DB32-T 4756-2024 家兔冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4756—2024家兔冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程Technicalcodeofpraticefortheproductionoffrozensemeninrabbits2024-04-26發(fā)布2024-05-26實施江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)發(fā)出布版Ⅰ前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4精液采集 5冷凍稀釋液制備 6制作過程 7質(zhì)量評定 附錄A（資料性）家兔冷凍精液稀釋液配制方法 附錄B（資料性）家兔冷凍精液記錄表 參考文獻(xiàn) Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。1家兔冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了家兔冷凍精液的精液采集、冷凍稀釋液制備、制作過程、質(zhì)量評定及包裝、貯存和運(yùn)輸。本文件適用于家兔的冷凍精液生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T5458液氮生物容器NY/T3185家兔人工授精技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4精液采集4.1采精技術(shù)家兔精液采集方法應(yīng)符合NY/T3185的規(guī)定。4.2新鮮精液質(zhì)量要求色澤呈乳白色或灰白色，精子活力應(yīng)不小于80%，精子密度應(yīng)不小于1.5×108個/mL。5冷凍稀釋液制備配制方法參照附錄A，或購買商品冷凍稀釋液。6制作過程6.1稀釋方法采集好兔精液，達(dá)到4.2要求后，應(yīng)快速放入冰箱，在3℃~5℃冷藏90min。然后將等溫等量的精液冷凍稀釋液緩慢倒入精液中，宜邊加邊輕輕搖晃，使冷凍保存稀釋液與兔精液充分混合。6.2分裝和標(biāo)識用于分裝精液的是微型細(xì)管，管內(nèi)應(yīng)留一定的空隙，兩端封口應(yīng)嚴(yán)密。細(xì)管外壁應(yīng)清楚標(biāo)明生產(chǎn)日2期、生產(chǎn)站名、種兔品種和個體號。應(yīng)置于3℃~5℃平衡45min。6.4預(yù)冷凍冷凍用具應(yīng)潔凈后消毒。平衡后的細(xì)管凍精立即轉(zhuǎn)移至銅網(wǎng)或細(xì)管架上預(yù)冷凍，應(yīng)在液氮液面上方5cm處預(yù)冷凍10min后浸入液氮保存。6.5生產(chǎn)記錄家兔冷凍精液生產(chǎn)記錄表參照附錄B的表B.1。7質(zhì)量評定7.1精液復(fù)蘇將細(xì)管凍精直接置于37°C水浴中解凍10s，適當(dāng)搖動，使凍精融化。7.2質(zhì)量要求精液質(zhì)量檢測應(yīng)具備顯微鏡，血球計數(shù)板，電子天平等常用儀器。家兔細(xì)管冷凍精液質(zhì)量要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1家兔細(xì)管冷凍精液質(zhì)量要求項目指標(biāo)外觀細(xì)管無裂痕，兩端封口嚴(yán)密，標(biāo)志應(yīng)清晰劑型/mL劑量/mL0.20±0.01精子活力/%≥35前進(jìn)運(yùn)動精子數(shù)/（104個/劑）≥500精子畸形率/%≤20菌落數(shù)/（個/劑）≤6007.3判定規(guī)則正常生產(chǎn)時，每三個月檢驗一次。每批隨機(jī)抽取三份用于檢驗，結(jié)果以抽檢三份樣品的平均值為準(zhǔn)。取樣完成后應(yīng)立即填寫樣品登記單。登記表參照表B.2進(jìn)行。對照表1要求，判定每批產(chǎn)品是否合格。8包裝、貯存和運(yùn)輸凍精應(yīng)使用專用塑料管分裝，并由滅菌紗布袋包裝。3DB32/T4756—2024每只公兔的凍精應(yīng)單獨貯存，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)及時補(bǔ)充液氮，保證凍精浸沒在液氮中。貯存凍精的低溫容器應(yīng)符合GB/T5458的規(guī)定，且每年至少消洗一次并更換新鮮液氮。凍精運(yùn)輸過程中應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，保證凍精始終浸沒在液氮中。貯存容器不應(yīng)橫倒、碰撞和強(qiáng)烈振動。4DB32/T4756—2024（資料性）家兔冷凍精液稀釋液配制方法A.1稀釋液配方三羥甲基氨基甲烷3.03g、檸檬酸1.69g、葡萄糖0.85g、海藻糖2.05g、L?谷氨酸0.74g，二甲基亞砜A.2配制方法配制方法：準(zhǔn)確稱取三羥甲基氨基甲烷3.03g、檸檬酸1.69g、葡萄糖0.85g、海藻糖2.05g、L?谷氨酸0.74g，放入100mL容量瓶內(nèi)，加入蒸餾水50mL，溶解后定容至100mL。然后加入二甲基亞砜16mL、甘油3mL，用磁力攪拌器充分?jǐn)嚢杈鶆蚝髠溆谩?（資料性）家兔冷凍精液記錄表家兔冷凍精液生產(chǎn)記錄表的樣式見表B.1，家兔冷凍精液取樣登記表的樣式見表B.2。表B.1家兔冷凍精液生產(chǎn)記錄表生產(chǎn)日期生產(chǎn)地點公兔品種公兔編號液氮罐編號操作人表B.2家兔冷凍精液取樣登記表取樣日期取樣地點公兔品種公兔編號樣品生產(chǎn)日期取樣人6DB32/T4756—2024［1］江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院.一種兔精液冷凍保存稀釋液和制備方法、兔精液冷凍保存方法和應(yīng)用：ZL202111510937.X[P]［2］MicheleDiIorio，MariaAntoniettaColonna，MarsiaMiranda，etal.Initialcoolingtimebeforefreezingaffec