T-TPPA 0003-2022 中藥注射劑對豚鼠離體回腸的收縮作用操作規(guī)程

ICS

11.120.01CCS

團 體 標 準T/TPPA

中藥注射劑對豚鼠離體回腸的收縮作用操作規(guī)程Operating

procedure

for

medicine

injection

ileum

of

guinea

2022-12-22

發(fā)布2022-12-22

實施T/TPPA

0003-2022 前 言

..........................................................................

I1

范圍

............................................................................

12

規(guī)范性引用文件

..................................................................

13

術(shù)語和定義

......................................................................

14

檢測原理

........................................................................

25

材料與設(shè)備

......................................................................

25.1

材料........................................................................

25.2

設(shè)備........................................................................

26

實驗方法

........................................................................

26.1

溶液配制

....................................................................

36.2

實驗步驟

....................................................................

37

數(shù)據(jù)處理及判定

..................................................................

5天津市醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會

發(fā)布T/TPPA

0003-2022 本文件按照

GB/T

《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任。本文件由天津天士力之驕藥業(yè)有限公司提出。本文件由天津市醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會歸口。天地藥業(yè)股份有限公司、天津紅日藥業(yè)股份有限公司。T/TPPA

0003-20221范圍法。本文件適用于中藥注射劑對豚鼠離體回腸收縮作用的評價。2規(guī)范性引用文件文件。GB/T

6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB

14925實驗動物

環(huán)境及設(shè)施GB

19489 實驗室

生物安全通用要求GB/T

24001

環(huán)境管理體系

要求及使用指南GB/T

45001

職業(yè)健康安全管理體系

要求及使用指南3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1乙酰膽堿

acetylcholine乙酰膽堿是一種神經(jīng)遞質(zhì)。在組織內(nèi)迅速被膽堿酯酶破壞。能特異性地作用于各類膽堿受體。3.2組胺

histamine部組織水腫。使細胞外Ca

內(nèi)流增加，從而導致回腸平滑肌收縮。T/TPPA使細胞外Ca

內(nèi)流增加，從而導致回腸平滑肌收縮。3.3毒蕈堿受體

muscarinic

receptor毒蕈堿受體簡稱M受體，廣泛存在于副交感神經(jīng)節(jié)后纖維支配的效應(yīng)器細胞上。當乙酰膽堿與這類平滑肌、膀胱逼尿肌和瞳孔括約肌的收縮，以及消化腺分泌增加等。3.4組胺1型受體

histamine

receptor

1組胺1型受體簡稱H1受體，是組胺受體的一種亞型，組胺通過激活H1受體產(chǎn)生支氣管平滑肌興奮、毛細血管通透性增加和部分血管擴張效應(yīng)。臨床常用H1受體阻斷藥物治療皮膚黏膜過敏反應(yīng)。4 檢測原理M1、H1完全激動劑，分別與M1受體和H1受體結(jié)合，通過G蛋白介導激活磷脂酶C，使二磷酸肌醇磷脂水解為二酰甘油及1,4,5-三磷酸肌醇。二酰甘油在細胞膜上激活蛋白激酶C，使靶蛋白磷酸化，激活鈣通道，2+5 材料與設(shè)備5.1 材料5.1.1 實驗動物±50g℃條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)3d養(yǎng)符合GB

14925和GB/T

的要求，動物實驗符合GB

19489和GB/T

28001的要求。5.1.2 試劑試藥a）乙酰膽堿：含量不低于。b）組胺：含量不低于97.0%。c）氯化鉀、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、碳酸氫鈉、磷酸二氫鉀、葡萄糖，上述試劑均為分析純。d）水為

6682

規(guī)定的三級水。5.2 設(shè)備組織器官灌流裝置、生物信號采集系統(tǒng)。6 實驗方法T/TPPA

0003-20226.1溶液配制6.1.1 臺氏液的配制稱取氯化鈉

8.01g、氯化鉀

0.20g、氯化鈣

0.20g、氯化鎂

0.10g、碳酸氫鈉

1.00g0.05g、葡萄糖

1.01g

1000mL，調(diào)節(jié)至

pH

至

，

內(nèi)使用。6.1.2乙酰膽堿溶液的配制稱取乙酰膽堿適量，加水配制成適宜濃度的乙酰膽堿溶液。6.1.3 組胺溶液的配制稱取組胺適量，加水配制成適宜濃度的組胺溶液。6.1.4 氯化鉀溶液的配制稱取氯化鉀適量，加水配制成適宜濃度的氯化鉀溶液。6.1.5 氯化鈣溶液的配制稱取氯化鈣適量，加水配制成適宜濃度的氯化鈣溶液。6.2 實驗步驟6.2.1 離體標本制備豚鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)

3d

12h

200g±50g

的豚鼠

6～10

死后，5min

10cm

處取出約

10cm

0℃臺氏液沖洗干

3

2cm

有

37℃臺氏液的麥氏水浴槽中，并緩慢通入

氧氣和

2～3個氣泡/秒。調(diào)整前負荷在

，用生物信號采集系統(tǒng)平衡

min，期間每

臺氏液，待回腸平滑肌自發(fā)性收縮運動處于平衡狀態(tài)后，進行后續(xù)實驗。6.2.2 供試品對靜息離體回腸影響的評價～400μL

3min作用強弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05的供試品對靜息離體回腸平滑肌的收縮有抑制作用。按照如下公式計算抑制率：抑制率(%)=(G

-G

給藥前×100% ……式1式中：G

給藥前—給藥前回腸收縮平均張力G

給藥后—給藥后回腸收縮平均張力待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的乙酰膽堿溶液，平衡，記錄加入乙酰膽待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的組胺溶液，平衡，記錄加入組胺溶液前待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的氯化鉀溶液，平衡3min，記錄加入氯化鉀溶抑制率越大表明供試品對靜息離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強。6.2.3 供試品對乙酰膽堿誘導的離體回腸收縮影響的評價a)乙酰膽堿誘導的離體回腸收縮模型的建立-8 -4堿溶液前后3min前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明乙酰膽堿誘導的離體回腸收縮模型制備成功。b) 供試品對乙酰膽堿誘導的豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響3min內(nèi)離體回腸平滑肌收縮張力的變化，通過張力值參數(shù)比較作用強弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明所加入的供試

6.2.2

項下式

1

對乙酰膽堿誘導的離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強。6.2.4 供試品對組胺誘導的離體回腸收縮影響的評價a) 組胺誘導的離體回腸收縮模型的建立-8 -4后3min性差異（P＜0.05），表明組胺誘導的離體回腸收縮模型制備成功。b) 供試品對組胺引起的豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響3min內(nèi)離體回腸平滑肌收縮張力的變化，通過張力值參數(shù)比較作用強弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明所加入的供試6.2.2項下項下式1組胺誘導的離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強。6.2.5 供試品對氯化鉀誘導的離體回腸收縮影響的評價a)氯化鉀誘導的離體回腸收縮模型的建立-5 -1液前后3min有顯著性差異（P＜0.05），表明氯化鉀誘導的離體回腸收縮模型制備成功。b)

供試品對氯化鉀誘導的豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響3min內(nèi)離體回腸平滑肌收縮張力的變化，通過張力值參數(shù)比較作用強弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明所加入的供試待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的氯化鈣溶液平衡3min，記錄加入氯化鈣溶液

項下式

1

氯化鉀誘導的離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強。6.2.6 供試品對氯化鈣誘導的離體回腸收縮影響的評價a) 氯化鈣誘導的離體回腸收縮模型的建立-4 -1前后3min顯著性差異（P＜0.05），表明氯化鈣誘導的離體回腸收縮模型制備成功。b) 供試品對氯化鈣引起的豚鼠離體