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中國海洋大學試驗報告2013年11月13日姓名：郭沈杰年級專業(yè)：2012級生物科學同組者：蔡萍萍學號：12050011012實驗四氨基酸的紙層析法一、實驗目的了解并掌握氨基酸紙層析法的原理和方法。二、實驗原理以濾紙為支持物的層析法，稱為紙層析法。紙層析所用展層劑大多由水和有機溶劑組成。展層時，水為固定相，它與濾紙纖維親和力強；有機溶劑為流動相，它與濾紙纖維親和力弱。有機溶劑在濾紙上又下向上移動的，稱為上行法；有上向下移動的，稱為下行法。將樣品在濾紙上確定的原點處展層，由于樣品中各種氨基酸在兩相中不斷進行分配，且他們的分離系數(shù)各不相同，所以不同的氨基酸隨流動相移動的速率也不相同，于是各種氨基酸在濾紙上就相互分離出來，形成距原點不等的層析點。 在一定條件下（室溫、展層劑的組成、濾紙的質量、PH值等不變），不同的氨基酸有固定的移動速率（Rf值）Rf=原點到層析點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離 混合氨基酸做樣品時，如果只用一種溶劑展層，由于某些氨基酸的移動速率相同或相近，就不能將它們分開，為此，當用一種溶劑展層后，可將濾紙旋轉90度，以第一次所的層析點為原點，在用另一溶劑展層，從而達到分離的目的。這種方法稱為雙向層析法。 氨基酸無色，利用茚三酮反應，可將氨基酸層析點顯色作定性、定量用。本實驗主要介紹的是單向層析法。其中混合氨基酸有精氨酸、苯丙氨酸。三、實驗儀器1、

新華濾紙2、

層析缸3、

細線4、

點樣管5、

橡皮筋6、

電吹風7、

噴霧器8、鉛筆9、直尺四、實驗試劑1、精氨酸、苯丙氨酸、混合氨基酸（精氨酸、苯丙氨酸）2、展層劑：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸餾水=13：3：3：1（v:v）3、0.5%茚三酮—無水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml無水丙酮，貯于棕色瓶中五、實驗步驟1、取濾紙剪成20×10厘米的濾紙條一張，在一端打孔，系一根細線，在另一端2~3cm處用鉛筆畫一橫線，在上面相同間隔畫3圓點（原圈直徑約5mm）。2、取毛細管3支，分別吸取精氨酸、苯丙氨酸、氨

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