DNA的粗提取-完整課件

第5節(jié)DNA的粗提取與鑒定染色體成分蛋白質(zhì)RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。一、實驗原理1.血細胞在蒸餾水中會滲透吸水而破裂，釋放出內(nèi)容物。2.洗滌劑能瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響。3.DNA在物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。4.DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。5.DNA遇二苯胺（沸水?。兂伤{色。二、實驗設(shè)計1、實驗材料的選取選取原則DNA含量豐富材料易得提取簡便雞血細胞雞血細胞核DNA含量豐富材料易得雞血細胞極易吸水脹破若是動物細胞，如何獲取DNA濾液？為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？在低濃度的溶液中紅細胞會吸水脹破。2、破碎細胞，獲取含DNA的濾液若是植物細胞，如何獲取DNA濾液？加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細胞膜，有利于DNA釋放；食鹽有利于DNA溶解。2、破碎細胞，獲取含DNA的濾液濾液中的雜質(zhì)可能有哪些細胞成分？為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠除去雜質(zhì)？可能有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)用高濃度的鹽溶液能除去高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去在低鹽溶液中的雜質(zhì)。3、去除濾液中的雜質(zhì)濾液+同體積冷卻95%酒精

白色絲狀物析出：溶解：鑒定：沸水5minDNA＋二苯胺藍色物4、DNA的析出與鑒定將白色絲狀物溶于2mol/L的NaCl溶液中5.實驗材料

①動物

雞血細胞液的優(yōu)點提醒：人和哺乳動物成熟的紅細胞中不含細胞核，也沒有DNA，不適于作為DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。

雞血紅細胞、白細胞中都有細胞核，含大量的DNA,既經(jīng)濟又易取

②植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

三、方法與過程

制雞血細胞液0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液血漿血細胞方法步驟加入物質(zhì)目的1.制備雞血細胞液2.提取細胞核物質(zhì)3.溶解核內(nèi)的DNA4.析出含DNA的粘稠物5.濾出含DNA的粘稠物檸檬酸鈉溶液20m1蒸餾水2mo1/L的NaCl溶液加蒸餾水防止血凝固加速血細胞破裂溶解DNANaCl溶液稀釋至0.14mol/L使DNA最大限度地釋出使含DNA的黏稠物被留在紗布上方法步驟加入物質(zhì)目的6.DNA的黏稠物再溶解7.過濾含DNA的NaCl溶液8.提取雜質(zhì)較少的DNA9.DNA的鑒定2mo1/L的NaCI溶液冷卻的95％的酒精二苯胺試劑使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)提取DNA有DNA則出現(xiàn)藍色

鑒定不變藍——對照組溶液逐漸變藍絲狀物(DNA)實驗組圖示結(jié)果加入物質(zhì)比較均加入：①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL鑒定時藍色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關(guān)。自變量你能采用其他方法對DNA進行鑒定嗎？取少許絲狀物，置玻片中央，加1滴甲基綠溶液，絲狀物變成綠色。鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。

注意事項

①制備雞血細胞液時，要在取雞血的同時加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細胞。

②整個實驗中加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”

兩次加蒸餾水的目的不同，一是漲破細胞，二是稀釋溶液。

酒精最好用95%的冷酒精;

③加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時,動作要輕緩且朝一個方向。保證DNA分子的完整性。使用時注意玻璃棒不要碰到燒杯底。

④鑒定DNA時需沸水浴加熱。

⑤二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會影響鑒定的效果.二苯胺是一種有毒性的試劑,使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位.

⑥盛放雞血細胞的容器最好是塑料容器（雞血細胞破碎后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取過程中DNA的