《環(huán)境微生物宏基因組檢測高通量測序法gbt40226-2021》詳細(xì)解讀

《環(huán)境微生物宏基因組檢測高通量測序法gb/t40226-2021》詳細(xì)解讀contents目錄1范圍2規(guī)范性引用文件3術(shù)語和定義4縮略語5原理6試驗條件7試劑8儀器設(shè)備contents目錄9樣品10試驗步驟11試驗報告12質(zhì)量控制附錄A(規(guī)范性)糞便樣品采集、保存、運輸方法附錄B(規(guī)范性)土壤樣品采集、保存、運輸方法附錄C(規(guī)范性)水體樣品采集、保存、運輸方法contents目錄附錄D(資料性)樣品信息單附錄E(資料性)DNA樣品的完整性圖譜和質(zhì)量級別分類附錄F(資料性)參考數(shù)據(jù)庫參考文獻(xiàn)011范圍適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了環(huán)境微生物宏基因組檢測的高通量測序方法，包括樣品采集、前處理、測序、數(shù)據(jù)分析和報告等方面的要求。適用于環(huán)境微生物多樣性分析、功能基因挖掘、微生物群落結(jié)構(gòu)解析等研究與應(yīng)用。0102不適用范圍不包含具體的測序平臺、試劑和儀器設(shè)備的選擇與使用，需根據(jù)實際情況進(jìn)行適配和優(yōu)化。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于臨床樣本的微生物宏基因組檢測。在使用本標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)確保操作人員具備相應(yīng)的專業(yè)知識和技能，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。實驗室應(yīng)建立并實施嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系，確保檢測過程的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化，降低實驗誤差和批間差異。注意事項022規(guī)范性引用文件引用文件的目的確保標(biāo)準(zhǔn)的一致性和準(zhǔn)確性通過引用其他規(guī)范性文件，可以確保本標(biāo)準(zhǔn)的各項規(guī)定與其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)保持一致，避免出現(xiàn)矛盾或重復(fù)的情況。提供技術(shù)支持和依據(jù)引用文件為本標(biāo)準(zhǔn)提供了必要的技術(shù)支持和依據(jù)，使得本標(biāo)準(zhǔn)的實施更加有據(jù)可循。GB/TXXXX.X-XXXX該引用文件是環(huán)境微生物宏基因組檢測的基礎(chǔ)性標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定了相關(guān)的術(shù)語和定義、樣品采集、保存和運輸?shù)纫?，以及高通量測序方法的原則和操作流程。GB/TXXXX.X-XXXX另一個重要的引用文件，它詳細(xì)描述了高通量測序的數(shù)據(jù)分析方法和質(zhì)量控制要求，包括序列拼接、基因注釋、物種分類等關(guān)鍵步驟，以及數(shù)據(jù)解讀和報告撰寫的指導(dǎo)原則。主要引用的文件明確指出引用文件適用于環(huán)境微生物宏基因組檢測的高通量測序法，包括但不限于各種環(huán)境樣品（如土壤、水體、空氣等）中微生物群落的多樣性分析、功能基因挖掘以及環(huán)境微生物與環(huán)境因子之間的關(guān)聯(lián)研究等。強調(diào)在使用引用文件時，應(yīng)嚴(yán)格按照其規(guī)定的操作流程和質(zhì)量要求進(jìn)行實驗操作和數(shù)據(jù)分析，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時，也鼓勵在使用引用文件的基礎(chǔ)上，根據(jù)實際需求和技術(shù)發(fā)展進(jìn)行必要的優(yōu)化和改進(jìn)。適用范圍使用要求引用文件的適用范圍和使用要求033術(shù)語和定義環(huán)境微生物宏基因組指特定環(huán)境樣品中全部微生物的基因組總和，包括可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的微生物的基因。環(huán)境微生物宏基因組研究有助于了解微生物群落的多樣性、結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而揭示微生物與環(huán)境之間的相互作用及其對環(huán)境的影響。環(huán)境微生物宏基因組重要性定義高通量測序又稱下一代測序（NextGenerationSequencing,NGS），是指能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定，且一般讀長較短，但可重復(fù)測序，以提供豐富的基因組、轉(zhuǎn)錄組及表觀遺傳組等信息的技術(shù)。定義高通量測序技術(shù)具有通量高、準(zhǔn)確性高、靈敏度高和成本低等優(yōu)勢，已廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和表觀遺傳學(xué)等領(lǐng)域。技術(shù)特點高通量測序定義測序深度是指測序得到的總數(shù)據(jù)量與待測基因組大小的比值，它反映了基因組被測序的覆蓋程度。影響因素測序深度受多個因素影響，包括測序儀的通量、測序質(zhì)量、樣品中微生物的復(fù)雜程度以及實驗設(shè)計等。提高測序深度有助于更全面地揭示微生物群落的多樣性和功能。測序深度宏基因組學(xué)分析是指利用高通量測序技術(shù)對環(huán)境微生物宏基因組進(jìn)行測序，并通過生物信息學(xué)方法對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，以揭示微生物群落的組成、結(jié)構(gòu)、功能和動態(tài)變化等規(guī)律的研究方法。定義宏基因組學(xué)分析在環(huán)境科學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價值，有助于深入了解微生物與環(huán)境之間的相互作用關(guān)系，為解決實際環(huán)境問題提供科學(xué)依據(jù)。應(yīng)用領(lǐng)域宏基因組學(xué)分析044縮略語NextGenerationSequencing，下一代測序技術(shù)，也稱為高通量測序技術(shù)。NGSRibosomalRNA，核糖體RNA，常用于微生物多樣性分析中的標(biāo)記基因。rRNAOperationalTaxonomicUnit，操作分類單元，是微生物多樣性研究中的一個基本單位。OTUQuantitativeInsightsIntoMicrobialEcology，微生物生態(tài)學(xué)量化分析軟件，用于處理和分析微生物組測序數(shù)據(jù)。QIIME常見的縮略語宏基因組，指特定環(huán)境中全部微生物的基因組總和。MetagenomeMicrobiomeAMPLICONFunctionalgene微生物組，指特定環(huán)境中全部微生物及其與宿主和環(huán)境間的相互作用。擴增子，指通過PCR擴增得到的特定基因或基因片段的集合，常用于微生物多樣性研究。功能基因，指微生物基因組中具有特定功能的基因，可反映微生物的代謝潛力和環(huán)境適應(yīng)能力。與環(huán)境微生物相關(guān)的縮略語雙端測序，指從DNA分子的兩端同時進(jìn)行測序，可獲得更長的序列信息和更高的測序準(zhǔn)確性。Paired-end單端測序，指僅從DNA分子的一端進(jìn)行測序，相對于雙端測序，其讀長較短，但測序成本較低。Single-end讀長，指測序儀單次測序所得到的核苷酸序列的長度。Read測序深度，指測序數(shù)據(jù)覆蓋整個基因組的程度，測序深度越高，基因組覆蓋越全面，變異檢測準(zhǔn)確性越高。Coverage測序技術(shù)相關(guān)的縮略語055原理宏基因組學(xué)是研究環(huán)境中全部微生物基因組的總和，包括可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的微生物。定義無需純培養(yǎng)，直接提取環(huán)境樣品中的總DNA進(jìn)行研究。特點能夠更全面、真實地反映環(huán)境微生物群落的多樣性、結(jié)構(gòu)和功能。優(yōu)勢宏基因組學(xué)概念高通量測序技術(shù)又稱下一代測序技術(shù)，能夠一次對數(shù)十萬到數(shù)百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定。定義特點應(yīng)用高通量、高效率、低成本。廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、宏基因組學(xué)等領(lǐng)域。030201高通量測序技術(shù)高通量測序與數(shù)據(jù)分析使用高通量測序儀對文庫進(jìn)行測序，獲得海量的序列數(shù)據(jù)，進(jìn)而進(jìn)行生物信息學(xué)分析以揭示微生物群落的多樣性、結(jié)構(gòu)和功能。樣品采集與處理采集環(huán)境樣品，如土壤、水樣等，進(jìn)行預(yù)處理以去除雜質(zhì)。DNA提取與質(zhì)控從樣品中提取微生物總DNA，并進(jìn)行質(zhì)量控制以確保DNA的完整性和純度。高通量測序文庫構(gòu)建將DNA片段化后連接接頭，構(gòu)建適合高通量測序的文庫。宏基因組檢測流程066試驗條件123實驗室應(yīng)滿足無菌操作要求，具備相應(yīng)的空氣凈化系統(tǒng)，以確保試驗過程中無外源微生物污染。實驗室應(yīng)設(shè)立獨立的樣本處理區(qū)、試劑準(zhǔn)備區(qū)、測序區(qū)及數(shù)據(jù)分析區(qū)，以避免交叉污染。實驗室應(yīng)定期進(jìn)行環(huán)境微生物監(jiān)測，并記錄監(jiān)測結(jié)果，確保實驗室環(huán)境符合試驗要求。6.1實驗室環(huán)境要求03實驗室應(yīng)配備必要的生物安全柜、滅菌設(shè)備等，以保障試驗過程的安全性。01應(yīng)使用經(jīng)過驗證的高通量測序儀，確保測序結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。02樣本處理過程中所使用的儀器設(shè)備，如離心機、PCR儀等，應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)和維護，以確保其性能穩(wěn)定。6.2儀器設(shè)備要求樣本處理過程中所使用的試劑和耗材，如DNA提取試劑盒、PCR擴增試劑等，應(yīng)選用經(jīng)過驗證的品牌和型號。所有試劑和耗材應(yīng)在有效期內(nèi)使用，過期試劑和耗材應(yīng)及時更換。應(yīng)使用高質(zhì)量的測序試劑，以確保測序反應(yīng)的穩(wěn)定性和效率。6.3試劑與耗材要求試驗人員應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)背景和技能，熟悉高通量測序技術(shù)及相關(guān)操作規(guī)范。試驗人員應(yīng)定期進(jìn)行培訓(xùn)和考核，以確保其具備完成試驗任務(wù)的能力。試驗人員在試驗過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守實驗室安全規(guī)定，做好個人防護工作。6.4試驗人員要求077試劑根據(jù)實驗需求選擇適合的試劑，確保試劑的純度、穩(wěn)定性和可靠性。優(yōu)先選擇經(jīng)過驗證的、高質(zhì)量的試劑品牌，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。注意試劑的保存條件和有效期，避免使用過期或變質(zhì)的試劑。7.1試劑選擇010203嚴(yán)格按照試劑說明書或?qū)嶒灧桨高M(jìn)行試劑的配制，確保配比的準(zhǔn)確性。在配制過程中，注意無菌操作，避免污染試劑。配制好的試劑應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記，包括名稱、濃度、配制日期等信息，方便后續(xù)使用和管理。7.2試劑配制7.3試劑使用注意事項01在使用試劑前，應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑說明書，了解試劑的性質(zhì)、用途和使用方法。02遵守實驗室安全規(guī)范，正確佩戴防護用品，確保人身安全。避免浪費試劑，合理使用并妥善保存剩余試劑，減少對環(huán)境的影響。03010203定期對試劑進(jìn)行質(zhì)量控制檢測，確保試劑的性能符合實驗要求。建立試劑使用記錄和管理制度，追蹤試劑的使用情況和效果，及時發(fā)現(xiàn)問題并進(jìn)行改進(jìn)。與試劑供應(yīng)商保持良好的溝通與合作，及時反饋問題并尋求技術(shù)支持。7.4試劑的質(zhì)量控制與評估088儀器設(shè)備8.1儀器設(shè)備概述01本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了環(huán)境微生物宏基因組檢測所需的主要儀器設(shè)備。02儀器設(shè)備是保障宏基因組檢測準(zhǔn)確性和可靠性的關(guān)鍵因素。03選用合適的儀器設(shè)備，能夠提高檢測效率，降低實驗誤差。03常見的核酸提取設(shè)備包括自動化核酸提取儀、手動核酸提取工具等。01核酸提取是宏基因組檢測的首要步驟，需使用專用的核酸提取設(shè)備。02核酸提取設(shè)備應(yīng)具備高效、穩(wěn)定、操作簡便等特點，以確保核酸提取的質(zhì)量和效率。8.2核酸提取設(shè)備8.3測序儀測序儀是宏基因組檢測的核心設(shè)備，用于對提取的核酸進(jìn)行高通量測序。測序儀應(yīng)具備高分辨率、高靈敏度、高通量等特點，以確保測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。目前市場上主流的測序儀包括Illumina、ThermoFisher等品牌的測序儀。數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)是宏基因組檢測不可或缺的一部分，用于對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)應(yīng)具備強大的計算能力和專業(yè)的分析軟件，以支持宏基因組數(shù)據(jù)的深入挖掘和解讀。數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)還需具備良好的數(shù)據(jù)安全性，確保實驗數(shù)據(jù)不被泄露或損壞。0102038.4數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)099樣品采集原則代表性、一致性、無菌操作、避免污染。采集方法根據(jù)具體環(huán)境和研究目的，選擇合適的采集工具和方法，如無菌棉簽擦拭、空氣采樣器等。采集量確保采集的樣品量足夠進(jìn)行后續(xù)檢測和分析，同時避免過多造成浪費。9.1樣品采集0302019.2樣品保存與運保存條件根據(jù)微生物的生理特性和研究需求，選擇合適的保存條件，如低溫、厭氧等。運輸方式選擇可靠的運輸方式，確保樣品在運輸過程中保持穩(wěn)定，并盡快送達(dá)實驗室。去除樣品中的雜質(zhì)和非目標(biāo)微生物，提高后續(xù)檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度。預(yù)處理目的根據(jù)樣品類型和特點，選擇合適的預(yù)處理方法，如過濾、濃縮、提取等。預(yù)處理方法9.3樣品前處理VS采用高通量測序法對樣品中的微生物進(jìn)行全面檢測，獲取微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性信息。質(zhì)量控制在檢測過程中加入內(nèi)參或外參，對實驗過程進(jìn)行監(jiān)控，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時，定期對實驗環(huán)境、儀器和試劑進(jìn)行質(zhì)量檢查，避免實驗誤差。檢測方法9.4樣品檢測與質(zhì)量控制1010試驗步驟10.1樣品采集與處理采集環(huán)境微生物樣品，確保采樣器具無菌，避免污染。對采集的樣品進(jìn)行適當(dāng)處理，如濃縮、純化等，以提取高質(zhì)量的微生物DNA。使用合適的DNA提取試劑盒或方法，從處理后的樣品中提取微生物DNA。對提取的DNA進(jìn)行質(zhì)量檢測，包括濃度、純度等指標(biāo)的測定。10.2DNA提取與檢測10.3高通量測序文庫構(gòu)建將提取的DNA進(jìn)行片段化處理，并連接上測序接頭，構(gòu)建高通量測序文庫。對文庫進(jìn)行質(zhì)量評估，確保文庫質(zhì)量符合高通量測序要求。將構(gòu)建好的文庫進(jìn)行高通量測序，獲得原始測序數(shù)據(jù)。對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量過濾和質(zhì)控，去除低質(zhì)量序列和測序接頭等干擾信息，得到高質(zhì)量的有效數(shù)據(jù)。10.4高通量測序與數(shù)據(jù)質(zhì)控1111試驗報告樣品信息包括樣品名稱、編號、采集時間、地點等詳細(xì)信息，確保樣品的可追溯性。試驗結(jié)果詳細(xì)列出宏基因組測序所得的數(shù)據(jù)結(jié)果，包括微生物種類、豐度、多樣性指數(shù)等關(guān)鍵指標(biāo)。數(shù)據(jù)分析對試驗結(jié)果進(jìn)行深入解讀，探討微生物群落的構(gòu)成、功能以及與環(huán)境因素之間的關(guān)聯(lián)。11.1報告內(nèi)容遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，確保試驗報告的格式統(tǒng)一、內(nèi)容完整。采用圖表與文字相結(jié)合的方式，直觀展示試驗數(shù)據(jù)與結(jié)果，便于理解和分析。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范圖表結(jié)合11.2報告格式審核流程設(shè)立專門的審核環(huán)節(jié)，對試驗報告進(jìn)行全面審查，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。簽發(fā)權(quán)限僅由具備相應(yīng)資質(zhì)的人員簽發(fā)試驗報告，確保報告的權(quán)威性和法律效力。11.3報告審核與簽發(fā)保密措施對涉及商業(yè)機密或個人隱私的試驗報告采取嚴(yán)格的保密措施，防止信息泄露。0102歸檔管理建立完善的歸檔制度，對試驗報告進(jìn)行長期保存，便于后續(xù)查詢和使用。11.4報告保密與歸檔1212質(zhì)量控制確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制流程，可以最大程度地減少實驗誤差和偏差，從而獲得更加準(zhǔn)確和可靠的環(huán)境微生物宏基因組檢測結(jié)果。提高數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可信度質(zhì)量控制包括對數(shù)據(jù)的篩選、過濾和校正等步驟，能夠去除低質(zhì)量、不可信的數(shù)據(jù)，提高整體數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可信度，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析提供堅實基礎(chǔ)。保障研究的有效性和可重復(fù)性在環(huán)境微生物宏基因組檢測中，質(zhì)量控制是保障研究有效性和可重復(fù)性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。只有經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制的實驗數(shù)據(jù)，才能為科學(xué)研究和實際應(yīng)用提供有力支持。質(zhì)量控制的重要性質(zhì)量控制的主要步驟對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量評估、篩選、過濾和校正等處理，以確保數(shù)據(jù)的質(zhì)量和有效性。同時，采用合適的數(shù)據(jù)分析方法和工具，以準(zhǔn)確解讀實驗結(jié)果。數(shù)據(jù)處理與分析的質(zhì)量控制確保樣本的代表性、一致性和無污染是第一步。需要規(guī)范采樣方法，避免采樣過程中的污染，以及合理保存和運輸樣本。樣本采集與處理的質(zhì)量控制包括實驗環(huán)境的控制、試劑和儀器的校準(zhǔn)與驗證、實驗操作的標(biāo)準(zhǔn)化等。這些措施能夠減少實驗過程中的變異，確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。實驗操作的質(zhì)量控制實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制01通過制定嚴(yán)格的實驗室管理規(guī)范、實驗操作流程和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。這包括定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和驗證、對試劑進(jìn)行質(zhì)量檢查等。實驗室間比對與驗證02通過不同實驗室之間的比對實驗和驗證活動，評估各實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，及時發(fā)現(xiàn)并糾正可能存在的問題。數(shù)據(jù)分析與挖掘技術(shù)03運用先進(jìn)的數(shù)據(jù)分析和挖掘技術(shù)，對經(jīng)過質(zhì)量控制的數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析和解讀，以發(fā)現(xiàn)更多有價值的信息和規(guī)律。這些技術(shù)包括統(tǒng)計學(xué)分析、生物信息學(xué)分析等。質(zhì)量控制的方法與技術(shù)13附錄A(規(guī)范性)糞便樣品采集、保存、運輸方法采集對象選擇健康人群或特定疾病患者的糞便作為樣品來源。采集時機在排便后盡快采集，避免樣品受到外界污染。采集方法使用無菌工具采集糞便內(nèi)部不同部位，確保樣品的代表性。糞便樣品采集選用無菌、密封性好的容器，避免樣品泄漏或污染。保存容器根據(jù)實驗需求選擇適當(dāng)?shù)谋４鏈囟?，如低溫冷凍或冷藏，以保持樣品中微生物的活性。保存條件在規(guī)定的保存期限內(nèi)完成樣品檢測，避免樣品長時間存放導(dǎo)致微生物群落變化。保存時長糞便樣品保存運輸容器選用符合生物安全標(biāo)準(zhǔn)的運輸容器，確保樣品在運輸過程中的安全性。運輸條件根據(jù)樣品保存要求選擇合適的運輸溫度和環(huán)境，避免樣品在運輸過程中受損或變質(zhì)。運輸記錄詳細(xì)記錄樣品的運輸過程，包括起始時間、到達(dá)時間、運輸方式等信息，以確保樣品的可追溯性。糞便樣品運14附錄B(規(guī)范性)土壤樣品采集、保存、運輸方法采集工具準(zhǔn)備準(zhǔn)備無菌工具，如無菌鏟、無菌刀等，避免采集過程中引入外源微生物污染。采集深度與位置根據(jù)研究目的確定采集深度，通常采集0-20cm的表層土壤。同時，在選定的采樣點周圍隨機采集多個子樣，以增加樣品的代表性。采集量根據(jù)后續(xù)實驗需求確定采集量，確保足夠用于宏基因組檢測。土壤樣品采集土壤樣品保存將采集的土壤樣品立即放入無菌袋中，排除空氣后密封，并盡快轉(zhuǎn)移至低溫環(huán)境（如4℃冰箱）保存，以降低微生物活性，減緩樣品變化。低溫保存在保存過程中，要確保樣品不被任何外源物質(zhì)污染，如避免與其他樣品接觸、防止交叉污染等。避免污染運輸時間盡量縮短運輸時間，減少樣品在運輸過程中的變化。如需長途運輸，可考慮使用干冰等制冷劑保持低溫環(huán)境。運輸記錄詳細(xì)記錄樣品的采集時間、地點、保存及運輸條件等信息，以便后續(xù)實驗分析時參考。運輸條件在運輸過程中，應(yīng)確保樣品處于低溫、避光、干燥的環(huán)境中，以保持樣品的穩(wěn)定性。土壤樣品運15附錄C(規(guī)范性)水體樣品采集、保存、運輸方法根據(jù)研究目的和實際情況，選擇具有代表性的采樣點，確保樣品能夠真實反映目標(biāo)水體的微生物群落結(jié)構(gòu)。選擇合適的采樣點準(zhǔn)備無菌采樣器具，包括采樣瓶、采樣管等，確保在采樣過程中不會引入外源微生物污染。采樣器具準(zhǔn)備嚴(yán)格按照采樣操作規(guī)范進(jìn)行，避免交叉污染，同時記錄采樣時間、地點、天氣狀況等相關(guān)信息。采樣操作規(guī)范010203水體樣品采集避光保存為了防止光對微生物群落的影響，應(yīng)將樣品置于避光容器中保存。保存時間限制根據(jù)實驗需求和樣品性質(zhì)，設(shè)定合理的保存時間限制，確保在有效時間內(nèi)完成檢測。低溫保存將采集的水體樣品立即置于低溫環(huán)境下保存，以減緩微生物的代謝活動，確保樣品在運輸和檢測過程中的穩(wěn)定性。水體樣品保存運輸條件在運輸過程中，應(yīng)確保樣品處于穩(wěn)定的低溫環(huán)境，并避免劇烈震動和光照，以減少外界因素對樣品的影響。運輸記錄詳細(xì)記錄運輸過程中的溫度、濕度等環(huán)境參數(shù)，以及任何可能影響樣品質(zhì)量的異常情況。安全防護在運輸過程中，應(yīng)采取必要的安全防護措施，確保樣品不會泄漏或損壞，同時遵守相關(guān)運輸規(guī)定和法律法規(guī)。水體樣品運16附錄D(資料性)樣品信息單樣品信息單內(nèi)容為確保樣品追蹤與識別，每個樣品都應(yīng)有唯一的編號和相應(yīng)的名稱。采樣時間與地點記錄具體的采樣時間（不包含具體日期）和采樣地點，有助于分析環(huán)境微生物的群落結(jié)構(gòu)與分布特征。采樣人員與方法詳細(xì)記錄采樣人員信息以及所采用的采樣方法，保證采樣過程的可追溯性。樣品編號與名稱通過樣品信息單，可以實現(xiàn)對樣品的全程追溯，確保樣品的真實性與可靠性。樣品追溯與管理完整的樣品信息為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和解讀提供了重要的背景資料，有助于提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。數(shù)據(jù)分析與解讀樣品信息單的重要性準(zhǔn)確性確保所填寫的信息真實、準(zhǔn)確，無誤導(dǎo)性。規(guī)范性遵循規(guī)定的格式和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行填寫，保持信息單的整潔與清晰。完整性按照要求填寫所有必要的信息，避免遺漏。填寫樣品信息單的注意事項17附錄E(資料性)DNA樣品的完整性圖譜和質(zhì)量級別分類010203完整性圖譜的意義DNA樣品的完整性圖譜是通過特定方法（如電泳）對DNA分子進(jìn)行分離和可視化，以評估DNA的完整性和質(zhì)量。這對于后續(xù)的宏基因組測序至關(guān)重要，因為高質(zhì)量的DNA是獲得準(zhǔn)確測序結(jié)果的基礎(chǔ)。常用的DNA完整性檢測方法目前，常用的DNA完整性檢測方法主要包括瓊脂糖凝膠電泳和脈沖場凝膠電泳。這些方法能夠有效地分離不同大小的DNA片段，并通過觀察條帶的清晰度、位置和數(shù)量來評估DNA的完整性。完整性圖譜的解讀在完整性圖譜中，一般可以看到清晰、銳利的DNA條帶，這表示DNA樣品具有較高的完整性。若出現(xiàn)模糊、拖尾或缺失的條帶，則可能意味著DNA發(fā)生了降解或損傷，需要采取相應(yīng)的措施進(jìn)行改善或重新提取。DNA樣品的完整性圖譜要點三質(zhì)量級別分類的標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)DNA樣品的完整性、純度和濃度等指標(biāo)，可以將其分為不同的質(zhì)量級別。這些級別通常包括高質(zhì)量、中等質(zhì)量和低質(zhì)量等，具體分類標(biāo)準(zhǔn)可能因?qū)嶒炇一蜓芯宽椖康牟煌兴町悺?102不同質(zhì)量級別的影響DNA樣品的質(zhì)量級別對宏基因組測序的準(zhǔn)確性和可靠性