鼠疫耶爾森菌實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告

2.文本格式：宋體，五號(hào)，行距固定值18。文中各序號(hào)標(biāo)題為黑體，五號(hào)。第七節(jié)鼠疫耶爾森菌實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告生物因子鼠疫耶爾森菌（Yersiniapestis）是烈性傳染病鼠疫的病原體，其別名與檢索為鼠疫桿菌（Bacilluspestis）或鼠疫菌，鼠疫耶爾森菌在《人間傳染的病原微生物名錄》中危害程度分類為第二類的病原微生物。一般特性1.形態(tài)特征鼠疫菌為革蘭氏染色陰性、兩端鈍圓、兩極濃染的短小桿菌，菌體長(zhǎng)為1.0~2.0μm，寬0.5~0.7μm，有莢膜，無(wú)鞭毛，無(wú)芽孢。2.培養(yǎng)特性鼠疫菌為兼性厭氧菌，通常使用赫氏消化液溶血培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，其最適宜的培養(yǎng)溫度為28~30℃。通常，在光學(xué)顯微鏡下觀察，鼠疫菌落中央呈黃褐色，有粗糙顆粒，呈小丘狀突起，邊緣薄而透明、有鋸齒狀花邊。鼠疫菌可以酵解多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。3.免疫學(xué)特性鼠疫菌含有18種抗原成分，其中FI抗原為鼠疫菌的特異性和保護(hù)性抗原。它是一種糖蛋白，其編碼基因（ca?1）位于鼠疫菌的pMT1質(zhì)粒上，在37℃時(shí)能夠獲得最大量的表達(dá)。人類對(duì)鼠疫普遍易感，而及時(shí)治療則可以完全治愈，愈后可保持較為持久的免疫力。4.遺傳特性鼠疫菌基因由一條環(huán)狀染色體（約4.6~4.7Mb）和三個(gè)質(zhì)粒（pPCP1、pCD1、pMT1）組成，含有4000多個(gè)編碼序列。其基因組最明顯的特征是散布著大量的插入序列和各種類型的重復(fù)序列，基因組重拍頻繁，并具有高度的流動(dòng)性。5.種（型）鑒別特征鼠疫菌僅有一個(gè)血清型和噬菌體型。我國(guó)根據(jù)鼠疫自然疫源地的地理、宿主、媒介及病原體的生物學(xué)特征將其分為18個(gè)生態(tài)型，它們分布于我國(guó)不同類型的鼠疫自然疫源地。目前，通過(guò)采用DFRs、SNP、IS、MLVA、PFGE等分子生物學(xué)方法，可以獲得我國(guó)不同疫源地鼠疫菌之間的遺傳學(xué)差異特征。（二）來(lái)源鼠疫是一種自然疫源性疾病。由于世界各地存在許多自然疫源地，我國(guó)也發(fā)現(xiàn)有11個(gè)類別的鼠疫自然疫源地，因此，野鼠鼠疫將長(zhǎng)期持續(xù)存在。浙江省屬于我國(guó)11個(gè)類別鼠疫自然疫源地之一的南方黃胸鼠家鼠鼠疫自然疫源地，但自1954年起未再發(fā)生過(guò)人間和動(dòng)物間鼠疫的流行。人間鼠疫的流行，通常是直接在鼠疫自然疫源地中因接觸染疫動(dòng)物或蚤類而造成的散發(fā)或暴發(fā)流行。大流行多見(jiàn)于家鼠間的鼠疫動(dòng)物病和人與人間的直接接觸傳播。在不同的地區(qū)，由于鼠疫宿主的不同，鼠疫的流行存在地區(qū)性、季節(jié)性和周期性。同時(shí)，鼠疫流行還受自然和社會(huì)等因素的影響。鼠疫菌是最早被使用的生物戰(zhàn)劑之一。在抗日戰(zhàn)爭(zhēng)中，日軍曾使用過(guò)這種生物戰(zhàn)劑，并造成我國(guó)某些地區(qū)為鼠疫疫源地。我省寧波、衢州、義烏等地的鼠疫疫源地，就是由于1940—1948年間，日軍將鼠疫菌作為細(xì)菌戰(zhàn)劑而人為造成的“植入型”疫源地。1984年，耶爾森和北里柴三郎首次從香港的鼠疫死亡病例體內(nèi)分離到鼠疫菌。2004年第二版《伯杰氏分類細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》將鼠疫菌分類為細(xì)菌域（Bacteria）、變形菌門（Proteobacteria）、γ-變形菌綱（Gammaproteobacteria）、腸桿菌目（Enterobacteriales）、腸桿菌科（Enterobacteriaceae）、耶爾森菌屬（Yersinia）、鼠疫耶爾森菌種（Yersiniapestis）。（三）傳染性鼠疫是一種自然疫源性疾病，主要發(fā)生在鼠疫自然疫源地的嚙齒類動(dòng)物之間。目前，世界上已發(fā)現(xiàn)有300多種脊椎動(dòng)物可以自然感染鼠疫，其中最主要的傳染源為嚙齒類動(dòng)物、兔形目動(dòng)物。這些動(dòng)物也是鼠疫菌的儲(chǔ)存宿主。其他如貓、羊、兔、駱駝、狼、狐等也可能成為本病的傳染源。我國(guó)已發(fā)現(xiàn)有87種染疫動(dòng)物，其中嚙齒類53種、兔形目5種、食蟲類5種、食肉類12種、偶蹄目9種、鳥類3種。腺鼠疫病人在未形成敗血癥時(shí)，除非淋巴結(jié)破潰，否則病原體不能排出體外，故不能起到傳染源作用。而肺鼠疫病人則是人間鼠疫的重要傳染源。（四）傳播途徑自然感染途徑鼠疫的傳播途徑主要有三種：媒介蚤類叮咬；空氣傳播；接觸傳播，即人類接觸染疫動(dòng)物被其寄生蚤叮咬而感染鼠疫。肺鼠疫患者呼吸道分泌物種含有大量鼠疫菌，通過(guò)呼吸、咳嗽時(shí)將鼠疫菌排入周圍空氣中，形成細(xì)菌微粒及氣溶膠，可以造成周圍人群的肺鼠疫流行。人類通過(guò)獵捕、宰殺、剝皮及食肉等方式直接接觸疫染動(dòng)物時(shí)，鼠疫菌可以通過(guò)手或上肢的微小創(chuàng)口直接進(jìn)入，或人取食未充分煮熟的染疫獸肉而感染。非自然感染途徑鼠疫實(shí)驗(yàn)室人員由于防護(hù)不嚴(yán)、操作不當(dāng)和實(shí)驗(yàn)室事故，可通過(guò)吸入、銳器刺傷等途徑感染鼠疫。在臨床就診時(shí)，未及時(shí)發(fā)現(xiàn)和診斷肺鼠疫病人，未采取防護(hù)措施，也可能造成陪護(hù)人員或醫(yī)務(wù)人員的直接感染。（五）易感性人類對(duì)鼠疫普遍易感，沒(méi)有天然免疫力。人類在流行病學(xué)上表現(xiàn)出差異與接觸傳染源的機(jī)會(huì)和頻次有關(guān)。鼠疫流行有明顯的季節(jié)性，與鼠疫自然疫源地的地理?xiàng)l件、宿主動(dòng)物及其媒介蚤類的生態(tài)學(xué)特征有密切關(guān)系。通常，動(dòng)物間鼠疫發(fā)生在前，人類鼠疫流行在后，而且基本上是在鼠疫自然疫源地內(nèi)發(fā)生的。（六）潛伏期鼠疫的潛伏期很短，多數(shù)為2~3d，個(gè)別病例可達(dá)到9d。（七）劑量—效應(yīng)關(guān)系鼠疫菌屬于高致病性微生物，含有4種毒力因子（F1，VW，Pst，Pgm）。不同鼠疫自然疫源地來(lái)源的鼠疫菌毒力也不完全相同。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，無(wú)論何種品系的小白鼠對(duì)鼠疫菌均敏感。用強(qiáng)毒菌皮下接種小鼠的LD50在1~104cfu范圍內(nèi)，而在大量感染的情況下，病程進(jìn)展極快，發(fā)病后數(shù)小時(shí)即可導(dǎo)致死亡。其中，我國(guó)青藏高原型鼠疫菌皮下接種藏系綿羊的系數(shù)為3.5×102，靜脈接種3.9×103可以導(dǎo)致藏系綿羊迅速發(fā)病及死亡。（八）致病性鼠疫菌侵入人體之后，臨床主要表現(xiàn)為全身中毒癥狀，并在心血管、淋巴系統(tǒng)和實(shí)質(zhì)性臟器出現(xiàn)特有的出血性炎癥及脂肪變性。當(dāng)人類被攜帶鼠疫菌的跳蚤叮咬后，通常叮咬的局部無(wú)明顯痕跡，鼠疫菌則沿著局部的淋巴管流向所屬的淋巴結(jié)，并在其中繁殖，引起淋巴結(jié)炎。感染的腺體極度腫脹，充血壞死，鼠疫菌可沖破局部的淋巴屏障，繼續(xù)沿著淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散，轉(zhuǎn)移到其他淋巴結(jié)。同時(shí)，鼠疫菌由淋巴結(jié)進(jìn)入血循環(huán)，引起敗血癥和繼發(fā)性鼠疫肺炎（肺鼠疫）。原發(fā)性肺鼠疫是經(jīng)呼吸道飛沫傳播而發(fā)病，肺泡及支氣管內(nèi)有含有鼠疫菌的血性滲出物，肺門淋巴結(jié)有腫脹、充血及出血。（九）變異性不同鼠疫自然疫源地的鼠疫菌的編碼序列、重復(fù)序列和插入序列均存在著一定的差異。受插入序列的影響，鼠疫菌基因組可以頻繁出血重排、倒置和移位；同時(shí)，也可以明確改變其生化表性特征，包括對(duì)各種糖類的酵解和代謝能力。（十）穩(wěn)定性（1）鼠疫菌在自然環(huán)境中不穩(wěn)定，不形成芽孢。它在有變形菌、大腸桿菌和其他腐敗菌繁殖的材料中很快死亡。鼠疫菌對(duì)寒冷的抵抗力較強(qiáng)，在-30℃時(shí)仍然可以存活。（2）鼠疫菌對(duì)化學(xué)消毒劑敏感，含氯消毒劑和甲醛都有良好的消毒作用，用量和時(shí)間與其他敏感細(xì)菌無(wú)異。同時(shí)，75%乙醇、常規(guī)紫外線照射也具有直接的殺滅作用。（3）含有鼠疫菌的培養(yǎng)物或污染物品，經(jīng)20min高壓滅菌后可以完全被殺滅。（十一）預(yù)防和治療（1）在疫源地內(nèi)避免直接接觸不明原因的病死動(dòng)物；在疫區(qū)做好個(gè)人防護(hù)，避免接觸有臨床癥狀的病人（尤其是肺鼠疫病人）或疑似病人，避免被蚤類叮咬；實(shí)驗(yàn)室人員在開展相應(yīng)的檢測(cè)工作時(shí)，做好個(gè)人防護(hù)并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。按照上述要求完全可以避免感染鼠疫。（2）我國(guó)目前使用的鼠疫疫苗是EV活疫苗。這種疫苗對(duì)鼠疫有一定的預(yù)防保護(hù)作用，可以減緩疾病過(guò)程，為治療爭(zhēng)取時(shí)間。但這種疫苗有以下缺點(diǎn)：①接種疫苗后仍可能發(fā)病；②對(duì)感染肺鼠疫的患者沒(méi)有保護(hù)作用；③保護(hù)時(shí)間較短而需要多次接種；④免疫產(chǎn)生的抗體與感染無(wú)法區(qū)分。因此，在我國(guó)的鼠疫防治規(guī)定中已經(jīng)取消了接種疫苗的要求。根據(jù)浙江省已有60多年未發(fā)生鼠疫的實(shí)際情況，決定本實(shí)驗(yàn)室所有工作人員暫不進(jìn)行鼠疫疫苗的接種。當(dāng)發(fā)生實(shí)驗(yàn)室意外、有感染危險(xiǎn)時(shí)，擬采用投藥方式進(jìn)行預(yù)防。（3）治療參照中華人民共和國(guó)原衛(wèi)生部于2011年1月28日發(fā)布的《鼠疫診療方案（試行）》。首選鏈霉素，推薦劑量為第1日肌肉注射鏈霉素4~6g/d，首次2.0g肌肉注射，以后每4~6h肌肉注射0.5~1.0克/次。對(duì)于不能使用鏈霉素者，可換用環(huán)丙沙星，使用常規(guī)治療劑量的2倍。對(duì)于有嚴(yán)重疾病表現(xiàn)者，加用強(qiáng)心和利尿劑，以緩解鼠疫菌釋放的毒素對(duì)心、腎功能的影響。治療可在排除鼠疫診斷時(shí)停止，如診斷成立，則直到體溫恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)室檢查陰性，酌減低劑量繼續(xù)用藥3d。采取以上措施后，可阻止受到意外感染的人員感染他人。到目前為止，在我國(guó)還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)耐藥菌株。在發(fā)生嚴(yán)重感染危險(xiǎn)時(shí)，使用鏈霉素、環(huán)丙沙星等；一般感染危險(xiǎn)可使用復(fù)方新諾明（SMZ）。使用一般細(xì)菌感染的常規(guī)治療劑量，有較為可靠的阻斷發(fā)病的效果。（十二）事故分析（1）實(shí)驗(yàn)室本身事故：本中心的BSL-2及BSL-3實(shí)驗(yàn)室中尚未發(fā)生過(guò)鼠疫耶爾森菌事故，目前也無(wú)野生的鼠疫菌株。（2）國(guó)內(nèi)外相關(guān)實(shí)驗(yàn)室有在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作鼠疫菌感染人的事例。（3）理論上，重組DNA技術(shù)可以把鼠疫菌的毒力因子轉(zhuǎn)移到其他細(xì)菌中，也可以在鼠疫菌中引入其他致病菌的毒力因子，從而產(chǎn)生出新的具有不同病原菌性質(zhì)的致病菌，可能會(huì)改變菌株原有的侵襲力、侵襲途徑、致病力等，因而可能會(huì)擴(kuò)大原有的宿主范圍。但這種操作具有較高的難度和技術(shù)要求，目前也尚未見(jiàn)到相關(guān)報(bào)道。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與風(fēng)險(xiǎn)控制(一)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)1.實(shí)驗(yàn)活動(dòng)內(nèi)容及所操作病原微生物的濃度（1）一般操作的濃度和劑量。對(duì)鼠疫菌進(jìn)行涂片、分離培養(yǎng)等常規(guī)操作時(shí)，標(biāo)本常為污染的組織、血液、痰液、皮膚滲出物、血清等。這些標(biāo)本中不含或僅含有極少量的鼠疫菌，因此在BSL-2實(shí)驗(yàn)室中即可進(jìn)行，采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施，一般不會(huì)引起污染或感染。（2）標(biāo)本濃縮操作的濃度和劑量。當(dāng)需要對(duì)鼠疫菌進(jìn)行質(zhì)?；蛉旧wDNA提取、或蛋白質(zhì)提取、菌株保存等需要細(xì)菌量較大時(shí)，一般操作使用的細(xì)菌濃度在109~1010以下，通常少于1mL。針對(duì)這些操作，應(yīng)在BSL-3實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。2.鼠疫菌分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程（以下過(guò)程應(yīng)在相應(yīng)等級(jí)實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行）（1）操作過(guò)程。對(duì)于新鮮材料（如血液、淋巴液、痰、膿液、菌種）可用接種環(huán)直接取材，涂于赫氏消化液培養(yǎng)基上，按三段法劃線。污染或腐敗材料接種于(1：20萬(wàn)~1：10萬(wàn))龍膽紫赫氏消化液溶血培養(yǎng)基，均置28℃溫箱培養(yǎng)。在24~96h內(nèi)每日觀察，發(fā)現(xiàn)具有鼠疫菌典型形態(tài)的菌落，及時(shí)挑取可疑單個(gè)菌落進(jìn)行純分離，或進(jìn)行鼠疫噬菌體裂解試驗(yàn)。已接種的培養(yǎng)基需連續(xù)培養(yǎng)觀察7d，確認(rèn)無(wú)疑似鼠疫菌落出現(xiàn)時(shí)，并詳細(xì)記錄結(jié)果后，方可經(jīng)高壓滅菌后處理。（2）風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施（見(jiàn)表8-26）表8-26細(xì)菌分離培養(yǎng)過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施潛在風(fēng)險(xiǎn)因素發(fā)生可能性后果嚴(yán)重性控制措施殘余風(fēng)險(xiǎn)細(xì)菌培養(yǎng)接種環(huán)接種時(shí)易發(fā)生滴落、污染平皿外部或手部中度1.本項(xiàng)操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行2.使用接種環(huán)接種時(shí)，要注意避免粘取的液體材料過(guò)多，而發(fā)生滴落現(xiàn)象3.接種環(huán)不能接觸平皿外部，當(dāng)污染平皿外部或手部時(shí)，要立即用75%乙醇擦拭污染部位，并更換外層手套低(二)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)施BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部為負(fù)壓環(huán)境，可以防止出現(xiàn)意外事故時(shí)細(xì)菌隨人員出入擴(kuò)散到實(shí)驗(yàn)室外部的情況發(fā)生。BSL-3實(shí)驗(yàn)室的高校過(guò)濾器應(yīng)定期更換和檢測(cè)，可防止因?yàn)V器損壞造成細(xì)菌擴(kuò)散。凡涉及病原、送檢樣品裝入、取出、開包裝等操作，均在BSL-3實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。定期作無(wú)菌試驗(yàn)，檢查BSL-3實(shí)驗(yàn)室微生物操作安全狀況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部，包括生物安全柜臺(tái)面、工作臺(tái)面、地面、儀器表面等是否有病原菌的污染，并采取消毒措施。實(shí)驗(yàn)室實(shí)行終末消毒制度。2.儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)中主要使用的儀器設(shè)備包括生物安全柜、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、高壓滅菌器、移液器等。儀器設(shè)備的風(fēng)險(xiǎn)因素見(jiàn)表8-27。表8-27實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施儀器名稱潛在風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生可能性后果嚴(yán)重性控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)生物安全柜由于操作時(shí)快速移動(dòng)手臂，容易出現(xiàn)紊流或橫向氣流可能低度操作時(shí)動(dòng)作要緩慢，雙手盡可能避免橫向移動(dòng)。在開展實(shí)驗(yàn)之前，進(jìn)行相關(guān)技術(shù)操作培訓(xùn)。定期維護(hù)設(shè)備低離心機(jī)離心管破裂，或內(nèi)容物超過(guò)2/3刻度，導(dǎo)致樣品溢灑可能高度采用合格的產(chǎn)品，離心管內(nèi)容物不應(yīng)超過(guò)2/3刻度，進(jìn)行相關(guān)技術(shù)操作培訓(xùn)低培養(yǎng)箱電源短路；培養(yǎng)物污染外表面可能性低人員接觸污染嚴(yán)格規(guī)范操作，定期檢查低高壓滅菌器人員接觸高溫部位，發(fā)生燙傷可能性中等人員發(fā)生燙傷操作培訓(xùn)，做好個(gè)人防護(hù)低移液器樣品溢灑可能中度操作時(shí)鋪墊消毒毛巾，進(jìn)行相關(guān)技術(shù)操作培訓(xùn)低(三)人員1.實(shí)驗(yàn)室人員素質(zhì)浙江省疾病預(yù)防控制中心現(xiàn)有從事鼠疫實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的專業(yè)人員5人，均為高級(jí)職稱。所有人員均接受過(guò)微生物操作技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室安全的系統(tǒng)培訓(xùn)，并經(jīng)考核合格確認(rèn)適合現(xiàn)崗位工作，簽署知情同意書。2.生物安全及專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)本部門當(dāng)前及將來(lái)業(yè)務(wù)開展需要，組織制訂人員培訓(xùn)計(jì)劃。在常規(guī)微生物操作技術(shù)培訓(xùn)的基礎(chǔ)上，還應(yīng)進(jìn)行消防和預(yù)備狀態(tài)、化學(xué)品安全、生物危險(xiǎn)和傳染預(yù)防、救治、緊急醫(yī)學(xué)處理措施的培訓(xùn)。所有工作人員均應(yīng)熟悉病原微生物污染或割、刺傷等意外情況時(shí)所應(yīng)采取的處理措施，并通過(guò)理論和實(shí)際操作考核評(píng)估每個(gè)工作人員對(duì)提供的信息的理解力。實(shí)驗(yàn)室對(duì)所有新進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作的各類人員進(jìn)行上崗前安全知識(shí)培訓(xùn)和考核，考核結(jié)果作為上崗必備條件之一。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人從事高致病微生物工作多年，參加過(guò)多次現(xiàn)場(chǎng)疫情處理和各種實(shí)驗(yàn)室工作，曾在國(guó)家級(jí)相應(yīng)的微生物研究所接受過(guò)專門培訓(xùn)，熟悉鼠疫菌操作工作中易于發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，并有處理緊急事故的經(jīng)驗(yàn)。3.健康監(jiān)測(cè)和健康狀況評(píng)估實(shí)驗(yàn)室工作人員每年參加體檢，預(yù)留本底血清標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)室工作人員均應(yīng)做鏈霉素敏感試驗(yàn)，試驗(yàn)陽(yáng)性者不適宜從事鼠疫防止工作，需要調(diào)換其他工作崗位。4.實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)區(qū)須憑指紋，須得到相關(guān)部門和實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)，應(yīng)詳細(xì)登記出入時(shí)間，并保證兩名以上的人員同時(shí)進(jìn)入。人員風(fēng)險(xiǎn)及控制措施（見(jiàn)表8-28）表8-28人員風(fēng)險(xiǎn)及控制措施潛在風(fēng)險(xiǎn)因素發(fā)生可能性后果嚴(yán)重性控制措施實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平技術(shù)培訓(xùn)不足或操作不熟練導(dǎo)致誤操作嚴(yán)重實(shí)驗(yàn)人員需接受相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)并考核合格后方能上崗；定期進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)及演練人員健康水平實(shí)驗(yàn)人員身體狀況不佳或患有基礎(chǔ)疾病中實(shí)驗(yàn)室工作人員每年參加體檢，預(yù)留本底血清標(biāo)本；實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室前需測(cè)量體溫，體溫高于37℃者不能進(jìn)入未經(jīng)授權(quán)人員未經(jīng)授權(quán)人員進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)重進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室須得到相關(guān)部門和實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)，應(yīng)詳細(xì)登記出入時(shí)間，并保證兩名以上的人員同時(shí)進(jìn)入。(四)感染性材料1.感染性材料的運(yùn)輸鼠疫為法定管理的甲類傳染病。因此，感染性材料和菌種管理實(shí)行雙人雙鎖共同負(fù)責(zé)制，管理人員經(jīng)BSL-3實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)合格獲得上崗證后方能上崗。菌種管理實(shí)行全程控制（包括自動(dòng)監(jiān)控和影像監(jiān)控），包括樣品接收、菌種鑒定、包裝、運(yùn)輸、登記、使用、保存、銷毀等環(huán)節(jié)。離開實(shí)驗(yàn)室的細(xì)菌衍生株、細(xì)菌成分，以及不能高壓滅菌的物品要規(guī)定嚴(yán)格的處理和檢驗(yàn)程序。鼠疫菌的分離和培養(yǎng)方法成熟，可保證檢出標(biāo)本中少至1個(gè)活菌。只要保證足夠的抽樣比例，就可以保證離開實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本與細(xì)菌成分的安全性。感染性材料運(yùn)輸過(guò)程中風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施（見(jiàn)表8-29）表8-29感染性材料運(yùn)輸過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施過(guò)程潛在風(fēng)險(xiǎn)現(xiàn)有風(fēng)險(xiǎn)控制措施改進(jìn)措施常規(guī)操作誤用、盜用、惡意使用接收菌種管自然破裂、溢出等/凡涉及病原、送檢樣品裝入、取出、開包裝等操作，都應(yīng)在BSL-3的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，操作結(jié)束后及時(shí)消毒嚴(yán)格按照管理規(guī)定操作使用鼠疫菌DNA提取/按照樣品比例10%抽樣作無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，連續(xù)觀察7d，確認(rèn)無(wú)鼠疫菌生長(zhǎng)，消毒外包裝，方可拿出實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照管理規(guī)定操作運(yùn)輸按要求包裝并通過(guò)民航運(yùn)輸包裝不符合，用公共交通工具運(yùn)輸樣品或菌種3層包裝，按照相關(guān)規(guī)定使用專車或民航運(yùn)輸嚴(yán)格按照管理規(guī)定內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)室之間的轉(zhuǎn)運(yùn)平皿或試管滑落，樣品包裝不符要求樣品和菌種經(jīng)3層包裝，使用帶蓋容器放入樣品轉(zhuǎn)運(yùn)箱內(nèi)進(jìn)行內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)嚴(yán)格按照管理規(guī)定操作保存保存于菌毒種庫(kù)階段工作結(jié)束后，未及時(shí)銷毀培養(yǎng)物工作結(jié)束時(shí)，及時(shí)銷毀培養(yǎng)物，保存菌種送菌毒種保存庫(kù)，菌毒種保存庫(kù)實(shí)行雙人雙鎖，自動(dòng)監(jiān)控和影像全程監(jiān)控嚴(yán)格按照管理規(guī)定操作（五）個(gè)人防護(hù)用品風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施（1）防護(hù)裝備的防護(hù)部位主要包括眼睛、頭面部、軀體、手、足，以及呼吸道。其裝備包括護(hù)目鏡、N95口罩、一次性帽子、防護(hù)服（棉布分體服、連體防護(hù)服）、乳膠手套、塑料手套、實(shí)驗(yàn)室專用鞋、鞋套等。（2）個(gè)人防護(hù)用品應(yīng)符合國(guó)家規(guī)定的相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，使用前應(yīng)仔細(xì)檢查，不使用標(biāo)志不清、過(guò)期、破損的防護(hù)用品。（3）在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，按不同級(jí)別的防護(hù)要求選擇適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備及類型。（4）工作人員要充分了解其實(shí)驗(yàn)工作的性質(zhì)和特點(diǎn)，并正確使用個(gè)人防護(hù)裝備。（六）消毒方法選擇與感染性廢棄物處理的風(fēng)險(xiǎn)因素及控制措施（1）實(shí)驗(yàn)室所選擇的消毒劑為0.5%次氯酸鈉，其應(yīng)在使用時(shí)配置，并填寫配置記錄。75%乙醇的使用范圍為皮膚消毒和工作臺(tái)面、儀器設(shè)備消毒。（2）實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的感染性廢物應(yīng)放在裝廢液的容器內(nèi)，經(jīng)次氯酸鈉消毒液作用一定時(shí)間后，再進(jìn)行高壓滅菌處理。高壓滅菌處理后的感染性廢物將放入帶有特殊標(biāo)識(shí)的袋子，記錄后轉(zhuǎn)交給指定的醫(yī)療垃圾處理部門。（七）實(shí)驗(yàn)室意外事故風(fēng)險(xiǎn)及處理（1）常規(guī)意外。如水、電、火的意外處理按照BSL-3實(shí)驗(yàn)室《安全手冊(cè)》的規(guī)定和應(yīng)急措施進(jìn)行處理，如使用雙路電源，以備電力中斷時(shí)使用；夜間及非工作時(shí)間應(yīng)安排人員值班，檢查儀器及實(shí)驗(yàn)室用電情況。（2）特殊意外。在微生物操作過(guò)程中出現(xiàn)的意外事故，例如皮膚損傷、離心管破裂、菌液溢灑等，應(yīng)按照所制訂的應(yīng)急處理預(yù)案進(jìn)行處理。BSL-3實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行培訓(xùn)，并組織相應(yīng)的應(yīng)急演練。（3）BSL-3實(shí)驗(yàn)室對(duì)所有樣本及菌種的保管，采用雙人雙鎖、全程監(jiān)控，以防止發(fā)生泄露或被盜。三、綜合評(píng)估結(jié)論（1）原衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》中，鼠疫菌被列為生物危害第二類的高致病性病原微生物。鼠疫菌能夠通過(guò)呼吸道傳播，鏈霉素為鼠疫治療的特效抗生素。（2）按照《人間傳染的病原微生物名錄》規(guī)定，從監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)采集的