miR-276通過上調(diào)brm促進(jìn)飛蝗卵一致性發(fā)育的任務(wù)書

miR-276通過上調(diào)brm促進(jìn)飛蝗卵一致性發(fā)育的任務(wù)書任務(wù)書一、背景飛蝗（Locustamigratoria）是一種常見的農(nóng)林害蟲，其大量繁殖和食草行為對農(nóng)作物產(chǎn)生了嚴(yán)重的危害。因此，飛蝗的卵期一致性發(fā)育成為了該蟲群體調(diào)控研究的一個重要方向。最近的研究表明，miR-276與飛蝗卵一致性發(fā)育密切相關(guān)。miR-276是一種非編碼RNA，在昆蟲的發(fā)育和代謝中具有重要的調(diào)控作用。先前的研究已經(jīng)證明，miR-276通過下調(diào)其靶基因brm促進(jìn)飛蝗的卵一致性發(fā)育。然而，在最近的研究中發(fā)現(xiàn)，miR-276對brm的調(diào)控可能不是單向的，因為一些證據(jù)表明miR-276也能夠通過上調(diào)brm影響飛蝗卵一致性發(fā)育。因此，了解miR-276上調(diào)brm促進(jìn)飛蝗卵一致性發(fā)育的機(jī)制，對于深入探究飛蝗群體特性形成的分子機(jī)制具有重要的意義。二、任務(wù)1.分析miR-276的表達(dá)模式利用定量PCR技術(shù)分析不同發(fā)育階段飛蝗miR-276的表達(dá)模式，研究miR-276在飛蝗卵一致性發(fā)育中的調(diào)控作用。2.鑒定miR-276的靶基因利用生物信息學(xué)方法篩選并鑒定miR-276的靶基因，特別關(guān)注與卵一致性發(fā)育相關(guān)的基因。3.檢測miR-276與brm的相互作用利用Luciferase報告基因系統(tǒng)檢測miR-276是否能夠與brm的3'UTR結(jié)合，并評估m(xù)iR-276對brm表達(dá)水平的影響。4.分析miR-276上調(diào)brm對飛蝗卵一致性發(fā)育的影響分析miR-276上調(diào)brm對飛蝗卵一致性發(fā)育的影響，特別關(guān)注卵在不同發(fā)育階段的發(fā)育狀態(tài)和卵孵化時間等參數(shù)。5.探究miR-276上調(diào)brm對其他基因的調(diào)控作用通過RNA-seq技術(shù)分析miR-276上調(diào)brm對其他基因表達(dá)水平的影響，以期了解miR-276上調(diào)brm對飛蝗卵一致性發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)制。三、內(nèi)容和目標(biāo)本次研究通過分析miR-276對brm的調(diào)控作用探究了miR-276上調(diào)brm促進(jìn)飛蝗卵一致性發(fā)育的分子機(jī)制。通過實(shí)驗和數(shù)據(jù)分析，我們將從多個角度探究miR-276上調(diào)brm的調(diào)控機(jī)制及其對整體的影響。預(yù)期目標(biāo)：1.闡明miR-276上調(diào)brm促進(jìn)飛蝗卵一致性發(fā)育的機(jī)制。2.分析miR-276在卵一致性發(fā)育中的作用。3.探究miR-276上調(diào)brm對其他基因的調(diào)控作用。4.為研究和控制飛蝗的群體特性提供參考和借鑒。四、技術(shù)路線1.樣品的制備選取不同發(fā)育時期的飛蝗卵作為樣品，總RNA的提取方法采用Trizol試劑（Invitrogen公司）進(jìn)行提取。2.miRNA的定量分析利用逆轉(zhuǎn)錄-定量PCR技術(shù)對miR-276的表達(dá)進(jìn)行分析，miRNA量化的相對定量法采用2^-ΔΔCt方法進(jìn)行計算。3.靶基因鑒定利用生物信息學(xué)技術(shù)鑒定miR-276的靶基因。4.Luciferase報告基因系統(tǒng)分析構(gòu)建pGL3-luciferase報告質(zhì)粒，將miR-276的靶基因brm3'UTR序列克隆進(jìn)入報告質(zhì)粒中，并進(jìn)行Luciferase活性檢測。5.卵的采集與處理采集相同時間點(diǎn)，不同處理組的卵并分別進(jìn)行卵的測量和保護(hù)處理。根據(jù)實(shí)驗需求分別進(jìn)行不同的保護(hù)和處理方法，并留取卵液做后續(xù)處理。6.qPCR分析選取感興趣的基因，設(shè)計qPCR引物進(jìn)行基因表達(dá)水平的定量檢測。7.RNA-seq分析RNA-seq技術(shù)采用Illumina公司的Solexa高通量測序平臺，測序數(shù)據(jù)進(jìn)行比對、分析和挖掘。五、參考文獻(xiàn)1.LiS.,MeadE.A.,LiangS.&TuZ.(2009)DirectsequencingandexpressionanalysisofalargenumberofmiRNAsinL.migratoriaanditseggs.JInsectPhysiol.55,188–193.2.ZhangX.,ZhengY.,CaoY.andYangJ.(2017)ThemiRNAbantamregulatesovariandevelopmentandfemalefertilityinDrosophilaJournalExperimentalBiology.220(6),1178-11853.XuJ.,etal.(2013)miR-276/NotchsignalingregulatestheproliferationandneuraldifferentiationofDrosophilaneuralstemcells.CellDeathDiffer.20,912–922.4.LiuH.,etal.(2015)RegulationofcircadianbehaviorandmetabolismbyamicroRNAinDrosophilamelanogaster.Curr.Biol.25,1537–1542.6.Wei,J.,Lv,J.,Zhao,Y.,Wang,Z.,Lv,Z.,Zhang,L.,&Liu,C.(2018).MicroRNA-276promoteseggvi