檢驗(yàn)科血清谷草轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號(hào)：JYK-3-SH-008版本/修訂號(hào)：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)生效日期：20110701第2頁(yè)共5頁(yè)編寫(xiě)制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林華2013-08-01血清天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：血清天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(縮寫(xiě)AST)；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：血生化中心肌酶譜、或肝功能測(cè)定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3急診標(biāo)本應(yīng)記錄采集時(shí)間、送檢時(shí)間、接收時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定48h，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定7天。-20℃保存穩(wěn)定30天。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對(duì)保存時(shí)間超過(guò)1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動(dòng)，和12h以上禁食空腹?fàn)顟B(tài)。2.3.2一般采用血清，也可以使用EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽抗凝的血液標(biāo)本，但肝素抗凝劑可引起反應(yīng)液混濁。3方法原理測(cè)定反應(yīng)以如下的原理進(jìn)行：AST催化L-天門(mén)冬氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至α-酮戊二酸，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。MDH催化草酰乙酸還原的同時(shí)將NADH氧化成NAD+。NADH吸光度的下降速率和AST的活力成正比。4試劑及其他用品4.1試劑：天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒由北京利德曼公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲(chǔ)存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉(cāng)冰箱內(nèi)穩(wěn)定28天。開(kāi)蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者未開(kāi)蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，即開(kāi)即用，無(wú)特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：L-天門(mén)冬氨酸218mmol／L，MDH>600IU/L，NADH0.18mmol／L,α-酮戊二酸16mmol／L。含有穩(wěn)定劑與保護(hù)劑。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：不使用校準(zhǔn)品，以NADH的雙波長(zhǎng)（340/380nm）摩爾吸光系數(shù)計(jì)算ALT活性。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個(gè)不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開(kāi)即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每一批標(biāo)本中測(cè)定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測(cè)定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。主要分析參數(shù)參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。10結(jié)果計(jì)算計(jì)算公式：AST(U/L)＝公式中ΔA/min即單位時(shí)間中吸光度降低的值，VT為總反應(yīng)體積ml（試劑總量＋標(biāo)本量），Vs為標(biāo)本體積ml，l為比色皿光徑cm，ε為NADH的340/380nm測(cè)定的毫摩爾消光系數(shù)。K值即因子，本法中K值為3817。儀器根據(jù)此公式自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：5-2600U/L，超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV約為3.5%，批間CV約為5.3%。12.2線性范圍：5-400U/L。12.3方法的有限性及干擾因素：EDTA(200mg/dl)，檸檬酸鈉（116mmol/L）對(duì)本試驗(yàn)有干擾。膽紅素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L沒(méi)有明顯干擾。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：男15-40U/L；女13-35U/L。14臨床意義14.1AST存在于各種組織細(xì)胞內(nèi)，肝、心、腎組織中的含量較多，正常時(shí)血清中AST活性很低。14.2與ALT相比，AST分子小，血漿中半衰期較短。肝細(xì)胞受損時(shí)，血清中AST水平變化早，恢復(fù)快，但升高幅度不如ALT。14.3慢性肝炎、肝硬化時(shí)AST往往高于ALT，因此用作判斷肝炎痊癒指標(biāo)AST更有意義。14.4正常人AST/ALT比值為1.15，此比值變化對(duì)急性肝炎的預(yù)后判斷有意義。急性肝炎時(shí)此比值＜1，病情好轉(zhuǎn)時(shí)恢復(fù)正常，比值增大有轉(zhuǎn)為慢性可能，慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化和肝癌時(shí)此比值明顯升高。14.5心肌受損后AST大量進(jìn)入血液，因此血清AST活性也常作為“心肌酶譜”檢測(cè)的一項(xiàng)內(nèi)容。14.6實(shí)質(zhì)性臟器有非感染性炎癥或損傷時(shí)，如脂肪肝、梗阻性黃疸、肝內(nèi)膽汁瘀滯、膽管炎、膽囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭時(shí)的肝臟淤血等，血清AST伴隨ALT共同升高，但幅度較低。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，審核者對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與肝功能組合中其他項(xiàng)目、膽汁酸的關(guān)系，ALT/AST比值是否與疾病一致。作為心肌酶譜項(xiàng)目時(shí)分析與其他酶的關(guān)系。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定暫無(wú)規(guī)定。17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott自動(dòng)生化分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。17.2生化檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。17.3檢驗(yàn)結(jié)