檢驗科血清谷丙轉氨酶測定標準操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-007版本/修訂號：C/0主題內容生化室作業(yè)指導書生效日期：20110701第4頁共5頁編寫制定日期審核審核日期：核準執(zhí)行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林華2013-08-01血清丙氨酸氨基轉移酶測定標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨驗項目申請：血清丙氨酸氨基轉移酶測定(縮寫ALT)；組合項目申請：血生化中肝功能測定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1標本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。2.1.2檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3急診標本應記錄采集時間、送檢時間、接收時間。2.1.4標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5下列標本為不合格標本2.1.5.1標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2標本保存2.2.1接收標本后在30min內將標本離心分離出血清。2.2.2標本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定48h，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定7天。-20℃保存穩(wěn)定30天。為避免標本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1天的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測試的標本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內保存7天。2.3標本采集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動，和12h以上禁食空腹狀態(tài)。2.3.2一般采用血清，可以使用EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽抗凝的血液標本，但肝素抗凝劑可引起反應液混濁。3方法原理測定反應以如下的原理進行：ALT催化L-丙氨酸的氨基轉移至α-酮戊二酸，生成丙氨酸和L-谷氨酸，LDH催化丙酮酸生成乳酸，同時將NADH氧化成NAD+。NADH吸光度的下降速率和ALT的活力成正比。4試劑及其他用品4.1試劑：丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒，由北京利德曼生化技術有限公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內穩(wěn)定28天。開蓋后避免污染。當試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準備。4.4試劑盒主要成分：組成R1:R2=5:1混合后溶液的濃度R1:Tris緩沖液:80mmol/LPH=7.8L-丙氨酸450mmol/LLDH>1200U/LR2:起動液NADH0.18mmol/La-酮戊二酸18mmol/L5校準品與校準模式5.1校準品：不使用校準品，以NADH的雙波長（340/380nm）摩爾吸光系數(shù)計算ALT活性。6質控品與室內質控規(guī)則6.1質控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質控血清。6.2質控液重建方法：液態(tài)質控血清，即開即用，無需特殊準備。6.3質控品測定：在每一批標本中測定兩個水平質控血清各一次。6.4質控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。主要分析參數(shù)參見說明書。USERID10結果計算計算公式：ALT(U/L)＝公式中ΔA/min即單位時間中吸光度降低的值，VT為總反應體積ml（試劑總量＋標本量），Vs為標本體積ml，l為比色皿光徑cm，ε為NADH的340/380nm測定的毫摩爾消光系數(shù)。K值即因子，本法中K值為3817。儀器根據(jù)此公式自動給出每個標本測定結果。11檢驗結果的報告及范圍11.1結果的報告11.1.1結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：5-2600U/L，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本稀釋后重復測定的結果。12操作性能12.1精密度：批內CV＜3.5%；總CV＜5.3%。12.2線性范圍：5-400U/L。12.3方法的有限性及干擾因素：EDTA(200mg/dl)，檸檬酸鈉（116mmol/L）對本試驗有干擾。膽紅素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L無明顯干擾。磷酸吡哆醛能使血清中ALT顯示最大活性，使用不含有磷酸吡哆醛試劑測定ALT活性，某些疾病患者如腎臟病患者，可因血清中磷酸吡哆醛含量不足而致ALT活性低估。13參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：男9-50U/L；女7-40U/L。14臨床意義14.1ALT存在于各種組織細胞內，以肝細胞中含量最多，正常時血清中ALT活性很低。14.2肝細胞因感染病毒而受損傷，尤其是處于急性期時，ALT從細胞內逸出至血液中，血清中ALT活性可明顯升高，因此是各種肝炎患者檢查的一個重要指標。14.3某些藥物對肝細胞有毒性副作用，過量或長期使用可至肝臟受損，亦可以ALT活性升高反映。14.4實質性臟器有非感染性炎癥或損傷時，如脂肪肝、梗阻性黃疸、肝內膽汁瘀滯、膽管炎、膽囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭時的肝臟淤血等，均可成為血清ALT升高的原因。14.5ALT與AST聯(lián)合測定并計算其比值有助于對某些疾病的鑒別，正常情況下ALT／AST比值小于1，但在傳染性肝炎及其它原因引起的肝臟炎癥時，ALT／AST比值升高；肝硬化、肝癌、進行性肌營養(yǎng)不良、皮肌炎時，AST升高的幅度高于ALT。15結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2認真審核每一個測定結果，審核者對發(fā)出報告結果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關項目：審核與肝功能組合中其他項目、膽汁酸的關系，ALT/AST比值是否與疾病一致。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定：暫無規(guī)定。17有關引用程序與文件17.1Abbott自動生化