藥物分析第二章

依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)、或生物學(xué)的方法判斷藥物及其制劑的真?zhèn)?。第一?jié)藥物鑒別試驗(yàn)的定義與目的

鑒別實(shí)驗(yàn)IdentificationTest鑒別試驗(yàn)不是對(duì)未知物進(jìn)行定性分析。2.藥物只有在鑒別無誤的情況下,進(jìn)行雜質(zhì)檢查，含量測(cè)定等分析才有意義。3.專屬性強(qiáng)，再現(xiàn)性好，靈敏度高，簡便快速。一、性狀：對(duì)于化學(xué)原料藥，結(jié)合性狀項(xiàng)下的外觀與物理常數(shù)進(jìn)行確認(rèn)第二節(jié)鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目

物理常數(shù)的測(cè)定結(jié)果不僅對(duì)藥品具有鑒別意義，也反映藥品的純度及療效，是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。構(gòu)成法定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定方法收載于藥典附錄。（一）外觀（二）溶解度（三）物理常數(shù)（一）外觀：藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤及臭、味等性質(zhì)。維生素B1的描述為“本品為白色結(jié)晶粉末；有微略的特臭，味苦，干燥品在空氣中迅速吸收約4%的水份”（二）溶解度在一定程度上反應(yīng)了藥品的純度、晶型和粒度，也可供精制或制備溶液時(shí)參考。溶解度不合格代表什么？極易溶解到幾乎不溶或不溶磺胺嘧啶”在已醇或丙酮中微溶,在水中幾乎不溶，在氫氧化鈉試液中易溶，在稀鹽酸中溶解。方法：除另有規(guī)定外，稱取研成細(xì)粉的供試品或量取液體供試品，于25°C±2°C一定量的溶劑中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆粒或液滴時(shí)，即視為完全溶解。（三）

物理常數(shù)

相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、粘度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。（1）熔點(diǎn)：一種物質(zhì)按規(guī)定的方法測(cè)定，由固體熔化成液體的溫度、熔融同時(shí)分解的溫度或熔化時(shí)自初熔至全熔的一段溫度。測(cè)定方法見藥典附錄：第一法：易粉碎固體藥品“初熔”至“全熔”升溫速度：1.0~1.5oC/min2.5~3.0oC/min雌二醇：本品的熔點(diǎn)為175~180oC。醋酸地塞米松：本品的熔點(diǎn)為223~233oC,熔融時(shí)同時(shí)分解。(2)比旋度在一定波長與溫度下，偏振光透過長1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。維生素C的比旋度測(cè)定取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋使成每1ml中約含0.10g的溶液，依法測(cè)定，比旋度為+

20.5°~21.5°。（3）吸收系數(shù)在給定波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度E1cm1%百分吸收系數(shù)溶液濃度1%(W/V)

液層厚度1cm

鹽酸氨溴索取本品適量，精密稱定，加0.01

mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含25μg的溶液，在244nm的波長處測(cè)定吸光度，吸收系數(shù)（

）為233

~247。

E1cm1%

例：苯甲酸

[性狀]本品為白色有絲光的鱗片或針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；質(zhì)輕；無臭或微臭；在熱空氣中微有揮發(fā)性；水溶液顯酸性反應(yīng)。本品在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在沸水中溶解，在水中微溶。熔點(diǎn)本品的熔點(diǎn)（附錄ⅣC）為121.0～124.5℃。

二、一般鑒別試驗(yàn)（generalidentificationtest）

是依據(jù)某一類藥物的物理化學(xué)性質(zhì)為依據(jù),通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物真?zhèn)巍Ｖ荒茏C實(shí)是某一類藥物,而不能證實(shí)是哪一種藥物不適用于混合藥物或干擾物質(zhì)存在的情況

一般鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目：

丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、無機(jī)金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽）、有機(jī)酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽）、無機(jī)酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物）。（一）有機(jī)氟化物一般鑒別試驗(yàn)茜素氟藍(lán)藍(lán)紫色絡(luò)合物（二）

有機(jī)酸鹽一般鑒別試驗(yàn)1.水楊酸鹽（1）取供試品稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。（2）取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色楊酸沉淀，分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。2.酒石酸鹽加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在試管內(nèi)形成銀鏡。3.芳香第一胺亞硝酸鈉+b-萘酚試液橙紅色到猩紅色沉淀4.托烷生物堿類Vitali反應(yīng)（十三章）5.無機(jī)金屬鹽鈉、鉀、鈣、鋇等鹽的焰色反應(yīng)銨鹽6.無機(jī)酸根氯化物硫酸鹽硝酸鹽

通過一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物。例如:鈉鹽的焰色試驗(yàn),不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯鉀酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。

必須在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,再進(jìn)行專屬鑒別試驗(yàn)，方可確認(rèn)。一般鑒別試驗(yàn)三、專屬鑒別試驗(yàn)(specificidentificationtest）

證實(shí)某一種藥物的依據(jù)。它根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其引起的物理化學(xué)性質(zhì)不同,選用某些靈敏的定性反應(yīng),來鑒別藥物真?zhèn)?。苯巴比妥巴比妥巴比妥苯巴比妥司可巴比妥丙二酰脲母核（附錄III）一般鑒別試驗(yàn)

區(qū)別不同類別的藥物。專屬鑒別試驗(yàn)

則是在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，區(qū)別同類藥物的各個(gè)單體。（一）化學(xué)鑒別法（二）光譜鑒別法（三）色譜鑒別法第三節(jié)鑒別方法

將供試品直接加熱或在適當(dāng)?shù)娜軇┲?于一定條件下進(jìn)行反應(yīng),發(fā)生易于觀測(cè)的化學(xué)變化。一、化學(xué)鑒別法(1)呈色反應(yīng)鑒別法(2)沉淀生成反應(yīng)鑒別法(3)熒光反應(yīng)鑒別法(4)氣體生成鑒別法（5）使試劑褪色的鑒別方法（6）測(cè)定生成物的熔點(diǎn)①三氯化鐵呈色反應(yīng)對(duì)乙酰氨基酚②異羥肟酸鐵反應(yīng)氯貝丁酯

（紫色）鹽酸羥胺+氫氧化鈉稀鹽酸+FeCl3Cl(1)呈色反應(yīng)鑒別法（紫色）③茚三酮呈色反應(yīng)左旋多巴（紫色）

具有類似

-氨基酸結(jié)構(gòu)如氨甲苯酸，可與茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色的縮合物對(duì)乙酰氨基酚呈色反應(yīng)鑒別法④重氮化-偶合呈色反應(yīng)亞硝酸鈉+b-萘酚試液橙紅色到猩紅色沉淀⑤氧化還原呈色反應(yīng)鹽酸氯丙嗪硫氮雜蒽母核氧化反應(yīng)，硝酸顯紅色，漸變黃色

呈色反應(yīng)鑒別法(2)沉淀生成反應(yīng)鑒別法①與金屬離子的沉淀反應(yīng)②丙二酰脲類的硝酸銀反應(yīng)③生物堿沉淀劑反應(yīng)其它沉淀反應(yīng)(3)熒光反應(yīng)鑒別法

藥物本身在可見光下發(fā)射熒光

藥物與適當(dāng)試劑反應(yīng)后發(fā)射熒光(4)氣體生成反應(yīng)鑒別法①大多數(shù)伯胺（銨）類藥物、酰尿類以及某些酰胺類藥物,可經(jīng)強(qiáng)堿處理后加熱產(chǎn)生氨氣。巴比妥類藥物②化學(xué)結(jié)構(gòu)含硫藥物,可經(jīng)強(qiáng)酸處理后加熱產(chǎn)生硫化氫氣體。硫鳥嘌呤

舒林酸SO2氣體碘-淀粉試紙褪色③含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱可生成紫色碘蒸氣碘苷④含醋酸酯和乙酰胺類藥物經(jīng)硫酸水解后,加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味對(duì)乙酰氨基酚(一）紫外光譜鑒別法二、光譜鑒別法(一）紫外光譜鑒別法二、光譜鑒別法(1)測(cè)定最大吸收波長,或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長.乙胺嘧啶供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì)中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷.(2)規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸光度示例一鹽酸布比卡因…………..在263nm與271nm的波長處有最大吸收，其吸光度分別為

0.53~0.58與0.43~0.48（3）規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法（4）規(guī)定吸收波長和吸收度比值法

兩性霉素B在362nm、381nm、405nm波長處有最大吸收.規(guī)定362nm與381nm處吸收度比值不大于0.6、381nm與405nm波長比值不大于0.9.（5）經(jīng)化學(xué)處理后,測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。取苯妥英納10mg，加高錳酸鉀10mg、氫氧化鈉0.25g、水10ml,加熱5分鐘，放冷，取上清液5ml，加正庚烷20ml,振搖提取，靜置分層，取加正庚烷提取液，248nm有最大吸收。（6）與對(duì)照品比較,對(duì)比吸收光譜的一致性（USP29）

己稀雌酚注射液用供試品溶液250~450nm波長吸收光譜與對(duì)照品是否一致鑒別.（7）兩種濃度的供試液分別測(cè)定其最大吸收波長示例三氯鋇丁酯的鑒別試驗(yàn)（二）

紅外光譜法中國藥典采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法“本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集xx圖）一致”

BP采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法、對(duì)照品法USP采用對(duì)照品法JP規(guī)定條件下測(cè)定一定波長處特征吸收峰.對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例1：熊膽、牛膽、豬膽的紅外圖譜比較在特征區(qū)和指紋區(qū)三者則有明顯的差別光譜法——紅外分光光度法熊膽牛膽豬膽（三）近紅外光譜法（四）原子吸收法（五）核磁共振法（六）質(zhì)譜鑒別法（七）X射線粉末衍射法三、色譜法（HPLCGCTLC)

適用于復(fù)雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時(shí)進(jìn)行的特點(diǎn)。采用與對(duì)照品（或經(jīng)確證的已知藥品）在相同的色譜條件下進(jìn)行色譜分離，并進(jìn)行比較其保留行為。（一）薄層掃描法(TLC)1.對(duì)照品比較法供試品與對(duì)照品主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)一致。比移值2.供試品與對(duì)照品混合3.選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相識(shí)藥物的

對(duì)照品比較4.兩種溶液混合(二）高效液相色譜法(HPLC)

（含量測(cè)定）供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致。內(nèi)標(biāo)（三）氣相色譜法(GC)

同HPLC要求四、顯微鑒別法五、生物學(xué)法生物效應(yīng)鑒別法、基因鑒別法例：掌葉大黃粉末顯微特征草酸鈣簇晶：多、大、棱角短鈍。淀粉粒：類球或長圓形，臍點(diǎn)多星狀；復(fù)粒由2~8分粒