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CRISPR/Cas9

——ANewWayforGenomeEditingGenomeEditingCRISPR研究歷史1987年，日本課題組在K12大腸桿菌的堿性磷酸酶基因附近發(fā)現(xiàn)串聯(lián)間隔重復(fù)序列隨后的研究發(fā)現(xiàn)這種間隔重復(fù)序列廣泛存在于細(xì)菌和古細(xì)菌的基因組中正式命名為clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats(CRISPR)CRISPR的間隔序列(spacer)與宿主菌的染色體外的遺傳物質(zhì)高度同源CRISPR基因座結(jié)構(gòu)CRISPR間隔序列的獲得Cas1和Cas2Csn2作用未經(jīng)證實(shí)免疫作用的實(shí)現(xiàn)人工CRISPR/Cas9系統(tǒng)tracrRNA修復(fù)引起突變非同源末端重接（non-homologousend-joining，NHEJ），直接在斷裂處隨機(jī)修復(fù)，多發(fā)生在雙鏈斷裂時(shí)。同源重組修復(fù)（homologousrecombinationalrepair，HR），以同源DNA為模板進(jìn)行修復(fù)，單雙鏈斷裂時(shí)發(fā)生概率相近。利用HR，可以引入DNA模板，實(shí)現(xiàn)定向突變。應(yīng)用基因治療例如用iPS細(xì)胞治療人類的鐮刀型貧血癥，將病人的皮膚細(xì)胞誘導(dǎo)成iPS細(xì)胞利用CRISPR/Cas9突變型的切口酶來介導(dǎo)同源重組修復(fù)突變的血紅蛋白基因再將修復(fù)的iPS細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為造血干細(xì)胞移植到病人體內(nèi)．應(yīng)用HIV病毒清除工具Hsin-KaiLiao,YingGu,ArturoDiazetal.UseoftheCRISPR/Cas9systemasanintracellulardefenseagainstHIV-1infectioninhumancells.NatureCommunications，2015，6：6413衰老模型I.Harel,B.A.Benayoun,B.Machadoetal.Aplatformforrapidexplorationofaginganddiseasesinanaturallyshort-livedvertebrate.Cell，2015，160（5）：1013-1026專利2013年初，MIT的Zhang研究組首次報(bào)道利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)人293T細(xì)胞的EMX1和PVALB基因以及小鼠Nero2A細(xì)胞的Th基因

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