實(shí)驗(yàn)一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定

關(guān)于實(shí)驗(yàn)一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過(guò)程中積累資料、經(jīng)驗(yàn)的一項(xiàng)重要工作，每一次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時(shí)做好記錄和總結(jié)。要求：⑴真實(shí)性⑵原始性⑶完整性⑷條理性實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)題目、實(shí)驗(yàn)日期、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑、操作步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)論等項(xiàng)目。第2頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室規(guī)則

上實(shí)驗(yàn)課時(shí)不遲到，不早退，自覺(jué)遵守課堂紀(jì)律，上課時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室安靜，不得大聲說(shuō)笑。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿實(shí)驗(yàn)工作服。實(shí)驗(yàn)課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、要求和注意事?xiàng)，熟悉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法步驟。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。要愛(ài)護(hù)公物，小心使用儀器和實(shí)驗(yàn)設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和器材。第3頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶中。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿必須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢，立即蓋嚴(yán)并還原。實(shí)驗(yàn)完畢，儀器洗凈放好。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動(dòng)亂用。如不會(huì)使用，應(yīng)請(qǐng)教指導(dǎo)教師。凡因亂動(dòng)亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠償和處理。嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實(shí)驗(yàn)結(jié)束離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室之前，關(guān)好窗戶，切斷電源，水源，確保安全。第4頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天5實(shí)驗(yàn)室安全使用玻璃、金屬器材時(shí)注意防止割傷及機(jī)械創(chuàng)傷。如發(fā)生意外，找實(shí)驗(yàn)室工作人員(少量急用藥物備用)。濃酸、濃堿腐蝕性很強(qiáng)，必須極為小心地操作。用吸量管量取這些試劑(包括有毒物)時(shí)，必須使用橡皮球，絕對(duì)不能用口吸取。微生物、動(dòng)物的組織、細(xì)胞培養(yǎng)物、血液和分泌物都可能存在細(xì)菌和病毒感染的潛在危害，處理生物材料必需小心謹(jǐn)慎，做完實(shí)驗(yàn)必須用肥皂、洗滌劑或消毒液洗手。被污染的物品，必須進(jìn)行高壓消毒或燒成灰燼。被污染的玻璃用具應(yīng)在清洗和高壓消毒前立即浸泡在適當(dāng)?shù)南疽褐?。?頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天試劑使用規(guī)則使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實(shí)驗(yàn)所需。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原瓶。取標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干凈燒杯中，再用干凈吸管吸取標(biāo)準(zhǔn)液，以免污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。使用滴管時(shí)，滴管尖端朝下，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用有毒試劑及強(qiáng)酸強(qiáng)堿時(shí)，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。第6頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天吸量管的使用正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上端。調(diào)刻度：吸量管與地面保持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放開(kāi)食指，使液體自動(dòng)流出。吸量管應(yīng)最后靠壁15秒。第7頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天吸量管上端標(biāo)有“吹”字。將所量液體全部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶液。此類(lèi)吸量管為“吹出式”，未標(biāo)“吹”字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留液體。(0.5ml以下的都要吹）吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管及試劑。吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時(shí)用自來(lái)水沖洗干凈。如果吸取一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，待實(shí)驗(yàn)完畢后，用自來(lái)水沖洗干凈，晾干備用。吸量管的使用注意事項(xiàng)第8頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天玻璃器皿的一般清洗方法一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來(lái)水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自來(lái)水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗2～3次。干燥備用。容量分析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來(lái)水沖洗，待晾干后，再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時(shí)，然后用自來(lái)水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗2～3次，干燥備用。比色杯：用畢立即用自來(lái)水反復(fù)沖洗。洗不凈時(shí)，用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用自來(lái)水沖洗。避免用堿液或強(qiáng)氧化劑清洗，切忌用試管刷或粗糙布(紙)擦拭。上述所有玻璃器材洗凈(以倒置后器壁不掛水珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn))后，根據(jù)需要晾干或烘干。第9頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)和等電點(diǎn)測(cè)定第10頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2、學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法(沉淀法)第11頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸堿度影響。第12頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天常用方法：利用溴甲酚綠指示劑的變色來(lái)觀察蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)。3.85.6第13頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天當(dāng)溶液的pH為一定值時(shí)，蛋白質(zhì)極性基團(tuán)解離的正負(fù)離子數(shù)相等，凈電荷為0，此溶液的pH值為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。不同蛋白質(zhì)具有各自特定的等電點(diǎn)，與該蛋白質(zhì)的組成結(jié)構(gòu)有關(guān)。在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用性質(zhì)的變化測(cè)定各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。常用方法：觀察蛋白溶液在不同pH值下的溶解度。問(wèn)題：蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定還有哪些方法?第14頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察不同pH溶液中酪蛋白的溶解度來(lái)測(cè)定其等電點(diǎn)。用醋酸與醋酸鈉（醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中）配制各種不同pH值的緩沖液。向各緩沖溶液中加入酪蛋白后，沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液的pH值即為酪蛋白的等電點(diǎn)。第15頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、試劑儀器和試劑1、儀器設(shè)備

試管及試管架滴管吸量管容量瓶

第16頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天0.5%酪蛋白溶液0.01%溴甲基酚綠指示劑0.10mol/L鹽酸溶液0.10mol/L氫氧化鈉溶液1.00mol/L醋酸溶液0.10mol/L醋酸溶液0.01mol/L醋酸溶液2、試劑第17頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、實(shí)驗(yàn)步驟與結(jié)果1、觀察蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)步驟操作現(xiàn)象解釋結(jié)論1取試管1，加20滴0.5%酪蛋白溶液和5-7滴0.01%溴甲酚綠指示劑，混勻觀察溶液顏色和沉淀結(jié)合思考1，解釋2緩慢滴加0.1mol/L鹽酸溶液，隨滴隨搖，直至大量沉淀發(fā)生觀察溶液顏色和沉淀結(jié)合思考2，解釋3繼續(xù)滴加0.1mol/L鹽酸溶液觀察溶液顏色和沉淀結(jié)合思考1，解釋4滴加0.1mol/L氫氧化鈉溶液進(jìn)行中和，直至沉淀出現(xiàn)觀察溶液顏色和沉淀結(jié)合思考2，解釋5繼續(xù)滴加0.1mol/L氫氧化鈉溶液觀察溶液顏色和沉淀結(jié)合思考1，解釋第18頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）觀察其混濁度。靜置15分鐘后，再觀察其混濁度。結(jié)果可用“+、++、+++”表示渾濁度，最混濁的一管pH即接近酪蛋白的等電點(diǎn)。（1）取5支試管，按書(shū)中表格分別加入各試劑，混勻。2、測(cè)定酪蛋白等電點(diǎn)第19頁(yè),共22頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)結(jié)果：按照實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果。分析：通過(guò)操作本次