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文檔簡介

熒光分光光度法測定核黃素主講教師：中山職業(yè)技術學院趙冬梅分子熒光分析技術一.實驗目的1.學習熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。2.掌握熒光光度計的操作技術。二.

實驗原理維生素B2，又叫核黃素，是橘黃色無臭的針狀結(jié)晶。維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有機溶劑。在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對熱穩(wěn)定。維生素B2水溶液在430-440nm藍光或紫外光照射下會發(fā)生綠色熒光，熒光峰在535nm，在pH6-7的溶液中熒光強度最大，在pH11的堿性溶液中熒光消失。多維葡萄糖中含有維生素B1，C，D2及葡萄糖均不干擾維生素B2的測定。由于維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會發(fā)生光分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比核黃素的熒光強的多。因此，測量維生素B2的熒光時，溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且須在避光條件下進行。三.儀器與試劑熒光分光光度計。10μg/mL維生素B2標準溶液：準確稱取10.0mg維生素B2，用熱蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)入1L棕色容量瓶中，冷卻后加蒸餾水至標線，搖勻，置于暗處保存。冰乙酸（AR）；多維葡萄糖粉試樣。四.實驗內(nèi)容(1)標準曲線的繪制于6只50mL容量瓶中，分別加入10μg/mL維生素B2標準溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸2.0mL，加水至標線，搖勻。在970CRT熒光分光光度計上，用1cm熒光比色皿于激發(fā)波長440nm，發(fā)射波長540nm處，測量標準系列溶液的熒光強度。(2)多維葡萄糖粉中維生素B2的測定準確稱取0.15-0.2g多維葡萄糖粉試樣，用少量水溶解后轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加冰乙酸2mL，搖勻。在相同的測量條件下，測量其熒光強度。平行測定三次五.實驗記錄及數(shù)據(jù)處理以相對熒光強度為縱坐標，維生素B2的質(zhì)量為橫坐標繪制標準曲線。從標準曲線上查出待測試液中維生素

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