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文檔簡(jiǎn)介
HLA-B27檢測(cè)及臨床意義病
因?qū)W臨
床表
現(xiàn)AS血
清學(xué)流
行病
學(xué)AS年輕男士多見(jiàn)男:女比例約為(2—3):1種族差異,白種人患病率1%,黑人最低中國(guó)人HLA
—B27陽(yáng)性率約6—8%,中國(guó)
人群患病率0.3%,在患者家系中為4%,
南方較北方高AS發(fā)
病
率病因?qū)W遺傳感染血清學(xué)RF陰性HLA-B27陽(yáng)性HLA-B*27位
于
第
6
號(hào)染色體的短
臂上HLA-B
含
有
1
000個(gè)
等位
基因Ⅰ
型
M
HC基因,基本
上表達(dá)在機(jī)體
中所有有核的
細(xì)胞上,尤其
是淋巴細(xì)胞的
表面HLA-B27亞
型(B27*02;B27*04;
B27*05;
B27*07)HLA-B27檢測(cè)意義
超
過(guò)
9
0%的強(qiáng)直性脊椎炎患者其H
LA-B27
抗原表達(dá)為陽(yáng)
性
,
普通人群中僅5-10%的為陽(yáng)性
HLA-B27陽(yáng)性者AS
發(fā)病率約為1
0%
~20%
,而普通人群發(fā)
病
為
1
‰~2‰,相差約1
00
倍
與傳統(tǒng)方法相比,用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)
HLA-B27的表達(dá),
靈
敏
度可達(dá)1
00%,特異性達(dá)9
7.4%PCR-SSP/SSO方法基
因
芯片技術(shù)Real-time
PCR
方
法補(bǔ)
體
依賴性微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)ELISA法流
式
細(xì)胞術(shù)(FCM法)HLA-B27檢測(cè)方法補(bǔ)
體
依
賴
性微量淋巴細(xì)
胞毒抗體與
淋巴細(xì)胞
表面的
膜抗原特
異性結(jié)
合后,免
疫球蛋
白的
補(bǔ)體
結(jié)合位點(diǎn)暴露,該I
C
與補(bǔ)體結(jié)合而使其活化,形成攻膜復(fù)合體在細(xì)胞
膜上穿孔,導(dǎo)致靶細(xì)胞的溶解死亡。在細(xì)胞被穿孔但尚未裂解前加入
染
料
,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞著色。補(bǔ)
體
依
賴
性
淋
巴細(xì)
胞毒?
缺
少
高純度的單價(jià)抗血清?
人
工
計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞數(shù)量,易誤診和漏診
?
可
疑
結(jié)果,難判斷結(jié)果,常需復(fù)查?
血
標(biāo)
本要求高,實(shí)驗(yàn)條件的影響?
成
本
低流
式
細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)BD
FACSAria
?
II
Flow
Cytometer流式細(xì)胞術(shù)?
熒
光
標(biāo)記的單克隆抗體,特異性高
?
操
作
簡(jiǎn)便,靈敏度和準(zhǔn)確性高?
成
本
較高?
抗
體
發(fā)生交叉反應(yīng)?
樣
本
要求較高ELISA方法ELISA方法
?
快
速
、簡(jiǎn)單?
特
異
性和靈敏度低?
溶
血
標(biāo)本影響檢測(cè)結(jié)果
?
成
本
低PCR-SSP
序列特異性引物PCR擴(kuò)增抽提DNA瓊脂糖凝
膠電泳實(shí)
驗(yàn)
步驟PCR-SSP/SSO?????Real-time
PCR通
過(guò)
融
解
曲
線
對(duì)
擴(kuò)
增
片
斷
進(jìn)
行
檢
測(cè)本
體
系
包
含
兩
對(duì)
引
物
——
質(zhì)
控
引
物、B27
擴(kuò)增引物同
一
份
樣
本
,
只
擴(kuò)
增
出
質(zhì)
控
峰
—
—陰性同
一
份
樣
本
,
擴(kuò)
增
出
現(xiàn)
雙
峰
—
—
陽(yáng)性陰
陽(yáng)
性
結(jié)
果依
據(jù)
質(zhì)控
峰
與
B
27陽(yáng)性峰
的
比值進(jìn)行判斷19質(zhì)控峰
B27峰操
作
流程核
酸
提取3
小時(shí)PCR擴(kuò)增3
小時(shí)軟
件
判讀,報(bào)告輸出20基因芯片技術(shù)
病
人
樣本的D
NA
提取PCRDNA
芯
片
雜
交全自動(dòng)結(jié)果判讀基因芯片技術(shù)病
人
D
NA熒
光
信號(hào)寡
核
苷酸探針Spot
→芯
片
基質(zhì)基因技術(shù)
準(zhǔn)
確
性
高
:基因型檢測(cè)
特
異
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