生物技術(shù)制藥題庫(kù)附加答案

1.利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點(diǎn)？答：1大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽，為臨床使用提供有效的保障；2、可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)，以便對(duì)其生理、生化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入的研究，從而擴(kuò)大這些物質(zhì)的應(yīng)用范圍；3、可以發(fā)現(xiàn)、挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)；4、內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用時(shí)存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造和去除；5、可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來(lái)源。2.基因工程藥物制造的主要程序有哪些？基因工程藥物制造的主要步驟有：目的基因的克隆，構(gòu)造DNA重組體，構(gòu)造工程菌，目的基因的表達(dá)，外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化產(chǎn)品的檢驗(yàn)?zāi)孓D(zhuǎn)錄法：逆轉(zhuǎn)錄法就是先分離純化目的基因的mRNA，再反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后進(jìn)行cDNA的克隆表達(dá)。⒈mRNA的純化⒉cDNA第一鏈的合成⒊cDNA第二鏈的合成⒋cDNA的克隆⒌將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞：⒍cDNA文庫(kù)的鑒定：抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法⒎目的cDNA克隆的分離和鑒定：核酸探針雜交法、免疫反應(yīng)鑒定法4．基因工程宿主菌應(yīng)滿足那些要求？答：1、容易獲得較高濃度的細(xì)胞；2能利用廉價(jià)易得的原料；3、不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素；4、發(fā)熱量低，需氧低，適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)；5、容易進(jìn)行代謝調(diào)控；6、容易進(jìn)行DNA重組技術(shù)操作；7、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提取。5.表達(dá)載體須具備哪些條件？常用載體有哪些？答：1、能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。2、具多個(gè)限制酶切點(diǎn)，但每種切口最好只有1個(gè)，以便與外源基因連接。3、具有某些標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。4、所產(chǎn)生的mRNA必須有翻譯的起始信號(hào)。5、具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子。6、有很強(qiáng)的終止子。常用載體有：1、細(xì)菌細(xì)胞的質(zhì)粒。2、λ噬菌體載體。6。真核基因在原核細(xì)胞中表達(dá)載體必須具備條件⑴載體能夠獨(dú)立復(fù)制。載體本身是一個(gè)復(fù)制子，具有復(fù)制起點(diǎn)。⑵應(yīng)具有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記，以利于外源基因的克隆鑒定和篩選。⑶應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子，能為大腸桿菌RNA聚合酶所識(shí)別。⑷應(yīng)具有阻遏子，使啟動(dòng)子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。⑸應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子，只轉(zhuǎn)錄克隆的基因，所產(chǎn)生的mRNA較為穩(wěn)定。⑹所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號(hào)AUG和SD序列，以便轉(zhuǎn)錄后順利翻譯。影響目的基因在酵母菌中表達(dá)的因素⑴外源基因的拷貝數(shù)：⑵外源基因的表達(dá)效率；⑶表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性；⑷細(xì)胞代謝負(fù)荷：⑸工程菌的培養(yǎng)條件8.影響目的的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素有哪些？（1）外源基因的計(jì)量（2）外源基因的表達(dá)效率：a、啟動(dòng)子的強(qiáng)弱b、核糖體的結(jié)合位點(diǎn)c、SD序列和起始密碼的間距d、密碼子組成（3）表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性（4）細(xì)胞的代謝付荷（5）工程菌的培養(yǎng)條件9真核基因在大腸桿菌中的表達(dá)形式？答：有三種形式：(1)融合蛋白的表達(dá)形式。（由一段短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起的蛋白質(zhì),稱為融合蛋白.。）(2)非融合蛋白的表達(dá)形式。(3)分泌型表達(dá)形式。10質(zhì)粒不穩(wěn)定分為哪些類，產(chǎn)生的機(jī)制是什么？質(zhì)粒不穩(wěn)定分為分裂分為分裂不穩(wěn)定和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。質(zhì)粒的分裂不穩(wěn)定是指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒的子代菌的現(xiàn)象；質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定是DNA從質(zhì)粒上丟失或堿基重排，缺失所致工程菌性能的改變?；蚬こ叹倪z傳不穩(wěn)定性的的產(chǎn)生機(jī)制1．受體細(xì)胞中的限制修飾系統(tǒng)對(duì)外源重組DNA分子的降解2．外源基因的高效表達(dá)嚴(yán)重干擾受體細(xì)胞正常的生長(zhǎng)代謝3．重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞分裂時(shí)的不均勻分配，這是重組質(zhì)粒逃逸的基本原因4．受體細(xì)胞中內(nèi)源性的轉(zhuǎn)座元件促進(jìn)重組分子的缺失重排12分離純化工藝應(yīng)遵循以下原則：⑴具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性⑵盡可能減少組成工藝的步驟⑶各技術(shù)步驟間要相互適應(yīng)和協(xié)調(diào)⑷工藝過程中盡可能少用試劑⑸工藝所用時(shí)間要短⑹工藝和技術(shù)必須收率高、易操作、能耗低⑺具有較高的安全性16、動(dòng)物細(xì)胞的生理特點(diǎn)（⒈）動(dòng)物細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng)：（⒉）細(xì)胞生長(zhǎng)需貼附于基質(zhì)，并有接觸抑制現(xiàn)象。（⒊）正常二倍體細(xì)胞的生長(zhǎng)壽命是有限的。原代培養(yǎng)；（4)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)周圍環(huán)境十分敏感：對(duì)理化因素敏感，(⒌)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基要求高：必需氨基酸（12種）、維生素（8種）、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、葡萄糖、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、貼壁因子等。(⒍)動(dòng)物細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。19動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基細(xì)胞體外培養(yǎng)基本條件:①無(wú)菌②營(yíng)養(yǎng)充足,防止有害物質(zhì)③氧氣④隨時(shí)清除代謝有害物質(zhì)⑤良好的生存外環(huán)境：pH、滲透壓、離子濃度⑥及時(shí)分種，適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度20、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基的種類和組成⒈天然培養(yǎng)基：血清、羊水、腹水等。成分復(fù)雜、成分不穩(wěn)定，來(lái)源少。2.合成培養(yǎng)基（常用培養(yǎng)基成分及配方）⑴氨基酸⑵維生素⑶糖類⑷無(wú)機(jī)鹽⑸其它成分添加小牛血清的作用⑴提供生長(zhǎng)因子和激素⑵提供貼附因子和伸展因子⑶提供結(jié)合蛋白（識(shí)別離子、激素、維生素、脂質(zhì)）⑷提供必需脂肪酸和微量元素3.無(wú)血清培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：①提高重復(fù)性（細(xì)胞）②減少微生物污染（病毒）③供應(yīng)充足穩(wěn)定④細(xì)胞產(chǎn)品易純化⑤避免血清因素對(duì)細(xì)胞的毒性⑥減少血清中蛋白對(duì)生物測(cè)定的干擾21、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法1.懸浮培養(yǎng)2.貼壁培養(yǎng)3.貼壁-懸浮培養(yǎng)（假懸浮培養(yǎng)）23、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式1.分批式操作2.半連續(xù)式操作3.灌流式操作:取出、補(bǔ)充培養(yǎng)基，細(xì)胞仍保留在反應(yīng)器內(nèi)。優(yōu)點(diǎn)：1.營(yíng)養(yǎng)好，代謝廢物少。2.細(xì)胞密度高（107～108個(gè)/mL）產(chǎn)量高。3.產(chǎn)品罐內(nèi)停留時(shí)間短。4.培養(yǎng)基比消耗率低。24的動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的基本要求1.生物反應(yīng)器的材料無(wú)毒2.生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)：滿足傳質(zhì)、傳熱、混合的功能3.密封良好，避免污染4.自動(dòng)檢測(cè)、調(diào)節(jié)控制精度高5.長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)6.容器內(nèi)表面光滑，無(wú)死角7.拆裝、連接、清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒8.設(shè)備成本低25植物無(wú)菌培養(yǎng)：（1）幼苗及植株的培養(yǎng)（2）愈傷組織培養(yǎng)（外植體，細(xì)胞聚集體）（3）懸浮培養(yǎng)（單細(xì)胞或小細(xì)胞