GB∕T 40365-2021 細(xì)胞無菌檢測通則（正式版）

ICS07.080CCSA40GB/T40365—2021細(xì)胞無菌檢測通則國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會IGB/T40365—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。藥品檢定研究院、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院。1細(xì)胞無菌檢測通則本文件規(guī)定了細(xì)胞無菌檢測的一般要求、方法選擇和過程控制。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB19489實驗室生物安全通用要求下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1無菌檢測sterilitytesting對細(xì)胞樣本中是否存在微生物污染所進行的測定。下列縮略語適用于本文件。ITS1:核糖體DNA的第一內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(InternalTranscribedSpacer-1)ITS2:核糖體DNA的第二內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(InternalTranscribedSpacer-2)PCR:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseCh5.1應(yīng)根據(jù)細(xì)胞來源、潛在污染暴露史、細(xì)胞預(yù)期應(yīng)用目的及所處環(huán)境等方面對細(xì)胞進行風(fēng)險評估。考慮的因素包括但不限于以下幾個方面：b)應(yīng)根據(jù)細(xì)胞的使用目的進行相關(guān)污染檢測；c)應(yīng)考慮細(xì)胞制備和細(xì)胞培養(yǎng)的全周期所處的環(huán)境因素。根據(jù)暴露史評估可能的污染，如用于培養(yǎng)細(xì)胞的動物血清可能被特定的微生物污染。5.2依據(jù)風(fēng)險評估判斷可能性最大的微生物污染類型，評估現(xiàn)有檢驗方法的適用性，為待檢測樣本選擇合適的方法。2GB/T40365—20216方法選擇6.1.3選擇的方法應(yīng)經(jīng)過驗證或確認(rèn)。6.2細(xì)菌和真菌6.2.3若試驗樣品性質(zhì)如可行，應(yīng)首先選擇膜過濾法6.2.4直接接種法對于細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加抗生素的樣品應(yīng)考慮抗生素對細(xì)菌和真菌的抑制效應(yīng)而6.2.5利用PCR的方法檢測細(xì)菌16SrRNA高保守區(qū)的序列來判斷是否有細(xì)菌污染。利用PCR的方法檢測細(xì)菌16SrRNA可變區(qū)的序列和MNP標(biāo)記序列分析污染細(xì)菌的種屬，利用MNP、ITS1或ITS2等序列判斷感染真菌的種屬。6.2.6對微生物的組分進行檢測可采用飛行時間質(zhì)譜法等。6.3病毒法和血細(xì)胞凝集試驗等方法。6.3.2可利用光學(xué)顯微鏡觀察病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞病變合胞體的形成；可通過電子顯微鏡觀察大小和6.3.3取細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液或細(xì)胞培養(yǎng)物的裂解物，接種已知未污染病毒的相應(yīng)細(xì)胞，檢測是否出6.3.5分離黏液病毒、皰疹病毒和痘病毒宜采用雞胚接種檢查法。雞胚應(yīng)來自無特定病原(SPF)雞群。6.3.6采用PCR法檢測病毒核酸高保守區(qū)的序列來判斷是否有病毒污染。6.3.7可采用高通量測序法鑒定病毒特異性序列。6.3.8采用基因芯片技術(shù)檢測病毒，需要合成與潛在污染的病毒基因組上的特定區(qū)域互補的核酸6.3.9運用病毒抗原特異的抗體，通過熒光免疫反應(yīng)用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞內(nèi)病毒蛋白來判斷特定的6.3.10運用病毒抗原特異的抗體，通過酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測細(xì)胞