TSDAA 0081-2024 泰樂菌素組分A含量的測(cè)定高效液相色譜法

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由山東省畜牧協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：山東省飼料獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心、山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司、山東久隆恒信藥業(yè)有限公司、齊魯晟華制藥有限公司、山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司高新區(qū)分公司、齊魯動(dòng)物保健品有限公司、艾美科?。ㄖ袊┥镝t(yī)藥有限公司、魯東大學(xué)、山東省蛋雞技術(shù)創(chuàng)新中心、安池（山東）動(dòng)物營養(yǎng)研究院有限公司。本文件主要起草人：湯文利、鄭維波、張兵、王蕾、尹伶靈、李有志、宋祥彬、何受強(qiáng)、馬居良、施振宇、周士珂、馬春媚、鄭慧慧、楊志強(qiáng)、廖玉雪。本文件是首次發(fā)布。1泰樂菌素組分A含量的測(cè)定本文件規(guī)定了泰樂菌素組分A含量的測(cè)定方法-高效液相色譜法（HPLC）和超高效液相色本文件適用于泰樂菌素、磷酸泰樂菌素和酒石酸泰樂菌素原料中泰樂菌素組分A含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理方法一：高效液相色譜法（HPLC）。乙腈水溶液溶解樣品，以高氯酸鈉溶液-乙腈為流動(dòng)相，高效液相色譜儀測(cè)定，依據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。方法二：超高效液相色譜法（UPLC）。乙腈水溶液溶解樣品，以高氯酸鈉溶液-乙腈為流動(dòng)相，超高效液相色譜儀測(cè)定，依據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T6682一級(jí)水的規(guī)定。5.1乙腈（CH3CN色譜純。5.21mol/L鹽酸溶液：量取鹽酸9mL，加水稀釋至100mL，混勻。5.3200g/L高氯酸鈉溶液：稱取高氯酸鈉400g，加水1800mL溶解，用1mol/L鹽酸溶液（5.2）調(diào)pH至2.5±0.1，加水稀釋至2000mL。5.4乙腈水溶液：乙腈（5.1）+水=1+1（V1+V2），混勻。5.5泰樂菌素組分A對(duì)照品：純度≥90.0％。5.6系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取泰樂菌素組分A對(duì)照品（5.5）約25mg，置50mL量瓶中，加乙腈水溶液（5.4）溶解，定容至刻度，搖勻。25.7泰樂菌素組分A對(duì)照品溶液：精密稱取泰樂菌素組分A對(duì)照品（5.5）約25mg，置50mL量瓶中，加乙腈水溶液（5.4）溶解，定容至刻度，搖勻?，F(xiàn)用現(xiàn)配。6儀器設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。6.2超高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。6.3分析天平：精度0.0001g、0.00001g。6.4濾膜：有機(jī)，0.22μm。7樣品取樣品100g,混勻，裝入密閉容器中，備用。8試驗(yàn)步驟8.1供試品溶液制備精密稱取供試品約25mg，置50mL量瓶中，加乙腈水溶液（5.4）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾膜過濾，作為供試品溶液。8.2方法一：高效液相色譜參考條件色譜柱：C18，250mm×4.6mm×5μm，或性能相當(dāng)者；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相：量取200g/L高氯酸鈉溶液（5.3）1800mL，加乙腈（5.1）1200mL，混勻，濾膜過濾，超聲5min。8.3方法二：超高效液相色譜參考條件色譜柱：C18，100mm×2.1mm×1.7μm，或性能相當(dāng)者；流速：0.3mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：0.8μL；流動(dòng)相：量取200g/L高氯酸鈉溶液（5.3）1800mL，加乙腈（5.1）1200mL，混勻，濾膜過濾，超聲5min。8.4測(cè)定8.4.1定性3以保留時(shí)間定性，供試品溶液泰樂菌素組分A色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品溶液泰樂菌素組分A色譜峰的保留時(shí)間一致，相對(duì)偏差應(yīng)在±2.5%。8.4.2定量方法一：取乙腈水溶液（5.4）、系統(tǒng)適用性溶液（5.6）、對(duì)照品溶液（5.7）、供試品溶液（8.1分別注入高效液相色譜儀（6.1在8.2色譜條件下測(cè)定，記錄色譜圖（見附錄A圖A.1），外標(biāo)法定量。方法二：取乙腈水溶液（5.4）、系統(tǒng)適用性溶液（5.6）、對(duì)照品溶液（5.7）、供試品溶液（8.1），分別注入超高效液相色譜儀（6.2），在8.3色譜條件下測(cè)定，記錄色譜圖（見附錄A圖A.2），外標(biāo)法定量。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理供試品溶液中泰樂菌素組分A含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，數(shù)值以百分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計(jì)算：（%）=×100%…………(1)式中：A樣——供試品溶液中泰樂菌素組分A的峰面積；m對(duì)——泰樂菌素組分A對(duì)照品質(zhì)量，單位為克（gP——泰樂菌素組分A對(duì)照品含量，單位為百分?jǐn)?shù)（%A對(duì)——對(duì)照品溶液中泰樂菌素組分A的峰面積；m樣——供試品質(zhì)量，單位為克（g）。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。10