HLA-B27檢測(cè)及臨床意義課件

HLA-B27檢測(cè)及臨床意義病

因?qū)W臨

床表

現(xiàn)AS血

清學(xué)流

行病

學(xué)AS年輕男士多見(jiàn)男:女比例約為（2—3）:1種族差異，白種人患病率1%，黑人最低中國(guó)人HLA

—B27陽(yáng)性率約6—8%，中國(guó)

人群患病率0.3%，在患者家系中為4%，

南方較北方高AS發(fā)

病

率病因?qū)W遺傳感染血清學(xué)RF陰性HLA-B27陽(yáng)性HLA-B*27位

于

第

6

號(hào)染色體的短

臂上HLA-B

含

有

1

000個(gè)

等位

基因Ⅰ

型

M

HC基因，基本

上表達(dá)在機(jī)體

中所有有核的

細(xì)胞上，尤其

是淋巴細(xì)胞的

表面HLA-B27亞

型(B27*02;B27*04;

B27*05;

B27*07)HLA-B27檢測(cè)意義

超

過(guò)

9

0%的強(qiáng)直性脊椎炎患者其H

LA-B27

抗原表達(dá)為陽(yáng)

性

，

普通人群中僅5-10%的為陽(yáng)性

HLA-B27陽(yáng)性者AS

發(fā)病率約為1

0%

～20%

，而普通人群發(fā)

病

為

1

‰～2‰，相差約1

00

倍

與傳統(tǒng)方法相比，用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)

HLA-B27的表達(dá)，

靈

敏

度可達(dá)1

00%，特異性達(dá)9

7.4%PCR-SSP/SSO方法基

因

芯片技術(shù)Real-time

PCR

方

法補(bǔ)

體

依賴性微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)ELISA法流

式

細(xì)胞術(shù)（FCM法）HLA-B27檢測(cè)方法補(bǔ)

體

依

賴

性微量淋巴細(xì)

胞毒抗體與

淋巴細(xì)胞

表面的

膜抗原特

異性結(jié)

合后，免

疫球蛋

白的

補(bǔ)體

結(jié)合位點(diǎn)暴露，該I

C

與補(bǔ)體結(jié)合而使其活化，形成攻膜復(fù)合體在細(xì)胞

膜上穿孔，導(dǎo)致靶細(xì)胞的溶解死亡。在細(xì)胞被穿孔但尚未裂解前加入

染

料

，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞著色。補(bǔ)

體

依

賴

性

淋

巴細(xì)

胞毒?

缺

少

高純度的單價(jià)抗血清?

人

工

計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞數(shù)量，易誤診和漏診

?

可

疑

結(jié)果，難判斷結(jié)果，常需復(fù)查?

血

標(biāo)

本要求高，實(shí)驗(yàn)條件的影響?

成

本

低流

式

細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)BD

FACSAria

?

II

Flow

Cytometer流式細(xì)胞術(shù)?

熒

光

標(biāo)記的單克隆抗體，特異性高

?

操

作

簡(jiǎn)便，靈敏度和準(zhǔn)確性高?

成

本

較高?

抗

體

發(fā)生交叉反應(yīng)?

樣

本

要求較高ELISA方法ELISA方法

?

快

速

、簡(jiǎn)單?

特

異

性和靈敏度低?

溶

血

標(biāo)本影響檢測(cè)結(jié)果

?

成

本

低PCR-SSP

序列特異性引物PCR擴(kuò)增抽提DNA瓊脂糖凝

膠電泳實(shí)

驗(yàn)

步驟PCR-SSP/SSO?????Real-time

PCR通

過(guò)

融

解

曲

線

對(duì)

擴(kuò)

增

片

斷

進(jìn)

行

檢

測(cè)本

體

系

包

含

兩

對(duì)

引

物

——

質(zhì)

控

引

物、B27

擴(kuò)增引物同

一

份

樣

本

，

只

擴(kuò)

增

出

質(zhì)

控

峰

—

—陰性同

一

份

樣

本

，

擴(kuò)

增

出

現(xiàn)

雙

峰

—

—

陽(yáng)性陰

陽(yáng)

性

結(jié)

果依

據(jù)

質(zhì)控

峰

與

B

27陽(yáng)性峰

的

比值進(jìn)行判斷19質(zhì)控峰

B27峰操

作

流程核

酸

提取3

小時(shí)PCR擴(kuò)增3

小時(shí)軟

件

判讀，報(bào)告輸出20基因芯片技術(shù)

病

人

樣本的D

NA

提取PCRDNA

芯

片

雜

交全自動(dòng)結(jié)果判讀基因芯片技術(shù)病

人

D

NA熒

光

信號(hào)寡

核

苷酸探針Spot

→芯

片

基質(zhì)基因技術(shù)

準(zhǔn)

確

性

高

：基因型檢測(cè)

特

異