YYT 0870.1-2013 醫(yī)療器械遺傳毒性試驗 第1部分細(xì)菌回復(fù)突變試驗

中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布I 本部分為YY/T0870的第1部分。Ⅱ1下列文件對于本交件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅駐日期的版本適用于本文GB/T16886醫(yī)療器械生物學(xué)評價第1部分風(fēng)險管理過程中的評價與試驗GB/TA6886.3醫(yī)療器械生物學(xué)評價一第3部分遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗GB/T16886.12醫(yī)療器械生物4主要設(shè)備a)鼠傷寒沙門氏菌株TA1537或TA97或TA97a;c)鼠傷寒沙門氏菌株TA100;d)大腸桿菌WP2uvrA,或WP2uvrA(pKM101),或鼠傷寒沙門氏菌株TA102;26.2菌株特性a)在收到培養(yǎng)菌株后；e)使用主平板傳代時；自發(fā)回變(抗氨芐青霉素)修復(fù)缺陷十十十十十十十十十十十 十十十十十 十十十十十十十十十一十“十”表示具有R因子。d“+”表示有四環(huán)素抗性?！?”表示無修復(fù)能力。該數(shù)值為參考值，可在驗證的基礎(chǔ)上確定本實驗室的規(guī)定數(shù)值范6.3.2.1加熱融化底層培養(yǎng)基兩瓶(一瓶不加組氨酸，一瓶加組氨酸),不加組氨酸者每100mL底層培養(yǎng)基中加0.5mmolD-生物素0.6mL;加組氨酸者每100mL底層培養(yǎng)基中加L-組氨酸1mL(每100mL中含0.4043g)和0.5mmolD-生物素0.6mL,冷卻至50℃左右，各倒兩個平皿。36.3.7.1每株菌準(zhǔn)備底層培養(yǎng)基平皿2個，同時融化頂層培養(yǎng)基2管，每管2mL,在45℃水浴中鑒定合格的菌種應(yīng)加入冷凍保護(hù)劑(例如光譜級二甲基亞砜(DMSO)或甘油),保存在深低溫4(如-80℃)或液氮中，或者冰凍干燥制成干粉，4℃保存。除液氮條件外，保存期一般不超過2年。主平板貯存在4℃,超過兩月后丟棄，TA102主平板保存兩周后與試驗和對照樣品接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)12置電熱干燥箱內(nèi)160℃2h。根據(jù)GB/T16886.12的原則制備試驗液。可采用生理鹽水和/或其他適宜溶劑作每一試驗菌株推薦的誘變劑和濃度見表2,適宜時也可采用其他已知誘變劑。陽性對照十對二甲基氨基苯重氮磺酸鈉(敵克松)1.0mg/mL,用無菌注射用水配制十對二甲基氨基苯重氮磺酸鈉(敵克松)1.0mg/mL,用無菌注射用水配制十2-氨基芴0.1mg/mL,用DMSO配制一對二甲基氨基苯重氮磺酸鈉(敵克松)1.0mg/mL,用無菌注射用水配制十甲基磺酸甲酯0.1mg/mL,用無菌注射用水配制—5表2(續(xù))陽性對照十疊氮化鈉1.0mg/mL,用無菌注射用水配制十2-氨基芴0.1mg/mL,用DMSO配制疊氮化鈉1.0mg/mL,用無菌注射用水配制十對二甲基氨基苯重氮磺酸鈉(敵克松)1.0mg/mL,用無菌注射用水配制注：誘變劑可配制為10×貯備液，分裝在具塞玻璃試管內(nèi)2℃~8℃貯存，臨用時稀釋至上述濃度12.2在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入每種試驗菌株新鮮菌液0.1mL,混勻；試驗樣品組分別加612.3.陰性對照組分別加入0.1mL浸提介質(zhì)，活化組再加10%S9混合液0.5mL,無活化組加入0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液0.5mL。陽性對照組分別加表2列出的誘變劑0.1mL,活化組再加10%7A.1.1選健康雄性成年SD或Wistar大白鼠，體重150g左右，約5～6周齡。將多氯聯(lián)苯(AroclorA.1.2第6天用頸動脈放血法處死動物，打開腹腔，用20mL新鮮冷至4℃的0.15mol/L氯化鉀溶續(xù)沖洗數(shù)次，以便除去能抑制微粒體酶活性的血紅蛋白。每克肝(濕重)加0.1mol/L氯化鉀溶液3mL,連同燒杯移入冰浴中，用滅菌剪刀剪碎肝臟，在玻璃勻漿器(低于4000r/min,往復(fù)1min~冰速凍后置-80℃低溫保存，保存期不超過一年。A.2S9混合液輔助因子A.2.30.2mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4),每500mL由以下成分組成：磷酸氫二鈉(Na?HPO?)(14.2g/500mL)440mL磷酸二氫鈉(NaH?PO?·H?O)(13.8g/500mL)60mL調(diào)pH為7.4,0.103MPa20min滅菌或濾菌。4℃保存。保存(-20℃以下)。保存(-20℃以下)。氯化鉀溶液(1.65mol/L)8B.1培養(yǎng)基與試劑胰胨(或混合蛋白胨)5.0g加熱溶解，調(diào)節(jié)pH為7.2,分裝后0.103MPa20min滅菌。4℃保存。加熱融化后調(diào)節(jié)pH為7.2;0103MPa20mn滅菌檸檬酸(C?HO,·H?O)磷酸氫二鉀(RHPO?)硫酸鎂(MgSO?7H?O)加蒸餾水至100mB0.103MPa20min滅菌。4℃保存。將40.0g葡萄糖加蒸餾水至100mL,0.055MPa20min滅菌。4℃保存。加蒸餾水至400mL融化后0.103MPa20min滅菌。40%葡萄糖溶液20mL90.02mol/L鹽酸緩沖液稀釋至5mL,保存于40%葡萄糖溶液50mL0.8%氨芐青霉素溶液