工作報告之生物化學(xué)實驗報告書

生物化學(xué)實驗報告書【篇一：2014生物化學(xué)實驗報告冊模板】生物化學(xué)實驗報告姓名：學(xué)號：專業(yè)年級：組別：第六實驗室生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教學(xué)中心實驗名稱實驗日期2014-03-01合作者評分folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量實驗地點指導(dǎo)老師教師簽名第二實驗室批改日期格式要求：正文請統(tǒng)一用：小四號，宋體，1.5倍行距；數(shù)字、英文用timesnewroman；標(biāo)題用：四號，黑體，加粗。需強(qiáng)調(diào)的地方請用藍(lán)顏色標(biāo)出。不得出現(xiàn)多行、多頁空白現(xiàn)象。一、實驗?zāi)康亩?、實驗原理三、材料與方法：以流程圖示意四、結(jié)果與討論：①結(jié)果：實驗數(shù)據(jù)、現(xiàn)象、圖譜；②討論：以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論，并得出結(jié)論。【篇二：生物化學(xué)實驗報告】實驗一糖類的性質(zhì)實驗（一）糖類的顏色反應(yīng)一、實驗?zāi)康?、了解糖類某些顏色反應(yīng)的原理。2、學(xué)習(xí)應(yīng)用糖的顏色反應(yīng)鑒別糖類的方法。二、顏色反應(yīng)2、器材試管及試管架，滴管3、試劑1％葡萄糖溶液100ml1％果糖溶液100ml1％蔗糖溶液100ml1％淀粉溶液100ml0.1％糠醛溶液100ml濃硫酸500ml4、實驗操作取5支試管，分別加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1ml。再向5支試管中各加入2滴莫氏試劑，充分混合。傾斜試管，小心地沿試管壁加入濃硫酸1ml，慢慢立起試管，切勿搖動。觀察記錄各管顏色。（二）間苯二酚反應(yīng)1、原理在酸作用下，酮醣脫水生成羥甲基糠醛，后者再與間苯二酚作用生成紅色物質(zhì)。此反應(yīng)是酮醣的特異反應(yīng)。醛糖在同樣條件下呈色反應(yīng)緩慢，只有在糖濃度較高或煮沸時間較長時，才呈微弱的陽性反應(yīng)。實驗條件下蔗醣有可能水解而呈陽性反應(yīng)。2、器材試管及試管架，滴管3、試劑塞氏試劑：0.05％間苯二酚－鹽酸溶液1000ml，稱取間苯二酚0.05g溶于30ml濃鹽酸中，再用蒸餾水稀至1000ml。1％葡萄糖溶液100ml1％果糖溶液100ml1％蔗糖溶液100ml4、實驗操作取3試管，分別加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5ml。再向3支試管中各加入塞氏試劑5ml，充分混合。將試管同時放入沸水浴中，。觀察記錄各管顏色。(二)糖類的還原作用一、實驗?zāi)康?、理解并掌握糖類的還原性質(zhì)；2、學(xué)習(xí)常用的鑒定糖類還原性的方法。3、了解斐林氏、本尼迪克特試法檢驗糖的原理。二、實驗原理實驗三粗脂肪的提取和定量測定一實驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)和掌握粗脂肪提取的原理和測定方法。2.熟悉和掌握重量分析的基本操作，包括樣品的處理、定量轉(zhuǎn)移、烘干、恒重等。二實驗原理本法為重量法，用脂肪溶劑將脂肪提出后進(jìn)行稱量。該法適用于固體和液體樣品，通常將樣品浸于脂肪溶劑，如乙醚或沸點為30-60度的石油醚，借助于索氏提取管進(jìn)行循環(huán)抽提。本法提取的脂溶性物質(zhì)為脂肪類似物的混合物，其中含有脂肪，游離脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些色素及有機(jī)酸等，因此，稱為粗脂肪。用該法測定樣品含油量時，通常采用沸點低于60度的有機(jī)溶劑，此時，樣品中結(jié)合狀態(tài)的脂類（脂蛋白）不能直接提取出來，所以該法又稱為游離脂類定量測定法。三儀器、試劑和材料1.儀器索式提取器，分析天平，燒杯，烘箱，干燥器，恒溫水浴，脫脂棉，脫脂濾紙，鑷子2試劑和材料石油醚芝麻或者花生等油料種子。四、實驗步驟1.樣品的準(zhǔn)備將花生在80度烘箱內(nèi)烘去水分，烘干時需避免過熱，冷卻后準(zhǔn)確地稱取1克左右放入研缽中研碎，再用濾紙將樣品包裹好放入索氏提取管內(nèi)。注意勿使紙包內(nèi)樣品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研缽應(yīng)用濾紙擦凈并將濾紙放入提取管內(nèi)，用少量溶劑洗滌研缽，將溶劑倒入提取管中2.抽提2.1洗凈提取瓶于105度烘干至恒重，記下其重量。裝入石油醚達(dá)提取瓶容積的一半，連接提取器各部分，不能漏氣（不能用凡士林或真空脂）。2.2加熱提?。菏故兔衙啃r循環(huán)10-20次，約2-2.5小時，用濾紙粗略判斷脂肪是否提取完全。2.3蒸去石油醚，烘干至恒重。3.稱量計算思考題1、索式提取法提取的為什么是粗脂肪？2、做好本試驗應(yīng)注意哪些事項？3、本實驗裝置磨口處為什么不能涂抹凡士林或真空脂？【篇三：生物化學(xué)實驗報告】2012年生物化學(xué)實驗b姓名：學(xué)號：實驗時間：實驗分組：組內(nèi)成員：任課教師：實驗報告xxxx2012年11月17日摘要本實驗通過從小牛腸中通過刮去，離心，析出等方式提取小牛腸堿性磷酸酶，再通過sds-聚丙烯凝膠電泳測定蛋白質(zhì)相對分子量，利用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量及測定酶的活性。1.實驗部分1.1試劑與儀器1.試劑：（1）正丁醇、丙酮。（2）1mol/l醋酸，1mol/lnaoh，硫酸銨。（3）平衡緩沖液：0.01mol/ltris-hcl，ph8.0。（4）底物緩沖液：1mol/l二乙醇胺-鹽酸緩沖液。（7）分離膠緩沖液：1.5mol/ltris-hcl緩沖液，ph8.8，已加入10%sds。（8）濃縮膠緩沖液：0.5mol/ltris-hcl緩沖液，ph6.8，已加入10%sds。（9）10%過硫酸銨。（10）temed（四甲基乙二胺）。（11）上樣緩沖液：稱100mgsds、2mg溴酚藍(lán)、2g甘油，加0.1ml巰基乙醇、2ml0.05mol/lph8.0tris-hcl，加超純水定容至10ml。（12）染色液：配置含0.1%考馬斯亮藍(lán)r250，40%甲醇和10%冰醋酸的染色液500ml，過濾后備用。（13）脫色液：500ml10%甲醇和10%冰醋酸的脫色液1000ml。（14）電泳緩沖液。2.儀器勻漿機(jī)、eppebdorf5型冷凍離心機(jī)、gsy—2型恒溫水浴、uv762型紫外可見分光光度計。離心管，剪刀，載玻片，不銹鋼盤，搪瓷盤，濾布，漏斗，分液漏斗，量筒，燒杯，移液搶，比色皿，dyy—11型電泳儀，24d型電泳槽，制膠板，揺床，移液槍。1.2小牛腸堿性磷酸酶提取方法1）取新鮮小牛腸，用剪刀剖開，用載玻片刮取小腸內(nèi)粘膜，放到盤子一角。2）將小腸粘膜液集中倒入勻漿機(jī)中，加冰冷蒸餾水，高速勻漿，重復(fù)多次。3）緩慢加入冰冷正丁醇高速勻漿重復(fù)多次。在4℃，10000rpm條件下離心。4）用濾布過濾去除雜質(zhì)，倒入分液漏斗中，靜止分層，取下層水相，用hac溶液調(diào)ph到4.9。4℃，10000rpm，離心。5）得到上清后放入離心管中，用naoh溶液調(diào)ph至6.5，稱取硫酸銨加到離心管中溶解；再加冰冷丙酮，混勻，4℃靜置30min以上。4℃，10000rpm，離心。6）上清液中加入冰冷丙酮，4℃放置30min以上。4℃，10000rpm，離心。7）取沉淀溶于平衡緩沖液至全部溶解至冰箱保存待用。8）底物處理：底物37℃水浴5min。1.3小牛腸堿性磷酸酶酶活檢測方法1）將酶稀釋10倍。2）紫外分光光度計檢測條件為405nm波長，測定時間60s，取值2s，記錄范圍0.0-1.5。3）取2個2ml比色皿，加入上述（2）加熱的底物緩沖液，校對歸零。4）將稀釋10倍的酶液加到其中1個比色皿中（儀器外側(cè)），用手堵住皿口?？焖偕舷碌?次，放回分光光度計中，測定酶動力學(xué)曲線1.4聚丙烯凝膠制備1）裝板：將垂直板型電泳的玻璃片洗凈、晾干；放好膠條，用夾子夾好玻璃板，上面插上梳子，垂直放置在水平臺面上備用。2）制備分離膠：在小燒杯中按下表配制所需濃度的分離膠。分離膠制備（濃度10%，制備量10ml）試劑用量h2o30%丙烯酰胺1.5mol/ltris-hcl緩沖液ph8.810%過硫酸銨temed3）制備濃縮膠：在小燒杯中按下表配制所需濃度的濃縮膠。濃縮膠制備（濃度5%，制備量6ml）試劑h2o30%丙烯酰胺0.5mol/ltris-hcl緩沖液ph6.810%過硫酸銨temed4）蛋白樣品處理：在1.5ml離心管中按1：1體積比例，加樣品和上樣緩沖液，100?c加熱使蛋白變性。5）濃縮膠完全聚合后，去掉夾子和膠條，拔去梳子，將凝膠玻璃板固定于電泳裝置內(nèi)槽上，加入電泳緩沖液，緩沖液高過玻璃板凹面。1.5考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量1）玻璃試管中加入考馬斯亮藍(lán)。2）在1.5ml離心管中，取酶液分別稀釋50、100、200倍。5）取2個比色皿，加入考馬斯亮藍(lán)，分光光度計中校對歸零。6）將樣品放入外側(cè)比色皿中，讀吸光值。7）根據(jù)蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算酶蛋白濃度。1.6sds-聚丙烯凝膠電泳測定蛋白質(zhì)相對分子量1）用移液槍依次在泳道加樣。2）電泳：連接正、負(fù)極，待溴酚蘭指示劑遷移至下沿處，停止電泳。3）剝膠染色：電泳結(jié)束后，取出凝膠玻璃板，用水沖洗，將剝離下來的凝膠用水漂洗，轉(zhuǎn)入染色缸中，加染色液，置搖床染色。4）脫色：染色完畢，回收染色液，用水漂洗，加入脫色液，置搖床脫色，脫色至背景清晰。5）觀察測定蛋白的遷移率及條帶，對照標(biāo)準(zhǔn)樣品，分析蛋白樣品的分子量及純度。6）拍照電泳結(jié)果，用于完成實驗報告。2.結(jié)果與討