烏雞家雞血清測定-結(jié)題報(bào)告教材

血清成分分析

陳佳麗潘茜茜林艷青

指導(dǎo)老師：張旭老師

2012-12-29目錄1血清膽固醇的測定2血清清蛋白γ-球蛋白的分離與鑒定

3谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的鑒定及活力單位的測定/dx//dx/150603/4633906.html/dx/150603/4633913.html/dx/150603/4633923.html/dx/150604/4634454.html/dx/150604/4634455.html/dx/150605/4635227.html/dx/150605/4635284.html/dx/150606/4635592.html/dx/150606/4635595.html/dx/150607/4635682.html/dx/150608/4636149.html/dx/150608/4636153.html/dx/150609/4636872.html/dx/150609/4636884.html/dx/150610/4637558.html/dx/150610/4637564.html/dx/150527/4630634.html/dx/150527/4630628.html/dx/150527/4630610.html/dx/150527/4630609.html

實(shí)驗(yàn)原理膽固醇及其酯在硫酸存在下和鄰二甲醛作用。產(chǎn)生紫紅色物質(zhì)，此物質(zhì)對550nm波長的光有最大吸收，可用比色法定量測定。100ml樣品中膽固醇含量在400mg以內(nèi)與光吸度呈良好線性關(guān)系。實(shí)驗(yàn)材料血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清鄰苯二甲醛試劑，90%醋酸，混合酸，標(biāo)準(zhǔn)膽固醇貯液（1mg/mL），標(biāo)準(zhǔn)膽固醇應(yīng)用液（0.1mg/mL）實(shí)驗(yàn)步驟1取清潔干燥試管5支，編號，按表格加入試劑。2加畢，混勻，靜置10min，以550nm波長比色測定，以吸光度值為縱坐標(biāo)，膽固醇含量為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。本

1

取3支清潔干燥試管，編號后，按表格加入試劑。2加畢，混勻，靜置10min，于550nm波長比色，以對照管校零點(diǎn)，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線即知100mL樣品中總膽固醇含量（mg）。本繪制表格記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品各試劑吸光值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在曲線上描出與樣品吸光值對應(yīng)的膽固醇含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對照標(biāo)準(zhǔn)曲線可得：家雞血清550nm處的光波吸收值為0.130。100ml家雞血清中膽固醇的含量為75mg。根據(jù)參考資料雞的血清膽固醇的含量在51-196mg/100ml之間是在可信范圍內(nèi)[1]。所以本實(shí)驗(yàn)測得家雞血清膽固醇含量75mg/100ml是在可信范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)分析1.硫酸顏色的高低對顯色有影響，所以混合酸的配制和測定過程中的加量都應(yīng)準(zhǔn)確。2.顯色要避免高溫（采用混合酸液反應(yīng)時溫度不會升得太高，一般在4到32攝氏度時，顏色能穩(wěn)定2h）。3.做標(biāo)準(zhǔn)曲線時試管一定要潔凈干燥，因?yàn)楸旧硭拥恼麴s水只有0.01ml.。4.用微量進(jìn)樣器時一定要看清刻度。5.實(shí)驗(yàn)中注意混勻時不要搖晃至產(chǎn)生氣泡，防止影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.實(shí)驗(yàn)中注意勿讓混合酸腐化分光光度計(jì)。返回目錄1血清清蛋白與γ-球蛋白的鹽析2蛋白質(zhì)透析與濃縮3凝膠層析的實(shí)驗(yàn)4醋酸纖維素薄膜電泳

實(shí)驗(yàn)原理血清清蛋白與γ-球蛋白的鹽析

血清中含有清蛋白和各種球蛋白（α-β-γ-球蛋白等），由于它們所帶電荷不同、相對分子質(zhì)量不同，在高濃度鹽溶液中的溶解度不同，因此可利用它們在中性鹽溶液中溶解度的差異而進(jìn)行沉淀分離，此法稱為鹽析法。實(shí)驗(yàn)材料血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清PBS（NH4）2SO4溶液雙縮脲試劑酪蛋白蔗糖BaCl2溶液

實(shí)驗(yàn)步驟血清清蛋白與γ-球蛋白的鹽析

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實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)透析與濃縮

1.透析是利用蛋白質(zhì)等生物大分子不能通過半透膜的性質(zhì)的一類純化方法,可利用該方法分離大分子和小分子混合物.2.由于NH4+和SO42+可以通過半透膜，二血清清蛋白不能，因此，可以利用透析的方法是清蛋白溶液脫鹽。3.將盛有待濃縮餓大分子溶液的透析袋放入高濃度的吸水性強(qiáng)的蔗糖固體顆粒中，袋內(nèi)溶液中的水杯袋外的多聚物所吸收而有效地濃縮。實(shí)驗(yàn)材料透析袋、蔗糖固體顆粒實(shí)驗(yàn)步驟蛋白質(zhì)透析與濃縮的實(shí)驗(yàn)步驟

1.取玻璃紙（15cm×15cm）兩張，折成袋狀。將前面第一次鹽析得到的含有清蛋白的上清液和γ-球蛋白分別倒入兩個透析袋中，用線繩系緊上口。

2.用玻璃棒懸掛在盛有半杯蒸餾水的100mL燒杯中，使透析袋下半部浸入水中，流水透析1h。。3.將兩透析袋取出，埋入蔗糖中濃縮

返回實(shí)驗(yàn)步驟凝膠層析的實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果凝膠層析重鉻酸鉀藍(lán)葡聚糖實(shí)驗(yàn)結(jié)果洗脫曲線實(shí)驗(yàn)分析1.凝膠層析中觀察到試管中的層析液中葡藍(lán)聚糖顏色由淺變深再變淺，重鉻酸鉀的層析液的顏色變化也是呈這種規(guī)律。2.凝膠在實(shí)驗(yàn)前的保存是保存在乙醇中，所以在實(shí)驗(yàn)中要洗去凝膠中的乙醇。但是由于洗去乙醇時加的蒸餾水比較多所以在凝膠傾入柱內(nèi)去水比較的浪費(fèi)時間。3.但是在葡藍(lán)聚糖的洗脫液顏色都比較的淺，分析得到是由于在滴加樣品時加的樣品不夠多導(dǎo)致顏色變化不是很明顯。4.在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)在柱內(nèi)凝膠面上加入生理鹽水，應(yīng)為要經(jīng)常加生理鹽水所以每次加生理鹽水都會破壞凝膠面的平整影響層析的效果。

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實(shí)驗(yàn)原理醋酸纖維素薄膜電泳

醋酸纖維素薄膜電泳

是以醋酸纖維素薄膜作為支持物的電泳方法實(shí)驗(yàn)材料醋酸纖維素薄膜、電泳槽實(shí)驗(yàn)步驟醋酸纖維素薄膜電泳的實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)分析1.觀察比較全血清、血清清蛋白、y-球蛋白的電泳圖譜發(fā)現(xiàn)全血清圖譜較為復(fù)雜可見全血清中含有多種蛋白。而血清清蛋白、y-球蛋白的電泳圖譜則只有一條線可見實(shí)驗(yàn)在鹽析、透析時做的比較好使兩種蛋白完全分離出來且不含其它蛋白。2.但是由于點(diǎn)樣時畫線過猛破壞了醋酸纖維素薄膜，所以在y-球蛋白的圖譜中留下點(diǎn)樣線。3.當(dāng)然在實(shí)驗(yàn)中濾紙橋搭的不好使兩邊的濾紙條發(fā)生了相互接觸，結(jié)果使y-球蛋白的電泳圖譜上留下顏色比較淺的痕跡，分析由于試驗(yàn)中薄膜糙面朝下所以有些y-球蛋白會溶于濾紙上影響y-球蛋白的電泳速度。4.烘干后的薄膜不透明原因是漂洗不夠徹底。。返回

實(shí)驗(yàn)原理紙層析法底物谷氨酸的減少和產(chǎn)物丙氨酸的生成。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙。此物質(zhì)在堿性條件下呈棕紅色，其顏色的深淺與丙酮酸的含量成正比。實(shí)驗(yàn)材料血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清1%谷氨酸溶液，1%丙酮酸鈉溶液，0.1%KHCO3溶液0.025%溴乙酸溶液，2%乙酸溶液，0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液，0.1%標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸溶液，0.1%標(biāo)準(zhǔn)丙氨酸溶液，1/15mol/LpH=7.4的磷酸緩沖液，GPT基質(zhì)液，1mmol/L2，4-二硝基苯0.4mol/LNaOH溶液實(shí)驗(yàn)步驟1取清潔干燥試管5支，編號，按要求試劑。2加畢，混勻，置于37℃水浴靜置10min，再加入2，4-二硝基苯肼0.5ml加畢，混勻，置于37℃水浴靜置20min，再加5mlNaOH加畢，混勻，靜置10min.以520nm波長比色測定，以吸光度值為縱坐標(biāo)，酶活力單位為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1取清潔干燥試管3支，編號，按要求試劑。2加畢，混勻，置于37℃水浴靜置10min，再加入2，4-二硝基苯肼0.5ml加畢，混勻，置于37℃水浴靜置20min，再按要求加試劑，加畢，混勻，靜置10min.以520nm波長比色測定，以吸光度值為縱坐標(biāo)，酶活力單位為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。繪制表格記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品各試劑吸光值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在曲線上描出與樣品吸光值對應(yīng)的酶活力單位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果家雞血清550nm處的光波吸收值為0.026。烏雞血清550nm處的光波吸收值為0.150.對照標(biāo)準(zhǔn)曲線可得100ml血清谷丙氨酸酶活力單位數(shù)家雞是26910。烏雞是139640。實(shí)驗(yàn)結(jié)果此處添加文本實(shí)驗(yàn)分析1.所需試劑如基質(zhì)液、丙酮酸等需冷藏。2.為防止溶血及其它因素對酶活性影響，實(shí)驗(yàn)儀器應(yīng)干凈干燥。3.為保證操作結(jié)果可靠，測定酶活性時應(yīng)恒定PH、保溫時間4.谷丙氨酸酶活性的鑒定

1染色之后在濾紙上顯色有樣品0.1mol/L谷氨酸、標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸、標(biāo)準(zhǔn)丙氨酸、家雞的血清中的未被催化的谷氨酸與經(jīng)過過谷丙轉(zhuǎn)氨酶催化的得到丙氨酸、烏雞血清中的未被催化的谷氨酸與經(jīng)過過谷丙轉(zhuǎn)氨酶催化的得到丙氨酸。

2在染色之后的濾紙上發(fā)現(xiàn)家雞與烏雞的測試管在濾紙上的線有三條。說明除出了丙氨酸與谷氨酸之外還存在其它的氨基酸，分析可能是試劑有污染。

3在濾紙上留下了小點(diǎn)與小斑。分析原因可能是實(shí)驗(yàn)時交流有口水留在濾紙上或是實(shí)驗(yàn)中的手套已經(jīng)被污染了。5）谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定