驗證滅菌設備的驗證

驗證滅菌設備的驗證一滅菌的概念滅菌是用適當?shù)奈锢砘蚧瘜W手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。對任一批產(chǎn)品來說，絕對的無菌既無法保證也無法用實驗來證實。實際生成過程中，滅菌是指將物品中污染的微生物殘存概率下降至一定水平，以無菌保證水平SAL表示。最終滅菌的產(chǎn)品微生物存活概率不得高于10-6。二滅菌的方法常用的滅菌方法有：濕熱滅菌法干熱滅菌法輻射滅菌法氣體滅菌法和過濾除菌法。只要產(chǎn)品允許盡量采取最終滅菌的方法。1、濕熱滅菌是用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。滅菌能力強，是熱力滅菌中最有效，應用最廣泛的滅菌方法。適用范圍：遇高溫和潮濕不發(fā)生變化和損壞的物品。如容器、培養(yǎng)基、膠塞、無菌衣等。熱壓滅菌用的滅菌器種類很多，但其基本結(jié)構(gòu)大同小異。注意：被滅菌物應有適當?shù)难b載方式，不能排列過密。以保證滅菌的有效性及均一性。必須將滅菌器內(nèi)的空氣排出。如果滅菌器內(nèi)的空氣存在，則壓力表上所表示的壓力是器內(nèi)蒸氣和空氣二者的總壓而非單純的蒸氣壓力。1、濕熱滅菌2干熱滅菌法

系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設備中、利用干熱空氣達到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。干熱滅菌條件：一般為160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上，也可采用其它溫度和時間參數(shù)?？傊瑧ＷC滅菌后的產(chǎn)品其SAL（無菌保證水平）≤10-6注意：被滅菌物品應有適當?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性2干熱滅菌法

干熱滅菌法驗證與濕熱滅菌法相同，應進行熱分布試驗、熱穿透試驗、生物指示劑驗證試驗或細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗。以確認滅菌柜中的溫度分布符合設定的標準、確定最冷點位置等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗是證明除熱原過程有效性的試驗。一般將不小于1000單位的細菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個對數(shù)單位。細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗所用的細菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素。驗證時，一般采用最大裝載方式。2干熱滅菌法

系指將滅菌產(chǎn)品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進行電離輻射而達到殺滅微生物的方法。本法最常用的為60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。3輻射滅菌法

輻射滅菌所控的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應考慮滅菌物品的適應性及可能污染的微生物最大數(shù)量及最強抗輻射力，所使用的劑量事先應驗證其有效性及安全性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy.對最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌時，應采用適當?shù)幕瘜W或物理方法對滅菌物品吸收的輻射劑量進行監(jiān)控，以充分證實滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。3輻射滅菌法

系指用化學消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。常用的化學消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過氧化氫、甲醛、臭氧（O3）等，本法適用于在氣體中穩(wěn)定的物品滅菌。采用氣體滅菌法時，應注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。本法中最常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80％～90％的惰性氣體混合使用。該法可用于醫(yī)療器械，塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用。另外，使用氣態(tài)過氧化氫和臭氧（O3）滅菌，因其無危害性殘留物，不會對操作人員和環(huán)境造成危害，適合于空間和物品表面的滅菌。4氣體滅菌法

臭氧滅菌：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣和單個氧原子；后者具有很強的活性，對細菌有極強的氧化作用，將其殺死，多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通氧原子，不存在任何有毒殘留物，故稱無污染消毒劑，它不但對各種細菌（包括肝炎病毒，大腸桿菌，綠濃桿菌及雜菌等）有極強的殺滅能力，而且對殺死霉素也很有效。4氣體滅菌法

1、臭氧的滅菌機制及過程類屬于生物化學過程，氧化分解了細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的葡萄糖氧化酶。

2、直接與細菌、病毒發(fā)生作用，破壞其細胞器和核糖核酸，分解DNA、RNA，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)類和多糖等大分子聚合物，使細菌的物質(zhì)代謝生產(chǎn)和繁殖過程到破壞。

3、滲透胞膜組織，侵入細胞膜內(nèi)作用于外膜脂蛋白和內(nèi)部的脂多糖，使細胞發(fā)生通透畸變，導致細胞溶解死亡。4氣體滅菌法

陽性對照培養(yǎng)后紫色→黃色以確定滅菌柜空載及不同裝載時腔室中的熱分布狀況及可能存在的冷點；常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy.含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用。臭氧滅菌：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣和單個氧原子；細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗所用的細菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素。驗證時，一般采用最大裝載方式。2滅菌效果的驗證溫度（54±10）℃相對濕度（60±10）%溫度（54±10）℃相對濕度（60±10）%系利用細菌不能通過致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。適用于熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。除菌過濾器微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。對除菌過濾器的要求：除菌過濾器必須選擇具有截留實驗證明的除菌級過濾器。藥品生產(chǎn)中采用的除菌濾膜孔徑一般不超過0.22μm.過濾器不得對被濾過成分有吸附作用，也不能釋放物質(zhì)，不得有纖維脫落，禁用含石棉的過濾器。濾器和濾膜在使用前應進行潔凈處理，并用高壓蒸汽進行滅菌或作在線滅菌。更換品種和批次應先清洗濾器，再更換濾膜。5除菌過濾法

過濾過程中無菌保證與過濾液體的初始生物負荷及過濾器的對數(shù)下降值LRV（LogReductionValue）有關。LRV系指規(guī)定條件下，被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量與過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值。即：LRV=lgN0-LgN式中N0為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量。

N為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。5除菌過濾法

在過濾除菌中，一般無法對全過程中過濾器的關鍵參數(shù)（濾膜孔徑的大小及分布，濾膜的完整性及LRV）進行監(jiān)控。因此，在每一次過濾除菌前后均應作濾器的完整性試驗，即氣泡點試驗或壓力維持試驗或氣體擴散流量試驗。確認濾膜在除菌過濾過程中的有效性和完整性。除菌過濾器的使用時間不應超過一個工作日，否則應進行驗證。5除菌過濾法

SAL：（SterilityAssuranceLevel）無菌保證水平，一批物品的無菌特性一般以物品滅菌后微生物存活的概率來表示。最終滅菌產(chǎn)品微生物存活的概率不得高于10-6已滅菌產(chǎn)品達到的無菌保證水平可通過驗證確定。F0值：為標準滅菌時間，系滅菌過程賦予被滅菌物品121℃下的滅菌時間。D值：微生物的耐熱參數(shù)，系指一定溫度下，

將微生物殺滅90%所需的時間，以分鐘表示。1、滅菌程序的驗證滅菌程序的驗證是無菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗證后，方可交付正式使用。驗證內(nèi)容包括：⑴撰寫驗證方案及制定評估標準。⑵確認滅菌設備技術(shù)資料齊全、安裝正確，并能處于正常運行（安裝確認）。⑶確認關鍵控制設備和儀表能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運行（運行確認）。⑷采用滅菌物品或模擬物品進行重復試驗，確認滅菌效果符合規(guī)定（性能確認）。⑸匯總并完善各種文件和記錄，撰寫驗證報告。二滅菌的驗證2滅菌效果的驗證（1）濕熱滅菌效果驗證：應進行熱分布試驗、熱穿透試驗和生物指示劑驗證試驗。以確定滅菌柜空載及不同裝載時腔室中的熱分布狀況及可能存在的冷點；在空載條件下，確認121℃時腔室的各點的溫度差值應≤±1℃；使用插入實際物品或模擬物品內(nèi)的溫度探頭，確認滅菌柜在不同裝載時，最冷點物品的標準滅菌時間（F0）達到設定的標準；用生物指示劑進一步確認在不同裝載時冷點處的滅菌物品達到無菌保證水平。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子。

具體方法:將生物指示劑和被滅菌物品儀一起放入滅菌容器內(nèi)，二層設3個點，上層中央1點，下層前后部位各1點；三層設3個點，上層與中央部位各1個點，下層前中后各1個點。滅菌后取出，56~60℃培養(yǎng)24~48h，并取另一支未經(jīng)滅菌的生物指示劑一起培養(yǎng)，作為陽性對照。結(jié)果判斷：顏色的變化。

培養(yǎng)后保持紫色Pass培養(yǎng)后紫色→黃色Fail陽性對照培養(yǎng)后紫色→黃色Pass2滅菌效果的驗證（2）干熱滅菌法驗證：應進行熱分布試驗、熱穿透試驗、生物指示劑驗證試驗或細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗。以確認滅菌柜中的溫度分布符合設定的標準、常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗是證明除熱原過程有效性的試驗。一般將不小于1000單位的細菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個對數(shù)單位。細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗所用的細菌內(nèi)毒素一般為大腸桿菌內(nèi)毒素。驗證時，一般采用最大裝載方式。2滅菌效果的驗證（3）氣體滅菌法驗證：

采用環(huán)氧乙烷滅菌時，滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時間是影響滅菌效果的重要因數(shù)?？刹捎孟铝袦缇鷹l件：溫度（54±10）℃相對濕度（60±10）%

滅菌壓力8×105Pa滅菌時間90min2滅菌效果的驗證滅菌條件應予驗證方法：滅菌時，先將滅菌腔室先抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達到設定的溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過濾和預熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過程中，應嚴密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時間。必要時使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度，整個滅菌過程應在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進行。滅菌后，應采取新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘渣消散。并對環(huán)氧乙烷殘留物和反應產(chǎn)物進行監(jiān)控，以證明其不超過規(guī)定濃度，避免產(chǎn)生毒性。環(huán)氧乙烷滅菌法驗證時，應進行如下試驗：泄漏試驗，以確認滅菌腔室的密閉性。（4）輻射滅菌法驗證：采用輻射滅菌法滅菌的無菌產(chǎn)品其SAL應≤射線輻射滅菌所控的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應考慮滅菌物品的適應性及可能污染的微生物最大數(shù)量及最強抗輻射力，所使用的劑量事先應驗證其有效性及安全性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應對被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強度進行測定，以評價滅菌過程賦予該滅菌物品的無菌保證水平。2滅菌效果的驗證滅菌時，應采用適當?shù)幕瘜W或物理方法對滅菌物品吸收的輻射劑量進行監(jiān)控，以充分證實滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計，劑量計要置于規(guī)定的部位。60Co-γ射線輻射滅菌法驗證時，除進行生物指示劑驗證試驗外，還應確認空載和裝載時滅菌腔內(nèi)的輻射劑量的分布圖、滅菌物品的吸收劑量及最大和最小吸收劑量的分布、滅菌物品的均一性、滅菌腔內(nèi)物品的裝載方式等。常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子。2滅菌效果的驗證三、生物指示劑生物指示劑是一類特殊的活微生物制品，可用于確認滅菌設備的性能，滅菌程序的驗證、生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等?？捎糜跍缇炞C中的生物指示劑一般是細菌的孢子。

1、生物指示劑用微生物的基本要求：

（1）菌種的耐受性應大于需要滅菌物品

中所有可能污染菌的耐受性。（2）菌種應無致病性。

（3）菌株應穩(wěn)定。存活期長，易于保存。

（4）易于培養(yǎng)。若使用休眠孢子，生物

指示劑中休眠孢子含量要＞90%。2、常用的生物指示劑

（1）濕熱滅菌法：嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子（2）干熱滅菌法：枯草芽孢桿菌孢子

（3）輻射滅菌法：短小芽孢桿菌孢子（4）氣體滅菌法：枯草芽孢桿菌孢子

（5）過濾除菌法：缺陷假單孢菌

必須將滅菌器內(nèi)的空氣排出。將生物指示劑和被滅菌物品儀一起放入滅菌容器內(nèi)，二層設3個點，上層中央1點，下層前后部位各1點；本法最常用的為60Co-γ射線輻射滅菌。溫度（54±10）℃相對濕度（60±10）%除菌過濾器微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。必須將滅菌器內(nèi)的空氣排出。使用插入實際物品或模擬物品內(nèi)的溫度探頭，確認滅菌柜在不同裝載時，最冷點物品的標準滅菌時間（F0）達到設定的標準；具體操作方法可參照生物指示劑說明書。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。本法中最常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80％～90％的惰性氣體混合使用。本法中最常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80％～90％的惰性氣體混合使用。藥品生產(chǎn)中采用的除菌濾膜孔徑一般不超過0.過濾過程中無菌保證與過濾液體的初始生物負荷及過濾器的對數(shù)下降值LRV（LogReductionValue）有關。陽性對照培養(yǎng)后紫色→黃色（4）輻射滅菌法驗證：在過濾除菌中，一般無法對全過程中過濾器的關鍵參數(shù)（濾膜孔徑的大小及分布，濾膜的完整性及LRV）進行監(jiān)控。滅菌條件