GB+7300.503-2023飼料添加劑 第5部分：微生物 屎腸球菌

ICS65.120CCSB46中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB7300.503—2023飼料添加劑第5部分:微生物屎腸球菌Feedadditives—part5:Livemicroorganisms—Enterococcusfaecium2023-05-23發(fā)布2024-06-01實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB7300.503—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為GB7300《飼料添加劑》的第503部分。GB7300已經(jīng)發(fā)布了以下部分:—第1部分:氨基酸、氨基酸鹽及其類(lèi)似物L(fēng)-蘇氨酸(GB7300.101);—第1部分:氨基酸、氨基酸鹽及其類(lèi)似物甘氨酸(GB7300.102);—第1部分:氨基酸、氨基酸鹽及其類(lèi)似物蛋氨酸羥基類(lèi)似物(GB7300.103);—第2部分:維生素及類(lèi)維生素—第2部分:維生素及類(lèi)維生素—第2部分:維生素及類(lèi)維生素—第2部分:維生素及類(lèi)維生素L-抗壞血酸-2-磷酸酯鹽(GB7300.201);維生素D3油(GB7300.202);甜菜堿(GB7300.203);甜菜堿鹽酸鹽(GB7300.204);—第3部分:礦物元素及其絡(luò)(螯)合物碘化鉀(GB7300.301);—第3部分:礦物元素及其絡(luò)(螯)合物亞硒酸鈉(GB7300.302);—第4部分:酶制劑—第4部分:酶制劑—第4部分:酶制劑—第5部分:微生物—第5部分:微生物—第5部分:微生物—第5部分:微生物木聚糖酶(GB7300.401);植酸酶(GB7300.402);纖維素酶(GB7300.403);釀酒酵母(GB7300.501);植物乳桿菌(GB7300.502);屎腸球菌(GB7300.503);嗜酸乳桿菌(GB7300.504);—第6部分:非蛋白氮尿素(GB7300.601);—第8部分:防腐劑、防霉劑和酸度調(diào)節(jié)劑碳酸氫鈉(GB7300.801);—第9部分:著色劑β-胡蘿卜素粉(GB7300.901);—第9部分:著色劑β,β-胡蘿卜素-4,4-二酮(斑螯黃)(GB7300.902);—第10部分:調(diào)味和誘食物質(zhì)谷氨酸鈉(GB7300.1001);—第10部分:調(diào)味和誘食物質(zhì)大蒜素(GB7300.1002)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。GB7300.503—2023飼料添加劑是指在飼料加工、制作、使用過(guò)程中添加的少量或者微量物質(zhì),包括營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑和一般飼料添加劑。為便于使用,按照產(chǎn)品類(lèi)型,GB7300《飼料添加劑》分為以下13個(gè)大類(lèi):—氨基酸、氨基酸鹽及其類(lèi)似物;—維生素及類(lèi)維生素;—礦物元素及其絡(luò)(螯)合物;—酶制劑;—微生物;—非蛋白氮;—抗氧化劑;—防腐劑、防霉劑和酸度調(diào)節(jié)劑;—著色劑;—調(diào)味和誘食物質(zhì);—粘結(jié)劑、抗結(jié)塊劑、穩(wěn)定劑和乳化劑;—多糖和寡糖;—其他。本文件的產(chǎn)品屎腸球菌屬于第5大類(lèi)微生物,因屎腸球菌是此大類(lèi)第3個(gè)發(fā)布的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn),所以本文件以GB7300.503編號(hào),作為GB7300的第503部分。"1GB7300.503—2023飼料添加劑第5部分:微生物屎腸球菌1范圍本文件規(guī)定了飼料添加劑屎腸球菌的技術(shù)要求、采樣、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期,描述了相應(yīng)的試驗(yàn)方法。本文件適用于以屎腸球菌為菌種,經(jīng)液態(tài)或固態(tài)發(fā)酵、干燥等工藝后制得的飼料添加劑產(chǎn)品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T5917.1飼料粉碎粒度測(cè)定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標(biāo)簽GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T13079飼料中總砷的測(cè)定GB/T13080—2018飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法GB/T13081飼料中汞的測(cè)定GB/T13082飼料中鎘的測(cè)定GB/T13091飼料中沙門(mén)氏菌的測(cè)定GB/T13092飼料中霉菌總數(shù)測(cè)定方法GB/T13093飼料中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T18869飼料中大腸菌群的測(cè)定GB/T28716飼料中玉米赤霉烯酮的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法ISO20776-1:2006臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)試和體外診斷測(cè)試系統(tǒng)傳染性病原體及藥敏設(shè)備性能評(píng)估的敏感性試驗(yàn)第1部分:抗菌藥物的體外活性檢測(cè)方法(clinicallaboratorytestingandinvitrodiag-nostictestsystems—Susceptibilitytestingofinfectiousagentsandevaluationofperformanceofanti-microbialsusceptibilitytestdevices—part1:Referencemethodfortestingtheinvitroactivityofanti-microbialagentsagainstrapidlygrowingaerobicbacteriainvolvedininfectiousdiseases)3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。2GB7300.503—2023屎腸球菌Enterococcusfaecium屬于細(xì)菌界厚壁菌門(mén)芽孢桿菌綱乳桿菌目腸球菌科腸球菌屬,為革蘭氏陽(yáng)性球菌,菌體卵圓形,主要成對(duì)偶爾成短鏈,無(wú)芽孢,多數(shù)不運(yùn)動(dòng),厭氧或兼性厭氧,化能異養(yǎng),發(fā)酵產(chǎn)L(十)-乳酸,但不產(chǎn)氣。4技術(shù)要求4.1原料載體和稀釋劑品種來(lái)自《飼料原料目錄》或《飼料添加劑品種目錄》,并符合GB13078中有毒有害物質(zhì)及微生物的限量要求。4.2外觀與性狀產(chǎn)品為粉末或顆粒,形態(tài)、色澤均勻一致,無(wú)異物,無(wú)異臭味。4.3菌種菌種應(yīng)符合屎腸球菌(Enterococcusfaecium)的形態(tài)、生理生化和分子生物學(xué)特性。4.4理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表1的要求。表1理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)屎腸球菌活菌計(jì)數(shù)a/(CFU/g)≥1.0×109水分/%≤10.0細(xì)度(2.0mm標(biāo)準(zhǔn)篩通過(guò)率)b/%≥95a活菌數(shù)以每克產(chǎn)品中菌落形成單位(colonyformingunits,CFU)表示。b僅適用于粉狀產(chǎn)品。4.5衛(wèi)生指標(biāo)衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合表2的要求。表2衛(wèi)生指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)總砷/(mg/kg)≤2.0鉛/(mg/kg)≤5.0汞/(mg/kg)≤0.1鎘/(mg/kg)≤0.5黃曲霉毒素B1a/(μg/kg)≤10.03GB7300.503—2023表2衛(wèi)生指標(biāo)(續(xù))項(xiàng)目指標(biāo)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇a/(mg/kg)≤1.0玉米赤霉烯酮a/(mg/kg)≤0.1大腸菌群/(MPN/g)≤10霉菌總數(shù)/(CFU/g)≤1.0×104沙門(mén)氏菌/25g不得檢出表中所列限量,除特別注明外均以干物質(zhì)含量88%為基礎(chǔ)計(jì)算(大腸菌群、霉菌總數(shù)、沙門(mén)氏菌除外)a此類(lèi)指標(biāo)僅適用于植物性載體生產(chǎn)的產(chǎn)品。4.6屎腸球菌的氨芐青霉素敏感性屎腸球菌對(duì)氨芐青霉素的最低抑菌濃度(MIC)小于或等于2mg/L。5采樣5.1采樣原則樣品的采集應(yīng)遵循隨機(jī)性、代表性的原則,采樣過(guò)程應(yīng)遵循無(wú)菌采樣要求,防止一切可能的外來(lái)污染。5.2采樣方法5.2.1應(yīng)在同一批次產(chǎn)品中采集樣品,每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求,一般不少于500g。5.2.2獨(dú)立包裝小于或等于500g的產(chǎn)品,取完整包裝。5.2.3獨(dú)立包裝大于500g的產(chǎn)品,應(yīng)用無(wú)菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品,放入同一個(gè)無(wú)菌采樣容器內(nèi)作為一件樣品。5.3采集樣品的貯存和運(yùn)輸5.3.1應(yīng)盡快將樣品送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。5.3.2應(yīng)在運(yùn)輸過(guò)程中保持樣品完整。5.3.3應(yīng)在接近原有貯存溫度條件下貯存樣品,或采取必要措施防止樣品中微生物數(shù)量的變化。6試驗(yàn)方法6.1外觀與性狀取適量試樣置于干凈白色紙片上,在自然光下觀察其形態(tài)、色澤、有無(wú)異物,嗅其氣味。6.2屎腸球菌鑒定按附錄A規(guī)定的方法測(cè)定。4GB7300.503—20236.3活菌計(jì)數(shù)按附錄B規(guī)定的方法測(cè)定。若為包被屎腸球菌產(chǎn)品,應(yīng)提供溶解方法。6.4水分按GB/T6435規(guī)定的方法測(cè)定。6.5粒度按GB/T5917.1規(guī)定的方法測(cè)定。6.6總砷(以As計(jì))按GB/T13079規(guī)定的方法測(cè)定。6.7鉛(以pb計(jì))按GB/T13080—2018規(guī)定的方法測(cè)定。6.8汞(以Hg計(jì))按GB/T13081規(guī)定的方法測(cè)定。6.9鎘(以Cd計(jì))按GB/T13082規(guī)定的方法測(cè)定。6.10黃曲霉毒素B1按GB/T17480規(guī)定的方法測(cè)定。6.11脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)按GB/T30956規(guī)定的方法測(cè)定。6.12玉米赤霉烯酮按GB/T28716規(guī)定的方法測(cè)定。6.13霉菌總數(shù)按GB/T13092規(guī)定的方法測(cè)定。6.14大腸菌群按GB/T18869規(guī)定的方法測(cè)定。6.15沙門(mén)氏菌按GB/T13091規(guī)定的方法測(cè)定。6.16氨芐青霉素MIC值按ISO20776-1:2006規(guī)定的方法測(cè)定。5GB7300.503—20237檢驗(yàn)規(guī)則7.1組批以相同材料、相同的生產(chǎn)工藝,經(jīng)連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批,但每批產(chǎn)品不應(yīng)超過(guò)50t。7.2出廠檢驗(yàn)外觀與性狀、屎腸球菌活菌計(jì)數(shù)、水分為出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目。7.3型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為第4章規(guī)定的所有項(xiàng)目,在正常生產(chǎn)情況下,每半年至少進(jìn)行1次型式檢驗(yàn)。在有下列情況之一時(shí),也應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn):a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時(shí);b)生產(chǎn)工藝、配方或主要原料來(lái)源有較大改變,可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí);c)停產(chǎn)3個(gè)月以上,重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí);d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí);e)管理部門(mén)提出檢驗(yàn)要求時(shí)。7.4判定規(guī)則7.4.1所驗(yàn)項(xiàng)目全部合格,判定為該批次產(chǎn)品合格。7.4.2檢驗(yàn)結(jié)果中有任何指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時(shí),可自同批產(chǎn)品中重新加倍取樣進(jìn)行復(fù)檢。復(fù)檢結(jié)果即使有一項(xiàng)指標(biāo)不符合本文件規(guī)定,則判定該批產(chǎn)品不合格。衛(wèi)生指標(biāo)中的微生物指標(biāo)不得復(fù)檢。7.4.3除微生物指標(biāo)外,各項(xiàng)目指標(biāo)的極限數(shù)值判定按GB/T8170中全數(shù)值比較法執(zhí)行。8.1標(biāo)簽標(biāo)簽應(yīng)符合GB10648的規(guī)定。8.2包裝包裝材料應(yīng)清潔衛(wèi)生,并能防污染、防潮濕、防泄漏。8.3運(yùn)輸運(yùn)輸工具應(yīng)清潔衛(wèi)生、能防暴曬、防雨淋,不應(yīng)與有毒有害的物品混裝混運(yùn)。8.4貯存應(yīng)貯存于干燥、陰涼、通風(fēng)處,防止日曬、雨淋,不應(yīng)與有毒有害物質(zhì)混貯。8.5保質(zhì)期未開(kāi)啟包裝的產(chǎn)品,在規(guī)定的運(yùn)輸、貯存條件下,產(chǎn)品保質(zhì)期與標(biāo)簽中標(biāo)明的保質(zhì)期一致。6GB7300.503—2023附錄A(規(guī)范性)屎腸球菌菌種鑒別方法A.1形態(tài)鑒別A.1.1腸球菌選擇性培養(yǎng)基(膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂)胰蛋白陳17.0g牛肉浸粉3.0g酵母浸粉5.0g牛膽粉10.0g氯化鈉5.0g檸檬酸鈉1.0g七葉苷1.0g檸檬酸鐵銨0.5g疊氮化鈉0.25g瓊脂13.5g蒸餾水1000mLPH7.1士0.2將所有成分加入蒸餾水中,加熱不斷攪拌,煮沸使瓊脂完全溶解,121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱使培養(yǎng)基熔化,冷卻至45℃~50℃時(shí)使用。A.1.2菌落選擇用接種針或接種環(huán)隨機(jī)挑取5個(gè)菌落。A.1.3菌體染色及形態(tài)檢驗(yàn)革蘭氏染色陽(yáng)性。菌體細(xì)胞呈卵圓形,大小為(0.6μm~2.0μm)×(0.6μm~2.5μm)多數(shù)成對(duì)或成短鏈。無(wú)芽孢,無(wú)明顯莢膜,通常不運(yùn)動(dòng)。A.1.4菌落形態(tài)在腸球菌選擇性培養(yǎng)基(膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂)上菌落生長(zhǎng)形態(tài)特征為:帶有棕紫色環(huán)的黑色或棕黑色菌落,邊緣整齊、表面光滑、圓形。A.2生理生化特征屎腸球菌生理生化特征見(jiàn)表A.1。7GB7300.503—2023表A.1屎腸球菌生理生化特征試驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果十PH9.6十0.04%碲酸鹽—0.02%疊氮化鈉十碳水化合物(4種)反應(yīng)麥芽糖十七葉苷十丙酮酸—L-阿拉伯糖十注:“十”表示為90%以上的菌株為陽(yáng)性反應(yīng);“—”表示90%以上菌株為陰性反應(yīng)。A.3分子生物學(xué)鑒定采用核酸序列分析法對(duì)菌株rRNA基因中16SrRNA全基因序列進(jìn)行分析,與GenBank等國(guó)際核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)中模式菌株ATCC19434的16SrRNA基因序列進(jìn)行同源性比較,序列差異小于1%,則判定該菌株為屎腸球菌(Enterococcusfaecium)。8GB7300.503—2023附錄B(規(guī)范性)屎腸球菌活菌計(jì)數(shù)B.1試劑B.1.1MRS培養(yǎng)基蛋白陳牛肉粉酵母粉葡萄糖吐溫80磷酸氫二鉀(K2HPO4.7H2O)乙酸鈉(CH3COONa.3H2O)檸檬酸三銨硫酸鎂(MgsO4.7H2O)硫酸錳(MnsO4.4H2