檢驗(yàn)科低密度脂蛋白膽固醇測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號(hào)：JYK-3-SH-027版本/修訂號(hào)：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第5頁共5頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01血清低密度脂蛋白膽固醇測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：血清低密度脂蛋白膽固醇(縮寫LDL-C)測定；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：血脂測定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定1天，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定7天。-20℃可保存數(shù)月；-70℃至少可保存半年；應(yīng)避免標(biāo)本反復(fù)凍溶。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對(duì)保存時(shí)間超過1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。抽血前3天內(nèi)避免高脂飲食，24小時(shí)內(nèi)不飲酒，2.3.2不建議采集抗凝血標(biāo)本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。2.1.5抽血前最好停用影響血脂的藥物（如調(diào)脂藥、避孕藥、某些降壓藥、激素等）數(shù)天或數(shù)周，否則應(yīng)記錄用藥情況。2.1.6妊娠后期各項(xiàng)血脂都會(huì)增高，應(yīng)在產(chǎn)后或終止哺乳后3個(gè)月查血才能反映基本血脂水平。3.方法原理1.試劑1使血清中高密度脂蛋白和極低密度脂蛋白經(jīng)化學(xué)反應(yīng)被去除。膽固醇酯酶膽固醇酯+H2O……………膽固醇+脂肪酸，膽固醇氧化酶膽固醇+O2………………膽淄烯酮+H2O2，過氧化氫酶H2O2……………O2+H2O，2.試劑2中的變性劑釋放出低密度脂蛋白膽固醇后，對(duì)LDL進(jìn)行測量。膽固醇酯酶膽固醇酯+H2O……………膽固醇+脂肪酸，膽固醇氧化酶膽固醇+O2………………膽淄烯酮+H2O2,過氧化物酶H2O2+N,N-二甲基間甲苯胺+4-氨基安替比林……………醌亞胺+4H2O，通過測定600nm處醌亞胺吸光度，計(jì)算出低密度脂蛋白膽固醇的濃度。4試劑及其他用品4.1試劑：血清低密度脂蛋白膽固醇消除法測定試劑盒，由日本協(xié)和醫(yī)藥株式會(huì)社出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲(chǔ)存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定30天。開蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者試劑出現(xiàn)明顯的粉紅色，或空白吸光率>0.3時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，使用時(shí)分別將R1、R2倒入專用試劑瓶中。4.4試劑盒主要成分：酵素液①：表面活性劑1，4-AAP0.5mmol/L,膽固醇氧化酶1.2U/ml,膽固醇酯水解酶,過氧化物酶,GOOD’S緩沖液（PH6.3）。酵素液②：界面活性劑2，DSBmT1.0mmol/L,GOOD’S緩沖液（PH6.3）。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：與試劑盒配套的日本協(xié)和醫(yī)藥株式會(huì)社校準(zhǔn)液。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式，1個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間不限。但在：①更換試劑或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：校準(zhǔn)液為干粉，用時(shí)加入2ml生理鹽水，室溫放置30分鐘后混勻即可使用。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個(gè)不同水平未定值質(zhì)控血清.6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計(jì)算LDL-C濃度（mmol/L）==×C標(biāo)準(zhǔn)11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：0.03～11.65mmol/L，超過此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV<3.8％，批間CV<5.0％；12.2靈敏度：低密度脂蛋白膽固醇為2.59mmol／L時(shí)的顯色吸光度A546nm約0.18～0.2812.3線性范圍：0.03～11.65mmol/L。12.4干擾：血紅蛋白＜5g/L、膽紅素＜20mg/dL時(shí)、甘油三酯血癥<11.3mmol/L及抗壞血酸<50mg/dL無明顯干擾。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平13.1參考范圍：0.67-3.37mmol/L13.2醫(yī)學(xué)決定水平我國血脂異常防治建議XE"血脂異常防治建議"提出（1997）LDL-C合適范圍：≤3.37mmol/L邊緣升高：3.37～3.61mmol/L升高：≥3.64mmol/L14臨床意義低密度脂蛋白膽固醇升高是冠心病的主要危險(xiǎn)因素。是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病危險(xiǎn)性的評(píng)估指標(biāo)。是冠心病預(yù)防和治療的一級(jí)指標(biāo)，降低低密度脂蛋白膽固醇水平是冠心病預(yù)防和治療的首要目標(biāo)。低密度脂蛋白膽固醇水平與冠心病的發(fā)病率成明顯正相關(guān)：低密度脂蛋白膽固醇水平每增加1%，冠心病的危險(xiǎn)性增加2.38%。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測定結(jié)果，審核者對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與血脂其他指標(biāo)和與載脂蛋白等的關(guān)系，LDL-C濃度一般與apoB呈正相關(guān)，且HDL-C加LDL-C應(yīng)略低于TC。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定通常無威脅生命的“緊急值”。17有關(guān)引用程序與文件