橄欖油中脂肪酸乙酯含量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法-編制說(shuō)明

《特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸乙酯含量的測(cè)定-氣相色譜-質(zhì)

譜法》

編制說(shuō)明

一、工作簡(jiǎn)況(包括任務(wù)來(lái)源、協(xié)作單位、主要工作工程、標(biāo)準(zhǔn)主要起草人

及其所做的工作等)

1任務(wù)來(lái)源（包括標(biāo)準(zhǔn)下達(dá)計(jì)劃、標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃項(xiàng)目調(diào)整、標(biāo)準(zhǔn)制修訂背景、

必要性和重要性）

1.1標(biāo)準(zhǔn)下達(dá)計(jì)劃（包括標(biāo)準(zhǔn)下達(dá)計(jì)劃文件、標(biāo)準(zhǔn)名稱、第一起草單位等）

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)關(guān)于下達(dá)2021年第二批推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃及

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)外文版計(jì)劃的通知》（國(guó)標(biāo)委發(fā)〔2021〕23號(hào)），南京海關(guān)動(dòng)植物與

食品檢測(cè)中心牽頭負(fù)責(zé)制定《特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸乙酯含量的測(cè)定-氣相色

譜-質(zhì)譜法》，項(xiàng)目編號(hào)為20212916-T-449。

1.2標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃項(xiàng)目調(diào)整（如有，請(qǐng)寫明申請(qǐng)調(diào)整的具體內(nèi)容、理由和依據(jù)

等）

無(wú)

1.3標(biāo)準(zhǔn)制修訂的背景、必要性和重要性

橄欖油（OliveOil）是以油橄欖樹的果實(shí)為原料制取的油脂。根據(jù)加工工藝

不同，可以分為初榨橄欖油和果渣油，初榨橄欖油又可根據(jù)品質(zhì)分為不同等級(jí)，

其中以特級(jí)初榨橄欖油營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高。我國(guó)是食用油大國(guó)，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，我國(guó)

對(duì)橄欖油的需求量不斷增加，僅2017年總消費(fèi)量約為60萬(wàn)噸，其中80%依賴進(jìn)

口。

然而，我國(guó)消費(fèi)者對(duì)橄欖油系列產(chǎn)品認(rèn)識(shí)有限，且特級(jí)初榨橄欖油產(chǎn)量少，

價(jià)格高。經(jīng)銷商為了推銷產(chǎn)品和謀取暴利，對(duì)橄欖油進(jìn)行夸大宣傳或以劣充好的

現(xiàn)象屢見(jiàn)不鮮。尤其進(jìn)口的橄欖油幾乎一律標(biāo)稱“特級(jí)初榨橄欖油”，這種以次充

好的橄欖油不僅嚴(yán)重侵害了消費(fèi)者的權(quán)益，還可能影響消費(fèi)者的身體健康。因此，

建立一套能對(duì)橄欖油等級(jí)進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，尤其是對(duì)特級(jí)初榨橄欖油等級(jí)進(jìn)行準(zhǔn)確

鑒定的方法，對(duì)保障消費(fèi)者權(quán)益、打擊不法行為和更好地把關(guān)國(guó)門，均具有重要

的意義。

橄欖油中脂肪酸甲酯和乙酯源于橄欖發(fā)酵過(guò)程中的甲醇和乙醇與脂肪酸發(fā)

生的酯化反應(yīng)，等級(jí)越高的橄欖油其含量越低，經(jīng)充分研究發(fā)現(xiàn)，脂肪酸乙酯類

化合物與橄欖油的等級(jí)關(guān)系尤為敏感。歐盟及國(guó)際橄欖理事會(huì)均將脂肪酸乙酯這

一指標(biāo)作為鑒定初榨橄欖油是否已達(dá)到特級(jí)初榨橄欖油等級(jí)要求的特征指標(biāo)，并

隨著研究的深入，對(duì)該指標(biāo)的限量要求多次進(jìn)行適時(shí)的修訂。歐盟

《COMMISSIONREGULATION(EEC)No2568/91onthecharacteristicsofolive

oilandolive-residueoilandontherelevantmethodsofanalysis》2019.10.20修訂版

中明確要求特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸乙酯含量≤35mg/kg，也明確了對(duì)其他等級(jí)橄

欖油沒(méi)有該指標(biāo)的限量要求。我國(guó)最新版橄欖油產(chǎn)品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T

23347-2021）也已經(jīng)引入了該指標(biāo)，但國(guó)內(nèi)尚未有相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，因此技

術(shù)上也是亟待建立相應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。

本文件擬建立特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸乙酯的精準(zhǔn)檢測(cè)方法，為特級(jí)初榨橄

欖油的等級(jí)鑒別，遏制普通初榨橄欖油充當(dāng)特級(jí)初榨橄欖油這類以次充好的亂象

提供技術(shù)支撐。

2項(xiàng)目協(xié)作單位

本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目承擔(dān)單位為南京海關(guān)動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心，協(xié)作單位有國(guó)家糧

食和物資儲(chǔ)備局標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量中心、國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院、浙江省農(nóng)業(yè)

科學(xué)院、上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司、南京理工大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院、中國(guó)

科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所等單位。

3簡(jiǎn)要起草過(guò)程

3.1任務(wù)的下達(dá)及應(yīng)對(duì)

2021年9月任務(wù)下達(dá)后，南京海關(guān)動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心組建標(biāo)準(zhǔn)起草專

項(xiàng)工作組，針對(duì)本國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定工作和協(xié)議書進(jìn)行專項(xiàng)研究，并確定了總體工

作方案。

標(biāo)準(zhǔn)起草核心團(tuán)隊(duì)自2012年起就專注于橄欖油相關(guān)國(guó)際檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法存在

的前處理繁瑣和容易出現(xiàn)干擾等問(wèn)題，通過(guò)檢索大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，結(jié)合豐富的檢

驗(yàn)分析方法開發(fā)及驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)，致力于開發(fā)相關(guān)的可優(yōu)化替代和升級(jí)的方法，并應(yīng)

用于市場(chǎng)調(diào)研。

標(biāo)準(zhǔn)研制過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)起草專項(xiàng)工作組制定了詳細(xì)的工作計(jì)劃及每周工作例

會(huì)機(jī)制，因?yàn)橐咔榫壒?，每周五采用視頻方式進(jìn)行了一次工作小結(jié)及下一步工作

安排的例會(huì)，例會(huì)上就階段性的結(jié)果、出現(xiàn)的問(wèn)題以及解決方案等進(jìn)行內(nèi)部研討，

研制過(guò)程中也不定時(shí)征求過(guò)橄欖油代表性企業(yè)以及相關(guān)專家的意見(jiàn)和建議。

3.2方法研制（標(biāo)準(zhǔn)起草階段）

第一階段，對(duì)儀器分析條件、前處理凈化柱的選擇及條件進(jìn)行摸索并最優(yōu)化，

與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法的比較等。

第二階段，對(duì)方法的檢出限，定量限，線性范圍，準(zhǔn)確度，重復(fù)性等性能指

標(biāo)進(jìn)行全方位驗(yàn)證；

第三階段，開展了方法的實(shí)驗(yàn)室之間協(xié)同性驗(yàn)證，對(duì)方法可能存在的問(wèn)題進(jìn)

行針對(duì)性微調(diào)，最終證實(shí)了方法的可行性。

3.3標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)階段、審查階段、報(bào)批階段

由項(xiàng)目牽頭單位與協(xié)作單位共同商議完成標(biāo)準(zhǔn)的征求意見(jiàn)、審查以及報(bào)批階

段所有工作。

4標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做工作

本標(biāo)準(zhǔn)主要研制人有沈偉健，陸慧媛，段章群，章虎，王利娟，張艷，王紅，

湯永興，黃新異，張弛中，朱靜怡，裴棟等人。由沈偉健負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)的總體設(shè)計(jì)思

路，由陸慧媛負(fù)責(zé)主要技術(shù)內(nèi)容的研制和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，標(biāo)準(zhǔn)草案和編制說(shuō)明

的撰寫及修改等工作，其他完成人主要負(fù)責(zé)對(duì)草案和數(shù)據(jù)進(jìn)行校核。

二、與我國(guó)有關(guān)法律法規(guī)和其他標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系

現(xiàn)行有效的橄欖油產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)為《GB/T23347橄欖油、油橄欖果渣油》，該

標(biāo)準(zhǔn)首次制定于2009年，經(jīng)歷了一次修訂，修訂后于2021年10月11日發(fā)布，

2022年5月1日實(shí)施，在新修訂的版本中新增加了特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸乙

酯的限量要求，為≤35mg/kg，對(duì)其他等級(jí)的橄欖油沒(méi)有明確要求。但國(guó)內(nèi)暫無(wú)

橄欖油中脂肪酸乙酯的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)。

三、國(guó)外有關(guān)法律、法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)情況的說(shuō)明

自2011年歐盟和國(guó)際橄欖理事會(huì)第一次對(duì)特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸甲酯和

乙酯含量提出限量要求以來(lái)，隨著研究的深入和實(shí)踐的發(fā)展，近幾年持續(xù)對(duì)該指

標(biāo)進(jìn)行了適時(shí)的修訂。比如，在(EU)2015/1830中，歐盟規(guī)定2013-2014年收成，

2014-2016年收成和2016年以后的特級(jí)初榨橄欖油中脂肪酸乙酯含量分別

≤40mg/kg，35mg/kg和30mg/kg；而到了2016.12.04的修訂版本中，再次將特級(jí)

初榨橄欖油中脂肪酸乙酯含量統(tǒng)一修訂為≤35mg/kg；而后最近的2019.10.20修訂

版本繼續(xù)維持了這一限量要求。

針對(duì)脂肪酸乙酯檢測(cè)，國(guó)際橄欖理事會(huì)2017年修訂發(fā)布COI/T.20/Doc.

no.28/Rev.2Determinationofthecontentofwaxes,fattyacidmethylestersandfatty

acidethylestersbycapillarygaschromatography。該方法采用氣相色譜法同時(shí)檢測(cè)

橄欖油樣品中的蠟含量，以及脂肪酸甲酯和乙酯含量，該方法前處理需自制硅膠

柱，操作繁瑣、耗時(shí)、且樣品平行性較差，定性方面容易有干擾、定量方法不夠

精準(zhǔn)。本文件通過(guò)對(duì)前處理進(jìn)行適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)，建立前處理更加簡(jiǎn)單，操作更加簡(jiǎn)

便，分析更加精準(zhǔn)的的分析方法。

四、標(biāo)準(zhǔn)的制（修）訂與起草原則

本文件用正己烷溶解試樣中脂肪酸乙酯，經(jīng)硅膠固相萃取柱凈化，氣相色譜

—質(zhì)譜儀分析，內(nèi)標(biāo)法定量。本文件適用于橄欖油中脂肪酸乙酯含量的測(cè)定。榨

取橄欖油過(guò)程中，不當(dāng)操作、不適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件和儲(chǔ)藏條件下可能會(huì)導(dǎo)致油橄欖

果發(fā)酵，發(fā)酵反應(yīng)主要表現(xiàn)為乙醇會(huì)和脂肪酸發(fā)生酯化反應(yīng)，生成一定量的游離

脂肪酸乙酯，國(guó)際油橄欖油理事會(huì)將脂肪酸乙酯的含量視為特級(jí)初榨橄欖油重要

的質(zhì)量參數(shù)，將其作為鑒定是否存在以初榨橄欖油充當(dāng)特級(jí)初榨橄欖油的現(xiàn)象。

以下是對(duì)文件主要技術(shù)內(nèi)容的確定。

1儀器條件確定

以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（尤其是難以分離度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）之間的分離情況作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，

分別考察不同品牌的色譜柱、不同儀器、不同升溫程序、不同定性定量離子等重

要影響因素，從而確定最優(yōu)化的儀器參數(shù)或條件。

1.14種脂肪酸乙酯目標(biāo)物檢測(cè)的氣相色譜-質(zhì)譜條件

1.1.1色譜條件

氣相色譜-質(zhì)譜儀：ThermoTrace1300-ISQQD。

色譜柱：性能相當(dāng)?shù)拿?xì)管柱（固定液：5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷，

規(guī)格：30m×0.25mm×0.25μm），考察了DB-5、DB-5MS、HP-5MS和CD-5MS

四款毛細(xì)管柱，規(guī)格均為（30m×0.25mm×0.25μm）；

進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1min后打開分流閥；

載氣：He（純度≥99.999%）；

載氣流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：1μL；

進(jìn)樣口溫度：300℃；

柱溫：不同的升溫程序，見(jiàn)表1，共10個(gè)。

表1色譜柱升溫程序

序號(hào)升溫程序

50℃,30℃/minto100℃(1min),20℃/minto200℃,5℃/minto240℃,35℃/minto310℃(3.33min)共

方法1

21min.

方法2100℃(1min),20℃/minto200℃,5℃/minto240℃,35℃/minto310℃(4min),共20min.

方法3150℃(1min),20℃/minto200℃,4℃/minto240℃(1min),35℃/minto310℃(3.5min),共20min.

方法4150℃(1min),20℃/minto200℃,3.5℃/minto240℃(2min),35℃/minto310℃(2min),共20.93min.

方法5150℃(1min),15℃/minto200℃,3.5℃/minto240℃(1min),35℃/minto310℃(2min),共20.76min.

方法6150℃(1min),20℃/minto200℃,3℃/minto240℃(1min),35℃/minto310℃(2min),共21.83min.

方法7150℃(1min),20℃/minto200℃,2.5℃/minto240℃(1.5min),35℃/minto310℃(2min),共25min.

方法8130℃(1min),20℃/minto200℃,3.5℃/minto240℃(2min),35℃/minto310℃(2min),共21.93min.

方法9120℃(1min),20℃/minto200℃,3.5℃/minto240℃(2min),35℃/minto310℃(2min),共22.43min.

1.1.2質(zhì)譜條件

離子源：EI源；

電子能量：70eV；

離子源溫度：280℃；

接口溫度：280℃；

溶劑延遲：5min。

監(jiān)測(cè)方式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式；

1.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

本次實(shí)驗(yàn)所用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息見(jiàn)表2。

表2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息

名稱CAS貨號(hào)純度品牌

棕櫚酸乙酯（C16:0E）628-97-7CDAA-251016E-1g95.0%CNW

亞油酸乙酯（C18:2E）544-35-4CDAA-253186E-1g99.0%CNW

油酸乙酯（C18:1E）111-62-6CDAA-253182E-1g99.0%CNW

硬脂酸乙酯（C18:0E）111-61-5CDAA-251018E-1g99.0%CNW

十七烷酸乙酯（C17:0E）14010-23-2CDEZ-FAEE-015N100.0%AccuStandard

十七碳烯酸乙酯(順-10)（C17:1E）150324-16-6CDDE-U-42-E-500MG100.0%Nu-Chek-PREP

單標(biāo)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯、油酸乙酯、硬脂

酸乙酯、十七烷酸乙酯和十七碳烯酸乙酯(順-10)六種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各10mg（精確

到0.01mg）于10mL容量瓶中，用正庚烷溶解并定容，配制成1.0mg/mL。

外標(biāo)混合中間溶液：將棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯、油酸乙酯、硬脂酸乙酯

四種脂肪酸乙酯單標(biāo)儲(chǔ)備溶液用正庚烷稀釋成50μg/mL。

十七碳烯酸乙酯(順-10)內(nèi)標(biāo)中間溶液：將十七碳烯酸乙酯(順-10)單標(biāo)儲(chǔ)備

溶液用正庚烷稀釋成50μg/mL。

十七烷酸乙酯內(nèi)標(biāo)中間溶液：將十七烷酸乙酯單標(biāo)儲(chǔ)備溶液用正庚烷稀釋

成50μg/mL。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取外標(biāo)混合中間溶液和內(nèi)標(biāo)中間溶液，用正己

烷逐級(jí)稀釋成外標(biāo)濃度為0.02~0.8μg/mL，兩種內(nèi)標(biāo)濃度均為0.5μg/mL的標(biāo)

準(zhǔn)工作溶液。

1.3結(jié)果與分析

1.3.1色譜柱和升溫程序條件的確定

以濃度為0.5μg/mL的6種脂肪酸乙酯混標(biāo)監(jiān)測(cè)6種脂肪酸乙酯的出峰情

況，初步結(jié)果顯示6種目標(biāo)物峰形良好，其中棕櫚酸乙酯、十七碳烯酸乙酯(順

-10)、十七烷酸乙酯和硬脂酸乙酯與其它相鄰目標(biāo)物分離度較好，所以重點(diǎn)關(guān)

注了亞油酸乙酯和油酸乙酯之間的分離度，為盡可能的提高分離度，我們主要

考察了不同升溫程序和不同氣相色譜柱的差異，結(jié)果詳見(jiàn)表3，顯示：不同品

牌的色譜柱對(duì)亞油酸乙酯和油酸乙酯分離度稍有差異，其中DB-5MS色譜柱對(duì)

亞油酸乙酯和油酸乙酯的分離效果最好，在多個(gè)升溫程序下，分離度均大于

1.5；DB-5和CD-5MS在升溫程序7下的分離度最佳。為了使更多品牌的色譜

柱均能達(dá)到較好的分離效果，最終確定以升溫程序7作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的條件。

表3不同色譜柱、不同升溫條件亞油酸乙酯和油酸乙酯的分離度

色譜柱方法1方法2方法3方法4方法5方法6方法7方法8方法9

DB-50.60.81.01.11.11.21.31.11.1

DB-5MS1.2/1.31.71.51.51.51.41.4

HP-5MS0.90.9/1.1/1.11.1//

CD-5MS0.8/1.11.01.21.21.21.11.1

備注：“/”表示未驗(yàn)證。

1.3.2定性定量離子的確定

用GC-MS儀器在全掃描模式下對(duì)濃度為0.5μg/mL的6種脂肪酸乙酯混

標(biāo)進(jìn)行分析，將所得的質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果見(jiàn)圖1~圖6。

圖1棕櫚酸乙酯質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)比對(duì)圖

圖2十七碳烯酸乙酯(順-10)質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)比對(duì)圖

圖3十七烷酸乙酯質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)比對(duì)圖

圖4亞油酸乙酯質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)比對(duì)圖

圖5油酸乙酯質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)比對(duì)圖

圖6硬脂酸乙酯質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)比對(duì)圖

本著目標(biāo)物定性和定量離子選擇時(shí)盡可能選擇有特征性、質(zhì)荷比大、響應(yīng)

高、干擾小的原則，初步確定了棕櫚酸乙酯、硬脂酸乙酯、十七碳烯酸乙酯(順

-10)和十七烷酸乙酯的定性和定量離子，見(jiàn)表4。

表4棕櫚酸乙酯、硬脂酸乙酯、十七碳烯酸乙酯(順-10)和十七烷酸乙酯的定性定量離子

名稱定性定量離子

棕櫚酸乙酯213,241*,255,284

十七碳烯酸乙酯(順-10)166,208,250*,296

十七烷酸乙酯213,253,255*,298

硬脂酸乙酯213,269*,283,312

注：*定量離子。

采用DB-5色譜柱，升溫程序7，對(duì)濃度0.5μg/mL的6種脂肪酸乙酯混標(biāo)

進(jìn)行測(cè)試，因分離度可能會(huì)干擾亞油酸乙酯和油酸乙酯的定性和定量，對(duì)在不

同定性離子下這兩種物質(zhì)的的相對(duì)豐度進(jìn)行了詳細(xì)分析，詳見(jiàn)圖7和圖8，干

擾及響應(yīng)情況詳見(jiàn)表5。經(jīng)綜合考慮，選擇干擾最小、響應(yīng)最高的262作為亞

油酸乙酯的定量離子，178、220、308作為其定性離子；222作為油酸乙酯定

量離子，180、264、310作為其定性離子。脂肪酸乙酯TIC譜圖見(jiàn)圖9。

圖7亞油酸乙酯定性定量離子相對(duì)豐度（DB-5色譜柱、升溫程序7、濃度0.5μg/mL）

圖8油酸乙酯定性定量離子相對(duì)豐度（DB-5色譜柱、升溫程序7、濃度0.5μg/mL）

表5亞油酸乙酯和油酸乙酯定性定量離子

名稱響應(yīng)情況干擾情況定性定量離子

亞油酸乙酯262>178>220>308262<308≈178<220178,220,262*,308

油酸乙酯264>222>180>310222(無(wú))=310(無(wú))<180≈264180,222*,264,310

注：*定量離子。

圖9ThermoTrace1300-ISQQD分析的脂肪酸乙酯TIC譜圖

2內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的確定

為了盡可能減少前處理操作引起的誤差，并提高儀器分析時(shí)進(jìn)樣重復(fù)性和

定量精準(zhǔn)度，本方法采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。根據(jù)目標(biāo)物理化性質(zhì)，擬選擇

分子結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相似，橄欖油基體中無(wú)本底的十七烷酸乙酯和十七碳烯酸乙酯

(順-10)兩種物質(zhì)作為備選，并對(duì)這兩種內(nèi)標(biāo)進(jìn)行考察，在保證基質(zhì)干擾程度一

致的前提下，計(jì)算內(nèi)標(biāo)法定量的加標(biāo)回收率，以選擇最佳內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。

2.1樣品前處理

選擇3個(gè)不同品牌的特級(jí)初榨橄欖油樣品，按文件方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，

并在凈化后復(fù)溶時(shí)加入內(nèi)標(biāo)或外標(biāo)，制備空白樣和加標(biāo)樣，每個(gè)橄欖油品牌空

白樣品和加標(biāo)樣品各做6個(gè)平行?？瞻讟悠芳尤?0μL50μg/mL十七烷酸乙酯

（添加水平為50mg/kg）溶液和50μL50μg/mL的十七碳烯酸乙酯(順-10)（添

加水平為50mg/kg）溶液；加標(biāo)樣品在加入上述內(nèi)標(biāo)的同時(shí)，加入20μL50μg/mL

4種外標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（添加水平為20mg/kg）。然后分別加入正己烷，定容

至5mL，充分混勻后，過(guò)濾膜，取部分用GC-MS分析。

采用1.1中最優(yōu)的儀器條件進(jìn)行分析，具體如下：

儀器：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀器，ThermoGC-MSTrace1300-ISQQD；

色譜柱：DB-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）；

柱溫：初始溫度150℃，以20℃/min升至200℃，以2.5℃/min升至240℃，

保持1.5min，以35℃/min升至310℃，保持2min。

監(jiān)測(cè)方式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式，具體參數(shù)見(jiàn)表4和表5.

2.2結(jié)果與分析

加標(biāo)回收率測(cè)試結(jié)果詳見(jiàn)表6，總結(jié)如下：

①4種脂肪酸酸乙酯全部以十七碳烯酸乙酯(順-10)為內(nèi)標(biāo)加標(biāo)回收率為85

~110%；

②4種脂肪酸酸乙酯全部以十七烷酸乙酯為內(nèi)標(biāo)加標(biāo)回收率為95~125%；

③棕櫚酸乙酯和硬脂酸乙酯以十七烷酸乙酯為內(nèi)標(biāo)，亞油酸乙酯和油酸乙

酯以十七碳烯酸乙酯(順-10)為內(nèi)標(biāo)，加標(biāo)回收率為92~110%；

上述結(jié)果表明，在橄欖油基質(zhì)中，與十七碳烯酸乙酯(順-10)比較，十七烷

酸乙酯作內(nèi)標(biāo)時(shí)，整體目標(biāo)物的加標(biāo)回收率偏高，尤其對(duì)于不飽和的亞油酸乙

酯和油酸乙酯已經(jīng)不符合GB/T27417對(duì)于這一添加水平（20mg/kg）的回收率

要求（90%~110%），因而最終確定采用加雙內(nèi)標(biāo)的方法，即：飽和脂肪酸乙

酯（棕櫚酸乙酯和硬脂酸乙酯）選擇飽和的十七烷酸乙酯作內(nèi)標(biāo)，不飽和脂肪

酸乙酯（亞油酸乙酯和油酸乙酯）選擇不飽和的十七碳烯酸乙酯(順-10)作內(nèi)標(biāo)。

表6不同橄欖油基質(zhì)選用不同的內(nèi)標(biāo)時(shí)4種脂肪酸乙酯加標(biāo)回收率（%，n=6）

內(nèi)標(biāo)：十七碳烯酸乙酯(順-10)內(nèi)標(biāo)：十七烷酸乙酯

油樣

棕櫚酸乙亞油酸乙油酸乙硬脂酸乙

基質(zhì)棕櫚酸乙酯亞油酸乙酯油酸乙酯硬脂酸乙酯

酯酯酯酯

樣品192.492.9109.299.096.095.8119.7101.7

樣品289.0103.0109.098.796.0110.8119.8106.0

樣品385.9109.798.090.796.4122.9111.4101.5

3不同品牌脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較

選擇了四個(gè)不同品牌（安譜，Anpel；色譜科，Supelco；Larodan和CATO）

的4種脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對(duì)其GC-MS響應(yīng)情況進(jìn)行比較，采用外標(biāo)法以

驗(yàn)證不同品牌脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的差異，具體的脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品貨號(hào)、批

號(hào)、純度等信息詳見(jiàn)表7。

表7四個(gè)品牌的4種脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品信息

品牌名稱縮寫貨號(hào)批號(hào)純度

Anpel棕櫚酸乙酯C16:0ECDAA-251016E-1gP386000595.0%

亞油酸乙酯C18:2ECDAA-253186E-1gI943001099.0%

油酸乙酯C18:1ECDAA-253182E-1gG880001099.0%

硬脂酸乙酯C18:0ECDAA-251018E-1g5595001099.0%

棕櫚酸乙酯C16:0ECDGI-30-1600-13-1gX488:899.0%

亞油酸乙酯C18:2ECDGI-30-1802-13-1gX010:199.0%

Larodan

油酸乙酯C18:1ECDGI-30-1801-13-1gX568:999.0%

硬脂酸乙酯C18:0ECDGI-30-1800-13-1gS389:1099.0%

棕櫚酸乙酯C16:0ECDAF-67107-250MGBCCB843498.5%

亞油酸乙酯C18:2ECDAF-73539-1MLBCBW043499.0%

Supelco

油酸乙酯C18:1ECDAF-55441-250MGBCCC454897.0%

硬脂酸乙酯C18:0ECDAB-18377-100MGBCBZ847798.5%

棕櫚酸乙酯C16:0ECDBD-CCFD2001530418-RA-000199.3%

亞油酸乙酯C18:2ECDBD-CCFD2007720416-RA-000299.8%

CATO

油酸乙酯C18:1ECDBD-CCFD2007730417-RA-000490.2%

硬脂酸乙酯C18:0ECDBD-CCFD2002000418-RA-000296.4%

3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

采用逐級(jí)稀釋的方式配制脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，不

同品牌標(biāo)準(zhǔn)品的濃度信息詳見(jiàn)表8。

單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液用正庚烷配制，混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

用正己烷配制。

表8四個(gè)品牌的4種脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品濃度信息

稱量質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度

品牌名稱縮寫

（mg）（μg/mL）（μg/mL）

棕櫚酸乙酯C16:0E10.32980.400.4902

亞油酸乙酯C18:2E10.01990.990.4955

Anpel

油酸乙酯C18:1E10.01990.990.4955

硬脂酸乙酯C18:0E10.181007.820.5039

棕櫚酸乙酯C16:0E9.70960.30.4802

亞油酸乙酯C18:2E10.111000.890.5004

Larodan

油酸乙酯C18:1E10.111000.890.5004

硬脂酸乙酯C18:0E9.85975.150.4876

棕櫚酸乙酯C16:0E10.161000.760.5004

亞油酸乙酯C18:2E9.99989.010.4945

Supelco

油酸乙酯C18:1E10.15984.550.4923

硬脂酸乙酯C18:0E10.201004.700.5024

棕櫚酸乙酯C16:0E10.081000.940.5005

亞油酸乙酯C18:2E10.031000.990.5005

CATO

油酸乙酯C18:1E10.03904.710.4524

硬脂酸乙酯C18:0E10.37999.670.4998

3.2儀器條件

同2.1。

3.3結(jié)果與分析

主要從以下三個(gè)方面進(jìn)行比較：

—目標(biāo)物峰型，亞油酸乙酯和油酸乙酯的分離度；

—保留時(shí)間穩(wěn)定情況：每個(gè)工作溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，對(duì)4個(gè)品牌的脂肪酸

乙酯TIC圖進(jìn)行疊加比較；

—連續(xù)進(jìn)樣的精密度：對(duì)每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

不同品牌4種脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)TIC圖詳見(jiàn)圖11至圖14，4個(gè)品牌6

針樣品的疊加譜圖詳見(jiàn)圖15，6針樣品峰面積結(jié)果詳見(jiàn)表9和表10。TIC圖結(jié)

果顯示，目標(biāo)物峰形尖銳，亞油酸乙酯和油酸乙酯分離度較好；疊加譜圖結(jié)果

提示，樣品保留時(shí)間穩(wěn)定，重復(fù)性良好；從表中峰面積結(jié)果可以看出，不同品

牌4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，relativestandarddeviation）均

小于5%，表明4種脂肪酸乙酯在文件的儀器條件下精密度良好，有著較好的

重復(fù)性。

圖11四種脂肪酸乙酯混標(biāo)TIC圖（品牌：Anpel；濃度：0.5μg/mL）

圖12四種脂肪酸乙酯混標(biāo)TIC圖（品牌：Larodan；濃度：0.5μg/mL）

圖13四種脂肪酸乙酯混標(biāo)TIC圖（品牌：Supelco；濃度：0.5μg/mL）

圖14四種脂肪酸乙酯混標(biāo)TIC圖（品牌：CATO；濃度：0.5μg/mL）

圖15四種品牌的0.5μg/mL脂肪酸乙酯混標(biāo)溶液TIC疊加圖

表9四個(gè)品牌的棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯的峰面積（counts*min）精密度比較表

棕櫚酸乙酯亞油酸乙酯

檢測(cè)序號(hào)

AnpelLarodanSupelcoCATOAnpelLarodanSupelcoCATO

173076098699169422005202018181891

273616151674372262024208518622068

370736452673368761989213218861936

471256036761975181837203618632090

566146573701569801825223818142047

673776011708766972017212418441956

均值71436220703170401950210618481998

RSD（%）4.03.84.64.14.83.71.54.1

表10四個(gè)品牌的油酸乙酯和硬脂酸乙酯的峰面積（counts*min）精密度比較表

油酸乙酯硬脂酸乙酯

檢測(cè)序號(hào)

AnpelLarodanSupelcoCATOAnpelLarodanSupelcoCATO

142934183393033346157605460045974

243954176389037006579570557656419

341634266387835746127547158546003

441044054423834836506550065286517

541014160401436126608583163175958

644983926391334396434543160115926

均值42594128397735246402566560806133

RSD（%）3.92.93.43.73.34.34.84.3

表11四個(gè)品牌的脂肪酸乙酯單位濃度的峰面積（counts*min）對(duì)比數(shù)據(jù)

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)種類AnpelLarodanSupelcoCATO平均值RSD%

棕櫚酸乙酯14571129551405214066139114.9

亞油酸乙酯393442083737399239684.9

油酸乙酯859582488079779081784.1

硬脂酸乙酯12704116191210312270121743.7

將四個(gè)品牌的脂肪酸乙酯峰面積均按照實(shí)際濃度折算到單位濃度（1μg/mL）

時(shí)的峰面積進(jìn)行對(duì)比，數(shù)據(jù)見(jiàn)表11。從表中可以看出，折算到單位濃度后四個(gè)

品牌的4種脂肪酸乙酯峰面積的RSD均小于5%，說(shuō)明四個(gè)品牌的棕櫚酸乙酯、

亞油酸乙酯、油酸乙酯、硬脂酸乙酯濃度和響應(yīng)無(wú)明顯差異，選用安譜品牌的標(biāo)

準(zhǔn)物質(zhì)開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4脂肪酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性

參考SN/T0001-20168.7.2溶液中分析物的穩(wěn)定性測(cè)試要求進(jìn)行驗(yàn)證。具

體測(cè)定計(jì)劃和保存時(shí)間詳見(jiàn)表12和表13。

表12標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性測(cè)定計(jì)劃

條件-20℃+4℃+20℃

避光√√√

光照××√

表13標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性測(cè)定保存時(shí)間

標(biāo)液1周2周4周3月6月

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液√√√√√

標(biāo)準(zhǔn)中間溶液√√√√√

標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液√√√××

注：√表示需要開展相關(guān)條件的穩(wěn)定性測(cè)試，×表示未開展相關(guān)條件的穩(wěn)定性測(cè)試。

4.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息見(jiàn)表2，配制方式見(jiàn)1.2。

4.2操作步驟

按照表12和表13的要求，將新鮮制備的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和標(biāo)準(zhǔn)中間溶液分

別分裝成體積相同的20等份，將系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液各分裝成體積相同的12等

份，存放在玻璃樣品瓶中，用實(shí)心蓋子密封，貼上標(biāo)簽，按要求保存。到指定

的時(shí)間后取樣，分別與重新稱量制備的相同濃度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液、標(biāo)準(zhǔn)中間溶液

品和系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一起進(jìn)樣分析。

4.3儀器條件

為了減少稀釋所帶來(lái)的誤差，同時(shí)考慮儀器的靈敏度和檢出限，對(duì)于單標(biāo)

儲(chǔ)備溶液和外/內(nèi)標(biāo)中間溶液采用GC-FID法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)于系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

采用GC-MS法進(jìn)行測(cè)定。具體條件如下：

4.3.1氣相色譜條件

氣相色譜儀：ThermoTrace1300QD，配FID檢測(cè)器。

色譜柱：DB-5（30m×0.25mm×0.25μm）。

載氣：氦氣，純度99.999%。

載氣流速：1.0mL/min。

進(jìn)樣口溫度：300℃；

進(jìn)樣量：1μL。

進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣，1min后打開分流閥。

柱溫：初始溫度150℃，保持1min，以20℃/min升至200℃，以2.5℃/min

升至240℃保持1.5min，以35℃/min升至310℃，保持2min。

FID檢測(cè)器：300℃。

4.3.2氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用條件

同2.1。

4.4結(jié)果計(jì)算和分析

以分析時(shí)新鮮配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為100%，計(jì)算在不同條件下保存相應(yīng)時(shí)

間后的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相對(duì)新鮮配制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度百分比，計(jì)算公式為：

C100

剩余分析物（%）=i

C新配

式中：

Ci—時(shí)間點(diǎn)i的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度；

C新配——新配標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和標(biāo)準(zhǔn)中間溶液的剩余分析物結(jié)果詳見(jiàn)詳見(jiàn)表14和15，四

種脂肪酸乙酯的不同濃度工作溶液剩余分析物結(jié)果詳見(jiàn)表16~19。

表14標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液剩余分析物結(jié)果（濃度：1mg/mL；單位：%）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保存條件1周2周4周3月6月

+4℃避光101.9101.0101.2100.9101.4

-20℃避光100.6100.5102.1101.9101.8

棕櫚酸乙酯

+20℃避光100.8101.5100.6101.7101.0

+20℃光照100.6101.0102.9104.5100.5

+4℃避光100.7100.7101.4101.4101.8

-20℃避光101.3101.9103.7103.0102.0

亞油酸乙酯

+20℃避光100.6100.8100.8104.3101.5

+20℃光照100.3100.5101.1102.599.4

+4℃避光99.9100.6101.2102.099.4

-20℃避光100.3100.4102.9103.599.6

油酸乙酯

+20℃避光100.4100.4101.3103.4100.7

+20℃光照99.599.9100.4104.4100.7

+4℃避光103.7100.0102.6104.099.8

-20℃避光104.0100.6103.2101.5100.6

硬脂酸乙酯

+20℃避光103.8101.0101.899.199.1

+20℃光照103.5100.7103.497.598.8

+4℃避光99.1100.398.4101.1100.8

-20℃避光100.6103.7102.099.7102.4

十七碳烯酸乙酯(順-10)

+20℃避光100.5103.498.2102.6101.7

+20℃光照99.498.298.4103.5103.3

+4℃避光99.9100.2103.997.1102.0

十七烷酸乙酯

-20℃避光100.1101.1104.898.1100.9

+20℃避光100.9100.1101.899.6102.9

+20℃光照100.6100.9100.597.6100.8

表15標(biāo)準(zhǔn)中間溶液剩余分析物結(jié)果（濃度：50μg/mL；單位：%）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保存條件1周2周4周3月6月

+4℃避光99.2100.6102.8102.9102.1

-20℃避光98.8101.1104.4102.5103.5

棕櫚酸乙酯

+20℃避光98.2100.2103.6100.8100.0

+20℃光照99.5100.4102.8102.699.7

+4℃避光102.4101.1100.499.7103.8

-20℃避光102.5101.8102.6101.6104.7

亞油酸乙酯

+20℃避光101.6100.3100.897.998.2

+20℃光照102.5101.0100.8101.9100.2

+4℃避光98.7100.0102.4102.7103.5

-20℃避光99.9100.4104.3102.6104.6

油酸乙酯

+20℃避光98.999.2103.1101.2100.9

+20℃光照98.899.8102.3102.9100.6

+4℃避光100.0100.799.399.5103.5

-20℃避光99.8101.2100.899.2104.8

硬脂酸乙酯

+20℃避光99.1100.1100.397.6101.2

+20℃光照100.5100.799.799.0100.3

+4℃避光101.296.8100.399.9102.4

-20℃避光98.2100.7104.7101.1102.0

十七碳烯酸乙酯(順-10)

+20℃避光101.198.595.9100.2102.3

+20℃光照100.597.095.9100.8100.8

+4℃避光100.4104.2102.0102.6100.5

-20℃避光99.3104.8102.2101.8100.8

十七烷酸乙酯

+20℃避光101.2104.0104.1102.0101.3

+20℃光照102.6103.8102.0101.2102.4

表14和表15結(jié)果表明：棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯、油酸乙酯、硬脂酸乙

酯、十七碳烯酸乙酯(順-10)和十七烷酸乙酯6種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的儲(chǔ)備溶液和中間溶

液在+4℃避光、-20℃避光、+20℃避光和+20℃光照4種條件下，保存6個(gè)月

內(nèi)，剩余分析物含量基本無(wú)變化。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備溶液剩余分析物在97%~105%，

標(biāo)準(zhǔn)中間溶液剩余分析物在96%~105%，因此標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備溶液和中間溶液

的有效期建議為6個(gè)月。

表16標(biāo)準(zhǔn)工作溶液剩余分析物結(jié)果（棕櫚酸乙酯，單位：%）

濃度μg/mL保存條件1周2周4周

+4℃避光86.985.981.5

-20℃避光85.387.286.8

0.05

+20℃避光87.684.582.0

+20℃光照85.181.781.6

+4℃避光93.294.896.4

-20℃避光93.996.298.3

0.1

+20℃避光94.196.291.9

+20℃光照98.993.795.0

+4℃避光101.6103.995.3

-20℃避光103.0104.8103.4

0.2

+20℃避光109.7100.294.8

+20℃光照101.7102.694.1

+4℃避光94.498.191.3

-20℃避光