DNA重組技術(shù)的基本工具(精校版)

DNA重組技術(shù)的基本工具(精校版)設(shè)想？

能否培養(yǎng)出具有抗蟲(chóng)性狀的抗蟲(chóng)棉呢？2基因工程的概念基因工程：指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作DNA重組技術(shù)或基因拼接技術(shù)。3基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外基因DNA分子水平定向改造生物的遺傳性狀剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)基因重組基因工程的概念理解4基因工程培育抗蟲(chóng)棉的簡(jiǎn)要過(guò)程：蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲(chóng)基因普通棉花(無(wú)抗蟲(chóng)特性)棉花細(xì)胞(含抗蟲(chóng)基因)與載體DNA拼接，導(dǎo)入棉花植株(有抗蟲(chóng)特性)表達(dá)5基因工程培育抗蟲(chóng)棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：抗蟲(chóng)基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來(lái)關(guān)鍵步驟二：抗蟲(chóng)基因與棉花DNA“縫合”關(guān)鍵步驟三：抗蟲(chóng)基因進(jìn)入棉花細(xì)胞6大家學(xué)習(xí)辛苦了，還是要堅(jiān)持繼續(xù)保持安靜7解決培育抗蟲(chóng)棉的關(guān)鍵步驟需要哪些工具？“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶“分子縫合針”——DNA連接酶“分子運(yùn)輸車(chē)”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體8§1-1DNA重組技術(shù)的基本工具“分子手術(shù)刀”──限制酶

“分子縫合針”──DNA連接酶

“分子運(yùn)輸車(chē)”

──基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體

9識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。主要從原核生物分離純化出來(lái)4000種。1、來(lái)源：2、種類(lèi)：3、作用：5、結(jié)果：形成兩種末端一、“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶黏性末端平末端4、切割方式：錯(cuò)位切和平切10ATGCATGC限制酶切割磷酸二酯鍵11限制性?xún)?nèi)切酶作用過(guò)程點(diǎn)擊播放12

1、大腸桿菌的一種限制酶（EcoRⅠ)能識(shí)別GAATTC序列，并在G和A之間切開(kāi)形成黏性末端。2、SmaⅠ能識(shí)別CCCGGG序列，并在C和G之間切割形成平末端。常見(jiàn)的兩種限制酶13SmaⅠ平末端平末端14

EcoRⅠ黏性末端黏性末端15什么叫黏性末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開(kāi)時(shí)，被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。16什么叫平末端？

當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。17基因的針線：DNA連接酶

G

AA

TT

CC

TT

AA

GG

AA

TT

CC

TT

AA

GGC

TT

AA

AA

TT

C

GG

C

TT

AA

AA

TT

C

GGC

TT

AA

AA

TT

C

G用同種限制酶切割18ATGCATGC連接酶連接磷酸二酯鍵DNA連接酶的作用過(guò)程：二、分子縫合針——DNA連接酶19T磷酸二酯鍵1234512345A20作用部位：是磷酸二酯鍵（扶手）不是氫鍵（梯子）

DNA連接酶將兩條DNA鏈連接起來(lái)的酶。21連接黏性末端連接黏性末端和平末端分類(lèi)作用E.coliDNA連接酶連接酶種類(lèi)：T4DNA連接酶22兩DNA片段要具有互補(bǔ)的黏性末端才能拼起來(lái)DNA連接酶的縫合作用可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的DNA單鏈缺口，但不能連接單鏈DNA！23DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，但效率較低DNA連接酶的縫合作用24AATTGCAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用返回25核苷酸分子的連接：ATGCATGCDNA聚合酶連接單鏈DNA把單個(gè)脫氧核苷酸連接到DNA片段上26都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)

不需要需要形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制DNA連接酶與DNA聚合酶的比較只能將單個(gè)核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵27三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體

1、基因工程的載體被喻為：分子運(yùn)輸車(chē)2、常用載體的種類(lèi)：質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒28議一議2、能否用SARS病毒作為基因載體？3、作為載體，若沒(méi)有切割位點(diǎn)將怎樣？4、攜帶目的基因的載體是否進(jìn)入了受體細(xì)胞，如何鑒定？5、假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制，將怎樣？1、從化學(xué)組成來(lái)看，載體應(yīng)含有什么成分？雙鏈DNA不能不能進(jìn)行DNA的重組載體上應(yīng)有標(biāo)