(zhì)相當于多少體積血漿中所含該物質(zhì)量(ml/h)速率常數(shù)K:單位時間內(nèi)某物質(zhì)在庫中改變量相當于庫大小百分比,如更新速率常數(shù)KXX。更新時間T:指庫中某物質(zhì)更新量相當于庫大小所需時間。半更新時間T1/2:指某物質(zhì)更新量相當于庫大小1/2所需時間。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第39頁
0.693參數(shù)間關(guān)系:T1/2=---------------------------K(更新速率常數(shù))
1T(更新時間)=-------------------------K(更新速率常數(shù))F(更新速率)=P(庫大小)×K(更新速率常數(shù))
D(輸入示蹤物總活度)P(庫大?。?-----------------------------------A0(零時刻比活度、混勻后)去除率CL=K(速率常數(shù))×庫容積V核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第40頁代謝庫模型:單庫、雙庫、三庫(P158)求解動力學參數(shù)普通步驟:1、建立數(shù)學模型:單、雙、三庫等模型,選定數(shù)學表示式。2、進入人或動物示蹤試驗,引入示蹤物后不一樣時間采樣測量3、曲線擬合4、求算(解)動力學參數(shù)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第41頁不一樣類型求解動力學參數(shù)舉例
1、穩(wěn)態(tài)單庫模型中閉合單庫:示蹤物引入體內(nèi)快速被稀釋而沒有任何物質(zhì)排出(只進不出)如51Cr標識Rbc5×106dpm引入血液,混勻后取少許測得比活度為C,求血溶量?依據(jù)A=CV已知:A=5×106dpm(標識物體積忽略不計)
C=dpm/mlA5×106V=--------=-----------------=2500mlC核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第42頁2、穩(wěn)態(tài)單庫開放型模型:(有進有出)注入放射性逐步下降,穩(wěn)態(tài)情況下,庫容積不變,物質(zhì)輸入輸出相等,即到達平衡。如一次快速引入示蹤劑后,庫中示蹤物有代謝或排出和放射性衰變?nèi)齻€過程,如一次V125I-BSA0.5×107dpm,不一樣時間取血測放得以下曲線。1000800600Dpm/ml1020(min)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第43頁從圖中得出
T?=10min
而更新速率常數(shù)K0.693K=--------------=0.0693/min10
核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第44頁又從圖中知,零時比活度
A0=dpm/ml(直線Y軸載距)
總放0.5×107所以庫大小P=--------------=-------------------=2500mlA0比活度
去除率:
CL=KV=0.0693×2500=173ml/min核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第45頁再例:用四氧嘧啶靜脈注射(50mg/kg)大鼠破壞胰島制成糖尿病大鼠模型,再將14C一萄糖2×105dpm注射大鼠一批,不一樣時間取血測血中放射性強度,得以下列圖:P16001234(h)100001000100正常鼠糖尿病鼠
引入示蹤物時間血葡比活度dpm/mg核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第46頁正常大鼠糖尿病大鼠At(dpm/mg)10000800046801000200(縱坐標)
01234t(hr)橫坐標
示蹤物引入單庫后,庫中物質(zhì)比活度必定按接指數(shù)規(guī)律下降,數(shù)學表示式:At=A0·e-kt或LnAt=LnA0—ktA0為初始比活度At為某t時間比活度K為更新速率常數(shù)假如以LnAt對t做圖,斜率為K核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第47頁按單庫模型計算動力學參數(shù)見下表(P160)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第48頁結(jié)論:1)糖尿病大鼠葡萄糖庫增大2)更新速率、產(chǎn)生速率及排除速率隨庫增大而加緊3)更新速率常數(shù)及更新時間不變。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第49頁3、穩(wěn)態(tài)雙庫系統(tǒng)(二庫模型)
較復(fù)雜但符合生物體代謝情況常見。二庫模型常見12種類型見P161方塊圖若雙庫間通道是單方向,可看做兩個單庫處理,此種類型不在上述類型中。常見12種類型是庫間通道雙向性穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)。
A叫初始庫,b是次級庫由左至右,由上至下。核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第50頁二庫模型特征:
1)12種不論何類,當向初始庫一次注入示蹤物后其比活度At總是以雙指數(shù)曲線方式進行性下降。
2)次級庫物質(zhì)比活度Bt則以雙指數(shù)曲線方式先上升后下降。下列圖是一次注入示蹤物后,a、b庫中物質(zhì)比活度時相改變及其曲線分解。P161核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第51頁圖中At、Bt時相改變分別可用以下二個函數(shù)式表示:
At=A01e-k1t+A02e-k2tBt=-B0e-k1t+B0e-k2t二庫模型參數(shù)求解:主要四個參數(shù)A01A02:(比活度)K1K2:(更新速率)核醫(yī)學核素示蹤技術(shù)第52頁常采取圖解法或剝譜法,也叫殘數(shù)法求解。首先將初始a
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