食品中毒素的檢測(cè)

食品中毒素的檢測(cè)2011級(jí)生物技術(shù)第三組5/9/20241食品中毒素的檢測(cè)5/9/20242食品中毒素的檢測(cè)

美味的外表之下深藏著毒素

一常見(jiàn)的動(dòng)物性天然毒素動(dòng)物肝臟中的毒素河豚毒素巖蛤毒素螺類毒素組胺5/9/20243食品中毒素的檢測(cè)1動(dòng)物肝臟中的毒素大家對(duì)動(dòng)物肝臟的認(rèn)識(shí)也許僅僅是美味和含維生素A可以治療夜盲癥。動(dòng)物中主要的毒素有膽酸，牛磺膽酸和脫氧膽酸。他們都是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制劑,其中?；悄懰岬亩舅刈顝?qiáng)。脫氧膽酸對(duì)結(jié)腸癌，直腸癌的發(fā)生有促進(jìn)作用。所以食用過(guò)多或食用時(shí)處理不當(dāng)，都會(huì)對(duì)身體造成傷害。5/9/20244食品中毒素的檢測(cè)2河豚毒素河豚魚(yú)是一種味道鮮美卻含劇毒的魚(yú)類。它的肝臟，皮膚，血液等都有劇毒，其中卵和卵巢的毒性最大。河豚魚(yú)中毒是世界上最嚴(yán)重的動(dòng)物性食物中毒。5/9/20245食品中毒素的檢測(cè)3巖蛤毒素它的毒素源于一些屬于膝勾藻科的藻類，這種藻類大量繁殖可引起赤潮。攝食這種藻類，他所含的巖蛤毒素及膝勾藻毒素一無(wú)毒狀態(tài)積累在腸腺中，當(dāng)攝食蛤肉后，毒素被釋放出來(lái)。4螺類毒素絕大多數(shù)食用安全性較高，但少數(shù)種類含有有毒物質(zhì)。5/9/20246食品中毒素的檢測(cè)5組胺組胺屬于生物堿，易溶于水，是由于魚(yú)體內(nèi)的游離組氨酸在魚(yú)中存放過(guò)程經(jīng)脫胺而形成的。組胺中毒大多由于食用不新鮮或腐敗變質(zhì)的魚(yú)類引起的。它能在弱堿條件下，與偶氮反應(yīng)生成橙色物，從而被定性和定量檢測(cè)。5/9/20247食品中毒素的檢測(cè)二、常見(jiàn)的植物性天然毒素1．氰苷氰苷進(jìn)人體內(nèi)水解后產(chǎn)生HC，從而具有較強(qiáng)的毒性。含有氰苷的食源性植物有木薯、豆類以及一些果樹(shù)的種子如杏仁、桃仁、枇杷仁及亞麻仁等。氰化物在酸性條件下可產(chǎn)生HCN氣體，HCN可使苦味酸試紙顯紅色，據(jù)此可對(duì)含有氰苷的物質(zhì)進(jìn)行定性檢測(cè)。5/9/20248食品中毒素的檢測(cè)2．紅細(xì)胞凝集素這是一類對(duì)紅細(xì)胞具有凝集作用的蛋白質(zhì)，多為糖蛋白。含有紅細(xì)胞凝集素的食源性植物有蓖麻、豆類及花生的種子。不同植物的紅細(xì)胞凝集素其毒性是不同的，以蓖麻凝集素的毒性最強(qiáng)，紅細(xì)胞凝集素比較耐熱，80℃數(shù)小時(shí)不能使之失活，100℃需經(jīng)過(guò)1h可完全破壞其活性。5/9/20249食品中毒素的檢測(cè)3．皂苷也稱皂素，很多豆科植物如黃豆、菜豆、蠶豆等不僅含有紅細(xì)胞凝集素、氰苷，還含有有毒的皂苷。其中菜豆中毒是天然食物中毒中較常見(jiàn)的。菜豆中的毒皂苷對(duì)消化道粘膜有強(qiáng)烈的刺激作用。5/9/202410食品中毒素的檢測(cè)4．龍葵堿

龍葵堿又名茄堿、馬鈴薯毒素、龍葵毒素，不溶于水，能溶于乙醇，與稀酸共熱可發(fā)生分解。龍葵堿廣泛存在于馬鈴薯、番茄及茄子等中。馬鈴薯中龍葵堿的含量一般在0.1305％．0.01％，且隨著貯存時(shí)間的增加而漸增，發(fā)芽的馬鈴薯其幼芽及芽眼部分的含量可高達(dá)0.3％～0.5％。人攝人0.2～0.4g龍葵堿即可引起中毒。

5/9/202411食品中毒素的檢測(cè)5．秋水仙堿秋水仙堿是鮮黃花菜(也稱金針菜)中的一種生物堿，其本身無(wú)毒，但當(dāng)它進(jìn)人人體后會(huì)轉(zhuǎn)化成一種劇毒物質(zhì)：二秋水仙堿，后者對(duì)胃腸道、泌尿系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等具有毒性。成人一次攝人0.1～0.2mg秋水仙堿可引起中毒，攝入3～20mg可致死。食用鮮黃花菜時(shí)一定要用開(kāi)水焯，浸泡后，再經(jīng)充分烹飪，以防中毒。食用干黃花菜較安全。5/9/202412食品中毒素的檢測(cè)6．棉酚棉酚系萘的衍生物，在結(jié)構(gòu)上有醛、烯醇及醌式三種同分異構(gòu)體。溶于中等極性的有機(jī)溶劑，不溶于水及己烷等。棉酚對(duì)心、肝、腎及神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)均有毒性。棉酚在棉籽中的含量為0.15％～0.28％，冷榨棉籽油中可高達(dá)l％～1.3％，因此不可食用冷榨棉籽油或毛棉籽油。5/9/202413食品中毒素的檢測(cè)7．毒蘑菇毒蘑菇所含有的有毒成分可分為生物堿類、肽類及其他化合物，根據(jù)中毒的癥狀可分為胃腸毒素、神經(jīng)精神毒素、血液毒素、原漿毒素和其他毒素五類。磨菇毒素的檢驗(yàn)常用紙層析法或薄層層析法。5/9/202414食品中毒素的檢測(cè)食品中毒素的檢測(cè)揮發(fā)性鹽基氮的檢測(cè)水產(chǎn)品中組胺的測(cè)定棉籽油中棉酚含量的檢測(cè)馬鈴薯毒素的檢測(cè)黃曲霉素B1的檢測(cè)5/9/202415食品中毒素的檢測(cè)（一）揮發(fā)性鹽基氮的檢測(cè)5/9/202416食品中毒素的檢測(cè)揮發(fā)性鹽基氮，是動(dòng)物性食品在腐敗過(guò)程中，由細(xì)菌酶的作用使蛋白質(zhì)分解而形成的物質(zhì)，此類物質(zhì)屬帶堿性的含氮物質(zhì)，故也稱堿性總氮（TVBN），主要包括氨及少量伯胺和叔胺等，均具有揮發(fā)性。TVBN與動(dòng)物性食品腐敗程度之間有明確的對(duì)應(yīng)關(guān)系，常用于判定食品的新鮮程度和確定食品質(zhì)量的好壞。TVBN的檢測(cè)方法有半微量定氮法和微量擴(kuò)散法。5/9/202417食品中毒素的檢測(cè)1、半微量定氮法原理：樣品浸提液在弱堿性（MgO）條件下，堿性含氮物質(zhì)游離并被蒸餾出來(lái)，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計(jì)算含量。5/9/202418食品中毒素的檢測(cè)儀器與試劑儀器：半微量凱氏定氮器試劑：氧化鎂混懸液（10%/L）：城區(qū)1.0g氧化鎂，加100mL水，振搖成混懸液；硼酸吸收液（20g/L）0.010mol/LHCl標(biāo)準(zhǔn)液；混合指示劑（2g/L甲基紅-乙醇指示液與1g/L次甲基藍(lán)指示劑，臨用時(shí)等量混合）。5/9/202419食品中毒素的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟試樣處理：將試樣除去脂肪、骨或鱗等非食用部分后，絞碎拌勻，稱取約10.0g，置于錐形瓶中，加100mL水，不時(shí)振搖，浸漬30min后過(guò)濾備用。蒸餾滴定：裝好半微量凱氏定氮器，將盛有10mL硼酸吸收液及5~6滴混合指示劑的錐形瓶置于冷凝管下端，并使端口處于液面以下。準(zhǔn)確吸收5.0mL上述濾液于蒸餾器反應(yīng)室內(nèi)，加5mL氧化鎂混懸液，迅速蓋塞，并用水封口，通入蒸汽，蒸餾5min后停止。吸收液用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至藍(lán)紫色為終點(diǎn)，同時(shí)做試劑空白。5/9/202420食品中毒素的檢測(cè)5/9/202421食品中毒素的檢測(cè)注意事項(xiàng)樣品浸漬液可用多層紗布過(guò)濾除渣，如過(guò)濾液不馬上使用，應(yīng)放冰箱保存。按GB2733—1996鮮、凍動(dòng)物性水產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求，海水魚(yú)類揮發(fā)性鹽基氮含量應(yīng)低于30mg/100g，淡水魚(yú)類，鮮（凍）禽肉應(yīng)低于20mg/100g（GB2710）。5/9/202422食品中毒素的檢測(cè)2、微量擴(kuò)散法原理：揮發(fā)性含氮物質(zhì)可在37℃堿性溶液中釋放出，揮發(fā)后被硼酸吸收液吸收，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定，計(jì)算含量。5/9/202423食品中毒素的檢測(cè)儀器與試劑儀器：微量擴(kuò)散皿（標(biāo)準(zhǔn)型）。試劑：飽和碳酸鉀溶液：稱取50g碳酸鉀，加50mL水，微加熱助溶，使用上清液；水溶性膠：稱取10g阿拉伯膠，加10mL水、5mL甘油、5g無(wú)水碳酸鉀（或無(wú)水碳酸鈉），研磨均勻。其與試劑同半微量定氮法。5/9/202424食品中毒素的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟將水溶性膠涂于擴(kuò)散皿的邊緣，在皿中央內(nèi)室加入1mL硼酸吸收液及1滴混和指示劑，在皿外室一側(cè)加入1.00mL樣品濾液，另一側(cè)加1mL飽和碳酸鉀溶液，注意勿使兩液接觸，立即蓋好。將密封后的擴(kuò)散皿于桌面上輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使樣液與堿液混合，置37℃恒溫箱內(nèi)放置2h，揭開(kāi)蓋后用0.010mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴至終點(diǎn)，同時(shí)做空白試劑。5/9/202425食品中毒素的檢測(cè)式中符號(hào)意義同半微量測(cè)定法。5/9/202426食品中毒素的檢測(cè)（二）水產(chǎn)品中組胺的測(cè)定5/9/202427食品中毒素的檢測(cè)1.原理魚(yú)體中的組胺用正戊醇提取，遇偶氮試劑顯橙色，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。2.試劑正戊醇碳酸鈉溶液（50g/L）三氯乙酸溶液（100g/L）氫氧化鈉溶液（250g/L）等試劑5/9/202428食品中毒素的檢測(cè)3.實(shí)驗(yàn)步驟（1）樣品處理稱取5~10g絞碎并混合均勻的試樣，置于具塞錐形瓶中，加入15.0~20.0mL三氯乙酸溶液，浸泡2~3h，過(guò)濾。吸取2.0mL濾液，置于分液漏斗中，加氫氧化鈉溶液使呈堿性。每次加入3mL正戊醇，振搖5min，提取3次，合并正戊醇提取液于分液漏斗中，每次加3mL鹽酸溶液（1+11）振搖提取3次，合并鹽酸提取液并稀釋至10.0mL，備用。5/9/202429食品中毒素的檢測(cè)（2）測(cè)定吸取2.0mL鹽酸提取液于10mL比色管中。另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0mg、4mg、8mg、12mg、16mg、20mg組胺），分別置于10mL比色管中，加水至1mL，再各加1mL溶液（1+11）。試樣及標(biāo)準(zhǔn)試管各加3mL碳酸鈉溶液、3mL偶氮試劑，加水至刻度，混勻，放置10min后用1cm比色杯以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于480nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，或與標(biāo)準(zhǔn)系列目測(cè)比較。5/9/202430食品中毒素的檢測(cè)（3）計(jì)算結(jié)果

式中X——樣品中組胺含量，mg/100gV——加入三氯乙酸溶液的體積，mLm1——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品溶液中組胺的含量，μgm2——樣品質(zhì)量，g5/9/202431食品中毒素的檢測(cè)（三）棉籽油中棉酚含量的檢測(cè)5/9/202432食品中毒素的檢測(cè)

我國(guó)種植的棉花屬于陸地棉及草棉,棉籽中常含有0.15%~2.8%游離棉酚.冷榨棉籽油時(shí),大部分棉酚轉(zhuǎn)入棉籽油中,可高達(dá)1%~3%.食用冷榨棉籽油或毛棉籽油,極易引起中毒.棉籽油中含有0.02%游離棉酚對(duì)動(dòng)物健康無(wú)影響,0.05%以上時(shí)對(duì)動(dòng)物有危害,國(guó)標(biāo)規(guī)定,棉籽油中游離棉酚<=0.02％.5/9/202433食品中毒素的檢測(cè)紫外分光光度法原理:樣品中游離棉酚經(jīng)用丙酮提取后,在378nm有最大吸收，其吸收值與棉酚量在一定范圍內(nèi)成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。試劑與儀器:儀器：紫外分光光度計(jì)試劑:a.丙酮70％：將350mL丙酮加水至500mLb.配制棉酚標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取棉酚標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0ｍＬ，置于100ｍＬ容量瓶中，加70％丙酮稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于50.0μg棉酚。5/9/202434食品中毒素的檢測(cè)主要分析步驟提?。悍Q取1.00ｇ三級(jí)棉籽油置于100ｍＬ具塞錐形瓶中，加入20.0ｍＬ70％丙酮,并加入玻璃珠３～５粒，在電動(dòng)振蕩器上振蕩３０ｍｉｎ，然后在冰箱中放置過(guò)夜.上清液，過(guò)濾。標(biāo)準(zhǔn)系列制備：吸取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ｍＬ棉酚標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于5,10,15,20,25,30μg棉酚）,分別置于１０ｍＬ具塞試管中，各加70％丙酮至10ｍＬ，密塞混勻，靜置10min。測(cè)定吸光值:取濾液及標(biāo)準(zhǔn)溶液于1cm玻璃比色杯中，以70％丙酮溶液調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于378nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。5/9/202435食品中毒素的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算X=式中X---試樣中游離酚棉的含量，g/100gm1---樣品管中游離酚棉的質(zhì)量,μgm2---試樣質(zhì)量,g.

5/9/202436食品中毒素的檢測(cè)苯胺法1

儀器：分光光度計(jì)

2

試劑：苯胺（A.R.）

丙酮70%：同上；棉酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：同上；乙醇（95%）5/9/202437食品中毒素的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟：稱取1.0ｇ試樣置于150ｍＬ具塞錐形瓶中，加入20mL丙酮,玻璃珠３～５粒,劇烈震動(dòng)1小時(shí)，在冰箱中過(guò)夜,過(guò)濾，濾液備用.在兩支25mL具塞比色管中，各加入2mL上述濾液，以甲管為試樣管，乙管為對(duì)照管，另吸取、0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ｍＬ棉酚標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0.0、5.0、10.0、20.0、40.0、50.0μg棉酚）各兩份，分別置于甲乙兩組25mL具塞比色管中，各管均加入丙酮至2mL，甲組標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管甲管各加入3mL苯胺，在80度水浴中加熱15min,取出冷至室溫，各加入乙醇至25mL，乙組標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管乙管各加入乙醇至25mL。兩組溶液再加乙醇后均放15min，以甲組的零管為試劑空白，以一組的零管為溶劑空白，用1cm比色杯，在波長(zhǎng)445nm處，測(cè)定兩組的吸光度，以兩組對(duì)應(yīng)的吸光度之差，與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以試樣甲管與乙管的吸光度之差從標(biāo)準(zhǔn)曲線從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出棉酚含量。5/9/202438食品中毒素的檢測(cè)計(jì)算結(jié)果:X=式中X---試樣中游離酚棉的含量,g/100gm1---樣品管中游離酚棉的質(zhì)量,μgm2---試樣質(zhì)量，g.實(shí)驗(yàn)要求:精密度要求在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定的結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%.

5/9/202439食品中毒素的檢測(cè)（四）、馬鈴薯毒素的檢測(cè)5/9/202440食品中毒素的檢測(cè)龍葵堿對(duì)胃腸道粘膜有較強(qiáng)刺激性和腐蝕性，對(duì)中樞神經(jīng)有麻痹作用，對(duì)紅細(xì)胞有溶血作用。其中毒作用主要是通過(guò)抑制膽堿酯酶的活性而引起的。測(cè)定龍葵堿含量的方法主要是比色法5/9/202441食品中毒素的檢測(cè)原理龍葵堿不溶于水、乙醚、氯仿，但能溶于乙醇。龍葵堿在稀硫酸中與甲醛溶液作用生成橙紅色化合物，與520nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定。儀器與試劑A儀器：勻漿機(jī)、離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、721分光光度計(jì)B試劑

：龍葵堿標(biāo)準(zhǔn)溶液（精確稱取0.1000g龍葵堿，以1%硫酸溶液溶解并定容至100ml，此溶液中龍葵堿濃度為1mg/mL）

5/9/202442食品中毒素的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟A樣品提取a

稱取搗碎的馬鈴薯樣品20g于勻漿器中，加100mL95%乙醇，勻漿3min。b將勻漿離心10min(4000r/min)取上清液，殘?jiān)?0mL乙醇洗滌兩次，合并上清液。將上清液濃縮至干。用5%硫酸溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)濾后將濾液用氨水調(diào)至中性，再加1~2滴濃氨水調(diào)PH至10~10.4，在80C水浴中加熱5min，冷卻后至冰箱中過(guò)夜，目的是使龍葵堿沉淀完全。C離心棄去上清液，以1%氨水洗至無(wú)色透明，將殘?jiān)?%硫酸溶液溶解并定容至10mL，此為龍膽堿提取液。5/9/202443食品中毒素的檢測(cè)B標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用龍葵堿儲(chǔ)藏液配成100ug/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別吸取0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL龍葵堿標(biāo)準(zhǔn)使用液相當(dāng)于0ug、10ug、20ug、30ug、40ug、50ug龍葵堿于10mL比色管中，用1%硫酸溶液補(bǔ)足至2mL，在冰浴中各滴加濃硫酸5mL，搖勻。靜置3分鐘，然后在冰浴中滴加1%甲醛溶液3mL。靜置90分鐘，于520nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

C樣品測(cè)定

吸取樣品龍葵堿提取液2mL于10mL比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法，測(cè)定其吸光度。5/9/202444食品中毒素的檢測(cè)D結(jié)果計(jì)算

龍葵堿含量(mg/100g)=m1xv1x100

2x1000vM1---由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的龍葵堿的量ug

M-----樣品質(zhì)量gV1----測(cè)定時(shí)吸取樣品提取液的體積mLV------樣品提取后定容總體積mL5/9/202445食品中毒素的檢測(cè)（五）黃曲霉素B1的檢測(cè)5/9/202446食品中毒素的檢測(cè)黃曲霉毒素（AFT）是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉（aspergillus

flavus)）寄生曲霉（a.parasiticus)）產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機(jī)率最高。黃曲霉毒素主要有B1,B2,G1,G2以及另外兩種代謝產(chǎn)物M1,M2.其中M1和M2是從牛奶中分離出來(lái)的.B1,B2,G1,G2,M1和M2在分子結(jié)構(gòu)上十分接近.5/9/202447食品中毒素的檢測(cè)其中B1是最危險(xiǎn)的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測(cè)到。它們?cè)谧贤饩€照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。AFT目前已發(fā)現(xiàn)20余種。AFT主要污染糧油食品、動(dòng)植物食品等；如花生、玉米，大米、小麥、豆類、堅(jiān)果類、肉類、乳及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。其中以花生和玉米污染最嚴(yán)重。家庭自制發(fā)酵食品也能檢出黃曲霉毒素，尤其是高溫高濕地區(qū)的糧油及制品種檢出率更高。5/9/202448食品中毒素的檢測(cè)1.薄層層析的原理樣品中AFT

B1經(jīng)有機(jī)溶劑提取、凈化、濃縮并經(jīng)薄層色譜分離后，在波長(zhǎng)365nm紫外光下產(chǎn)生熒光，根據(jù)其在薄層板上顯示熒光的強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)品AFT

B1最低檢出量產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度比較來(lái)測(cè)定樣品中AFT

B1的含量。5/9/202449食品中毒素的檢測(cè)2.儀器和試劑（1）儀器：玻璃板：5×20cm

涂布器

色譜展開(kāi)槽（25×6×4cm）

紫外光燈：100-125W，帶有波長(zhǎng)365nm濾光片

微量注射器：20uL,10uL各一支（2）試劑：三氯甲烷（AR）

正己烷（AR

沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）

甲醇（AR）

苯

（AR）

乙腈

（AR）

無(wú)水乙醚

（AR）

丙酮

（AR）

（以上試劑應(yīng)重蒸，并應(yīng)經(jīng)檢驗(yàn)對(duì)薄層色譜測(cè)定無(wú)干擾）

苯-乙腈(98:2)混合溶液

甲醇-水（55:45）混合溶液

三氟乙酸（AR）

氯化鈉

（AR）

無(wú)水硫酸鈉（AR）

硅膠G

（薄層色譜用）

5%次氯酸鈉溶液5/9/202450食品中毒素的檢測(cè)3.黃曲霉素B1標(biāo)準(zhǔn)液（1）黃曲霉素B1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用百萬(wàn)分之一的微量分析天平精密稱取1-1.2mgAFT

B1標(biāo)準(zhǔn)品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀釋至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。使用前用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其濃度，再用苯-乙腈混合溶液調(diào)整其濃度為10ug/mL。（在350nm測(cè)定AFT

B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩爾消光系數(shù)為19800，可根據(jù)朗伯-比爾定律求出其濃度）5/9/202451食品中毒素的檢測(cè)（2）黃曲霉素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I（1ug/mL）：吸取1.0mL10ug/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液II（0.2ug/mL）：吸取1.0mL

1ug/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL

0.2ug/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。5/9/202452食品中毒素的檢測(cè)（3）配制：取100g漂白粉，加入500ml水，攪拌均勻。另將80g工業(yè)用碳酸鈉溶于500ml溫水中。將兩液合并、攪拌、澄清、過(guò)濾。此液含次氯酸25g/L。5/9/202453食品中毒素的檢測(cè)4.測(cè)定方法（1）單項(xiàng)展開(kāi)法薄板制備:

稱取3g硅膠G，加2-3倍量的水，研磨1-2min呈糊狀后倒入涂布器推成5ｃｍ×２０ｃｍ，厚度約０.２５ｍｍ的薄層板３塊，在空氣中干燥１５ｍｉｎ，在１００攝氏度活化２ｈ，取出，放干燥器中保藏，5/9/202454食品中毒素的檢測(cè)第一點(diǎn)：１０ｕｌＡＦＴＢ，標(biāo)準(zhǔn)使用液（０.０４ｕｇ／ｍｌ）。第二點(diǎn)：２０ｕｌ樣液。第三點(diǎn)：２０ｕｌ樣液＋１０ｕｌ０.０４ｕｇ／ｍｌＡＦＴＢ１標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點(diǎn)：２０ｕｌ樣液＋１０ｕｌ０．０２ｕｇ／ｍｌＡＦＴＢ標(biāo)準(zhǔn)使用液。Ｃ．展開(kāi)與觀察展開(kāi)槽內(nèi)加１０ｍｌ無(wú)水乙醚，預(yù)展１２ｃｍ，取出揮干，再于另一端開(kāi)槽內(nèi)加１０ｍｌ丙酮－三濾甲烷（８＋９２），展開(kāi)１０－１２ｃｍ，取出，在紫外光下觀察。Ｂ．點(diǎn)樣：將薄板邊緣附著的吸附劑刮凈，在距薄層板下端３ｃｍ的基線上用微量注射器或血紅素吸管滴加樣液。5/9/202455食品中毒素的檢測(cè)Ｄ．確證試驗(yàn)為確認(rèn)薄層樣上樣液熒光系由黃曲霉素Ｂ１產(chǎn)生的，加滴三氟乙酸，ＡＦＴＢ１的衍生物，展開(kāi)后此衍生物的比移值在０.１左右。與薄層板左邊依次滴加兩個(gè)點(diǎn)。第一點(diǎn)：１０ｕｌＡＦＴＢ，標(biāo)準(zhǔn)使用液（０.０４ｕｇ／ｍｌ）第二點(diǎn)：２０／ｕｌ樣液于以上兩點(diǎn)各加一小滴三氟乙酸蓋于其，反應(yīng)５ｍｉｎ后用吹分機(jī)吹熱風(fēng)２ｍｉｎ，再于薄層板上滴加以下兩點(diǎn)。第三點(diǎn)：１０ｕｌ０．０４ｕｇ／ｍｌＡＦＴＢ１標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點(diǎn)：２０ｕｌ樣液。按上法展開(kāi)并觀察，樣液是否產(chǎn)生與ＡＦＴＢ１標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相同的衍生物。未加三氟乙酸的三，四兩點(diǎn)，可依次作為標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)的衍生物空白對(duì)照。5/9/202456食品中毒素的檢測(cè)Ｅ．稀釋定量：樣液中的AFTB1熒光點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，如與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)最低檢出量的熒光強(qiáng)度一致，則樣品中ＡＦＴＢ１含量即為５ｕｇ／ｋｇ．滴加試樣如下：第一點(diǎn)：１０ｕｌＡＦＴＢ１，標(biāo)準(zhǔn)使用液（０.０４ｕｇ／ｍｌ）第二點(diǎn)：根據(jù)情況滴加１０ｕｌ樣液。第三點(diǎn)：根據(jù)情況滴加１５ｕｌ樣液。第四點(diǎn)：根據(jù)情況滴加２０ｕｌ樣液。Ｆ．結(jié)果計(jì)算Ｘ＝０.０００４×

Ｘ－－－－－樣品中ＡＦＴＢ１的含量，ｕｇ／ｋｇＶ１－－－－－加入苯一乙腈混合物的體積，ｍｌＶ２－－－－－出現(xiàn)最低熒光時(shí)滴加樣液的體積，ｍｌＤ－－－－－－樣液的總稀釋倍數(shù)，Ｍ－－－－－－加入苯一乙腈混合物溶解時(shí)相當(dāng)樣品的質(zhì)量，ｇ０.０００４－－－－－ＡＦＴＢ１的最低檢出限量，ｕｇ5/9/202457食品中毒素的檢測(cè)G．注意事項(xiàng)１．本法靈敏度較高，容易產(chǎn)生誤差。２．AFTB1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)密封于具塞試管中，在4攝氏度避光保存。如果在保存期間體積明顯減少，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充溶劑。3.AFT