c-fos基因表達及應(yīng)激性胃黏膜損傷相關(guān)性

1/1c-fos基因表達及應(yīng)激性胃黏膜損傷相關(guān)性1c-fos基因表達及應(yīng)激性胃黏膜損傷相關(guān)性作者：

宋政軍周曉麗畫偉萇新明李長順【摘要】目的探討c-fos基因表達在心理應(yīng)激性胃黏膜損傷發(fā)生機制中的作用。

方法利用光電刺激儀，建立心理應(yīng)激動物模型。

大鼠隨機分為3組，對照組(C)、規(guī)則光組(R)和不規(guī)則光組(I)。

計數(shù)胃黏膜損傷指數(shù)(UI)，觀察胃黏膜組織學(xué)變化；采用比色法測定胃黏膜和血液中丙二醛(MDA)的水平；免疫組化法觀察胃黏膜中ccfos基因的表達情況。

結(jié)果①R組和I組的UI值明顯高于對照組(Plt;0.05)，且隨著應(yīng)激時間的延長而逐漸升高；②胃黏膜中ccfos表達水平隨應(yīng)激時間的延長而升高，R組與I組明顯高于對照組；③ccfos表達水平與黏膜MDA含量呈正相關(guān)(r=0.693，Plt;0.05)。

結(jié)論心理應(yīng)激性胃黏膜損傷程度隨應(yīng)激時間的延長和嚴重程度的增加而加重；心理應(yīng)激下胃黏膜ccfos表達可能與氧自由基大量生成有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】心理應(yīng)激；丙二醛；ccfos基因CorrClCtCoCCCtCCCCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCCCstrCcmucosClCsCoCCCCucCCCyCsycholoCCcClstrCssCCrCtsABSTRACT:OCjCctCvCTostuCyrClCtCoCshCC2CCtCCCCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCoCyCCCfrCCrCCCcClCCCCstrCcmucosClCsCoCCCCucCCCyCsycholoCCcClstrCssCCrCts.MCthoCsThCrCtsCCrCCCvCCCCCCto3CrouCsrCCComly:rCCulCrflCshCCClCChtCrouC(CrouCR),CrrCCulCrflCshCCClCChtCrouC(CrouCI)CCCcoCtrolCrouC(CrouCC).ThCcoCtCCtsofmCloCClCChyCC(MDA),CCCCCstrCculcCrCCCCC(UI)CCrCmCCsurCCCftCrstrCssCCCCffCrCCtCrouCs.ThCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCCstrCcmucousCCsCCtCctCCCyCmmuCochCmCstry.RCsults①UICCcrCCsCCsCCCCfCcCCtlyCCCrouCICCCCrouCR.②ThCcoCtCCtofMDACCsCCcrCCsCCmorCsCCCCfCcCCtlythCCthCtofthCcoCtrols.③ThCccfosCCCrCssCoCCCCCstrCcmucosCCCssCCCCfCcCCtlycorrClCtCCCCthMDAcoCtCCt(r=0.693,Plt;0.05).ACCthCCCCrCssCoClCvClCCsCCcrCCsCCCrCCuCllyfolloCCCCthCstrCsstCmC.CoCclusCoC①UCCCrthCCsycholoCCcClstrCsscoCCCtCoC,CCstrCcmucosClCsCoCCsCCCrCvCtCCCCththCCroloCCCCtCmC.②ThCccfosCCCrCssCoCCCCCstrCcmucosCCscorrClCtCCCCthoCyCCCfrCCrCCCcCls.ACCccfosCCCrCssCoCmCyCCCCCucCCCyoCyCCCfrCCrCCCcCls.KEYWORDS:CsycholoCCcClstrCss;mCloCClCChyCC3(MDA);ccfosCCCC隨著社會的發(fā)展，職業(yè)競爭、工作壓力等均可引起應(yīng)激反應(yīng)，心理應(yīng)激對機體造成的危害越來越受到重視[1]。

為此，探討心理應(yīng)激性胃黏膜損傷的發(fā)病機制，對于臨床治療和預(yù)防心理應(yīng)激性胃黏膜損傷具有重要意義。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)激大鼠胃組織內(nèi)ccfos基因表達升高。

在本研究中，我們主要探討ccfos基因與應(yīng)激性胃黏膜損傷的發(fā)生的關(guān)系，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1材料與方法1.1實驗動物SCrCCuCcDCClCy(SD)雄性大鼠144只，體重180-220C，購于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

室溫(202)℃，自然光照,大鼠標準飼料，自由進水。

1.2試劑及儀器丙二醛(MDA)測試盒購自南京建成生物工程研究所；ccfos免疫組化試劑盒購自西安寶信生物工程公司。

光電刺激器由西安交通大學(xué)公共衛(wèi)生系研制，刺激電流由SMIc1型動物實驗儀供給，電流強度1.0mA，電壓80V，持續(xù)2s。

1.3方法參照文獻[2]制備心理應(yīng)激動物模型。

實驗分3期進行。

Ⅰ期(適應(yīng)期，1-7C)：

所有動物每天放置實驗盒內(nèi)25mCC，適應(yīng)環(huán)境并篩選，動物一般在第4天自動鉆入實驗盒，不鉆者剔除，以消除實驗盒對大鼠造成的應(yīng)激的影響。

Ⅱ期(心理應(yīng)激形成期，8-14C)，從第8天起大鼠隨機4分為3組，即對照組(C組)、規(guī)則光組(R組)和不規(guī)則光組(I組)，其中R組和I組又依應(yīng)激天數(shù)分為2、4、6、8C4個亞組，每個亞組16只大鼠。

C組不給光電刺激，每天僅在實驗盒內(nèi)呆20mCC；R組給予規(guī)則光電刺激，即光照和電刺激的間隔為6s，兩次光照的間隔為20s，總時間為20mCC；I組給予不規(guī)則光照和電擊，即光照和電擊的先后次序、間隔時間是隨機的，但在20mCC內(nèi)接受的總刺激同R組。

Ⅲ期(心理應(yīng)激記憶期，15C以后)，除不給電刺激外，余同Ⅱ期。

參照Guth評價胃黏膜損傷指數(shù)(ulcCrCCCCC,UI)，即胃黏膜損傷面積＜1mm記1分；1-2mm記2分；2-3mm記3分；3-4mm記4分；＞4mm即分段測量，全胃得分之和為損傷指數(shù)。

用752c2型分光光度計比色測定血清及胃黏膜中MDA活性，免疫組化染色檢測胃黏膜中ccfos基因的表達。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理實驗結(jié)果用均數(shù)標準差表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件分析。

兩組間均數(shù)比較采用t檢驗，取雙測＝0.05或＝0.01，Plt;0.05或Plt;0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果2.1應(yīng)激大鼠胃黏膜損傷指數(shù)(UI)隨著應(yīng)激天數(shù)的增加，胃黏膜損傷程度逐漸加重，R組、I組胃黏膜損傷較對照組明顯(Plt;0.05)。

在同一時間點I組較R組損傷明5顯，I組UI高于R組。

兩組在第6天胃黏膜損傷最重(表1，圖1、2、3)。

表1應(yīng)激大鼠胃黏膜損傷指數(shù)(UI)的比較（略）TCClC1ThCcomCCrCsoCofCCstrCculcCrCCCCCoCstrCssCCrCts*Plt;0.05,**Plt;0.01vs.2C圖1對照組胃黏膜的結(jié)構(gòu)（略）FCC.1GCstrCcmucousmCmCrCCCstructurCofcoCtrolCrouC(400)圖2心理性應(yīng)激6CR組胃黏膜的結(jié)構(gòu)（略）FCC.2GCstrCcmucousmCmCrCCCstructurCofrCCulCrflCshCCClCChtCrouCCftCr6CCys(400)圖3心理性應(yīng)激6CⅠ組胃黏膜的結(jié)構(gòu)（略）FCC.3GCstrCcmucousmCmCrCCCstructurCofCrrCCulCrflCshCCClCChtCrouCCftCr6CCys(400)2.2應(yīng)激大鼠胃黏膜、血漿MDA值從Ⅱ期應(yīng)激開始，在第2、4、6、8天各應(yīng)激時間點，R組、I組MDA升高。

其中R組在應(yīng)激第6、第8天MDA升高明顯(Plt;0.01，Plt;0.05)，而I組從應(yīng)激的第4天起，MDA即有明顯升高(Plt;0.05)，第6、8天顯著升高(Plt;0.01)。

R組、I組兩組總的MDA水平均高于對照組(Plt;0.05)。

在同一應(yīng)激6時間點，I組MDA水平均高于R組，在應(yīng)激第6、8天，R組與I組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05，表2、3)。

表2胃黏膜MDA的含量（略）TCClC2ThCscorCsofMDACCCCstrCcmucosC*Plt;0.05vs.coCtrolCrouC;#Plt;0.05vs.rCCulCrflCshCCClCChtCrouC表3血漿MDA的濃度（略）TCClC3ThCscorCsofMDACCClooCClCsmC*Plt;0.05,**Plt;0.01vs.coCtrolCrouC;#Plt;0.05vs.rCCulCrflCshCCClCChtCrouC2.3應(yīng)激大鼠胃黏膜ccfos表達胃黏膜ccfos免疫組化染色結(jié)果顯示，ccfos陽性顯色為棕褐色顆粒，主要表達于細胞核，多在胃黏膜中下1/3靠近基底層處(圖4)。

圖4胃黏膜ccfos免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（略）FCC.4ThCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCCstrCcmucousCyCmmuCochCmCstry(400)I組與R組胃黏膜中ccfos表達隨著應(yīng)激時間的延長而逐漸增強，在第6、8天增強更明顯(Plt;0.01)。

兩組較對照組明顯增強(Plt;0.01)。

在同一時間點，I組高于R組(Plt;0.05)。

兩組在第6天表達達高峰(表4)。

表4應(yīng)激大鼠胃黏膜ccfos表達(陽性細胞計數(shù))（略）7TCClC4ThCccfosCCCrCssCoCCCCCsrCCcmucosCofstrCssCCrCts*Plt;0.05,**Plt;0.01vs.coCtrolCrouC;#Plt;0.01vs.rCCulCrflCshCCClCChtCrouC2.4胃黏膜ccfos表達與MDA的關(guān)系胃黏膜ccfos的表達與胃黏膜中MDA水平呈正相關(guān)(r=0.693，Plt;0.01)。

3討論應(yīng)激引起胃黏膜損傷的發(fā)生機制頗為復(fù)雜，涉及到中樞神經(jīng)內(nèi)分泌的改變，胃黏膜自身的防御與侵襲因素的失衡及多種細胞因子的參與等。

氧自由基是形成應(yīng)激性胃潰瘍的重要原因之一。

它參與了胃黏膜的損傷過程。

氧自由基具有高度活性和細胞毒性，其引起組織細胞損傷的重要機制之一是觸發(fā)細胞質(zhì)膜上的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的鏈式反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷，引起和加劇炎癥反應(yīng)。

此外，還可與蛋白質(zhì)和酶發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸碎裂、聚合及構(gòu)象改變，造成細胞不可逆損傷，導(dǎo)致細胞壞死。

最終形成一系列脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物及其降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)等。

現(xiàn)常以MDA作為反映自由基產(chǎn)生情況、細胞受損的指標。

8ccfos基因是近年來研究心理應(yīng)激時的常用的一個指標。

它屬于即刻早期基因家族，受到細胞內(nèi)外各種刺激后可以快速的表達，在研究心理應(yīng)激腦機制過程中，常做為神經(jīng)元活動的定位和功能指標。

同時，ccfos基因表達還與缺血再灌注、細胞調(diào)亡、氧自由基等有聯(lián)系。

MCsCko等報道，在束縛c浸水應(yīng)激大鼠的胃黏膜上皮細胞、胃壁及小血管平滑肌層ccfos基因的表達升高，且早于胃黏膜損傷，ccfosmRcA的濃度與黏膜損傷程度不成比例；抑酸劑可以減輕胃黏膜損傷，但不能減少ccfos的表達。

因此，認為ccfos基因表達升高與胃黏膜血流障礙、氧自由基生成及缺血再灌注有關(guān)，而非黏膜損傷的反映。

自由基的增多可誘導(dǎo)缺血再灌注時ccfos的表達[3]。

在本實驗中，發(fā)現(xiàn)隨著應(yīng)激時間的延長，胃黏膜損傷程度的加重，ccfos表達逐漸增加，并與MDA水平呈正相關(guān)。

可能為心理應(yīng)激時，交感神經(jīng)興奮，血中兒茶酚胺增多，微循環(huán)灌注障礙，使黏膜發(fā)生出血、缺血、缺氧，進而使自由基生成增多，導(dǎo)致體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物過分堆積，自由基產(chǎn)生增多，組織出現(xiàn)過氧化損傷[4]。

同時，氧自由基的大量產(chǎn)生，可通過第二信使誘導(dǎo)ccfos的表達。

綜上所述，心理應(yīng)激條件下，大鼠胃黏膜損傷程度隨9應(yīng)激時間的延長而加重，并隨心理應(yīng)激嚴重程度的增加而加重；心理應(yīng)激大鼠胃黏膜ccfos蛋白表達和氧自由基大量